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表达绿色荧光蛋白的马立克氏病病毒CVI988/Rispens株重组病毒的构建

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表达绿色荧光蛋白的马立克氏病病毒CVI988/Rispens株重组病毒的构...

猪源干扰素刺激基因PPBP荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会

作者：张雪莲范伟兴钱莺娟陈德胜陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

提取马立克氏病病毒Ⅰ型疫苗毒株CV1988/Rispens的总DNA为模板,利用PCR技术扩增出病毒生长非必需的US2基因(约2.0kb).并克隆入T-easy载体获得载体pGUS2。将CMV启动子和增强子控制的含绿色荧光蛋白(GFP)基因的表达盒克隆入pGUS2载体US2... 详细信息

提取马立克氏病病毒Ⅰ型疫苗毒株CV1988/Rispens的总DNA为模板,利用PCR技术扩增出病毒生长非必需的US2基因(约2.0kb).并克隆入T-easy载体获得载体pGUS2。将CMV启动子和增强子控制的含绿色荧光蛋白(GFP)基因的表达盒克隆入pGUS2载体US2基因中,成功构建了含GFP基因的转移质粒载体pGUS2GFP。用脂质体将其与CV1988株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)细胞.用96孔板稀释法得到纯化的表达绿色荧光蛋白的重组CV1988病毒株rCVIGFP。

关键词：马立克氏病病毒 US2基因绿色荧光蛋白重组病毒

来源： cnki会议评论

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中国动物传染病学报 2018年第3期26卷 28-33页

作者：王飞飞刘珂郇贝丽魏建超邵东华李蓓蓓邱亚峰石元元钱莺娟马志永 JUNG Yong-Sam 南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

根据猪源干扰素刺激基因PPBP(pro-platelet basic protein)基因全长序列,使用引物设计软件Primer Premier5.0设计合成特异性引物,经过PCR扩增,将基因扩增的片段连接到相应的载体上,成功构建重组质粒p3XFLAG-CMV-7.1-PPBP。重组质粒经过... 详细信息

根据猪源干扰素刺激基因PPBP(pro-platelet basic protein)基因全长序列,使用引物设计软件Primer Premier5.0设计合成特异性引物,经过PCR扩增,将基因扩增的片段连接到相应的载体上,成功构建重组质粒p3XFLAG-CMV-7.1-PPBP。重组质粒经过筛选、鉴定以及纯化后,经10倍系列稀释作为质控样品,用于实时荧光定量PCR中PPBP标准曲线的构建,并检测重复性、灵敏性和特异性。结果显示标准曲线线性关系R2>0.99;特异性试验中也能检测到PPBP扩增曲线;组间和组内变异系数均小于5%。使用建立的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测PRRSV感染组织和未感染组织中PPBP的表达情况,能够检测出组织中PPBP的含量存在差异。本研究初步建立了检测猪PPBP基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR的方法,为后续猪传染性疾病和猪PPBP之间相互关系的研究提供一个特异灵敏的检测和手段。

关键词：促血小板碱性蛋白 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR

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非洲猪瘟自然弱毒株演变进程

中国动物检疫 2021年第3期38卷 68-73页

作者：戈胜强王振忠吕艳屈海龙张潇月胡永新钱莺娟吴晓东王志亮中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 南京农业大学教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095 山东农业大学山东泰安271001

自2018年非洲猪瘟(African swine fever,ASF)传入中国以来疫情得到了有效控制。但2021年以后,我国的ASF流行情况出现了新的变化,临床中出现了“自然变异株”。这些毒株可能导致感染后临床症状不典型,容易与其他疫病混淆等问题。这与国... 详细信息

自2018年非洲猪瘟(African swine fever,ASF)传入中国以来疫情得到了有效控制。但2021年以后,我国的ASF流行情况出现了新的变化,临床中出现了“自然变异株”。这些毒株可能导致感染后临床症状不典型,容易与其他疫病混淆等问题。这与国外的流行演变规律一致,即当ASF在一个国家或地区流行较长时间后,其临床表现将由急性发病转变为缓慢发病或出现新的临床表现。经过多年的观察积累,国外已经对该病毒的流行规律特别是自然弱毒株的演变进程有了大量记载,但国内目前尚无这方面的描述。为此,就ASF自然弱毒株的演变进程进行综述,从而提出加强血清学诊断产品研发、加快产业化报批进程、适时开展血清学监测追溯等建议,以期为我国ASF科学防控提供参考。

关键词：非洲猪瘟红细胞吸附活性自然弱毒株

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非洲猪瘟病毒细胞传代致弱株研究进展

中国动物检疫 2021年第6期38卷 76-81页

作者：戈胜强张潇月吕艳王振忠韩乃君张永强钱莺娟蔡玉梅吴晓东王志亮中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 山东农业大学山东泰安271001 南京农业大学教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095

目前非洲猪瘟(African swine fever,ASF)仍无疫苗可用,使得该病防控难度较高。早期非洲猪瘟病毒(ASFV)的弱毒株研制主要通过细胞传代方式。经过国外多年研究积累,现已经在多种细胞上获得毒力致弱毒株。细胞传代致弱株是ASF疫苗研究的候... 详细信息

目前非洲猪瘟(African swine fever,ASF)仍无疫苗可用,使得该病防控难度较高。早期非洲猪瘟病毒(ASFV)的弱毒株研制主要通过细胞传代方式。经过国外多年研究积累,现已经在多种细胞上获得毒力致弱毒株。细胞传代致弱株是ASF疫苗研究的候选方向之一,且对于基因敲除弱毒疫苗研究具有很好的指导借鉴作用。国内目前尚无这方面的调查研究,为此对国际上ASFV细胞传代致弱毒株相关研究进行整理,分析其传代致弱规律,以期为我国ASFV细胞适应株研究及新型疫苗研制提供参考。

关键词：非洲猪瘟细胞传代弱毒株

非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗株的构建和免疫保护特性

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中国兽医学报 2019年第8期39卷 1421-1427页

作者：张艳艳陈腾张静远齐宇缪发明薄宗义王立冬郭晓宇周鑫韬杨金梅王晓虎高玉龙汪春雨鲍晨沂米立娟孙雪霏冯娜杨金金王承宇万忠海李记平孟轲音田多李楠王述超王颖张菲张锦霞蒋依倩刘晔张守峰张中洋钱莺娟朱鸿飞高玉伟陈鸿军李金祥扈荣良军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所吉林长春130122 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 吉林和元生物工程股份有限公司吉林松原138000 广东省农业科学院动物卫生研究所广东广州510640 南京农业大学动物医学学院江苏南京210095 中国农业科学院北京100081

以我国首例非洲猪瘟疫情中分离的流行毒株(SY18)为亲本株构建了多基因家族(MGF)基因和CD2v基因缺失的非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗候选株,针对基因缺失株的安全性和免疫保护效果进行了特性研究。结果显示,MGF和CD2v双基因缺失株(ASFV SY18... 详细信息

以我国首例非洲猪瘟疫情中分离的流行毒株(SY18)为亲本株构建了多基因家族(MGF)基因和CD2v基因缺失的非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗候选株,针对基因缺失株的安全性和免疫保护效果进行了特性研究。结果显示,MGF和CD2v双基因缺失株(ASFV SY18ΔMGF/ΔCD2v)对猪安全,接种猪能够100%抵抗亲本强毒株SY18株的攻击,对照猪全部死亡;说明该毒株可作为非洲猪瘟疫苗候选株。

关键词：非洲猪瘟病毒基因缺失 MGF基因 CD2v基因疫苗候选株安全性免疫保护