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诺美孕酮促进大鼠子宫内膜异位症细胞凋亡及其作用机制

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中国药理学通报 2012年第3期28卷 425-429页

作者：郝树芳周娴颖谢淑武周洁芸郭湘洁李钊桂幼伦朱伟杰朱焰暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所广东广州510632 上海市计划生育科学研究所国家人口和计划生育委员会计划生育药具重点实验室生殖药理组上海200032 复旦大学上海200032

目的探讨诺美孕酮促进实验性大鼠子宫内膜异位症模型细胞凋亡及其作用机制。方法外科手术法建立大鼠子宫内膜异位症模型;HE染色观察异位内膜病理组织学改变;ELISA测定血清中抗子宫内膜抗体(EMAb)水平;West-ern blot检测异位内膜组织中Bc... 详细信息

目的探讨诺美孕酮促进实验性大鼠子宫内膜异位症模型细胞凋亡及其作用机制。方法外科手术法建立大鼠子宫内膜异位症模型;HE染色观察异位内膜病理组织学改变;ELISA测定血清中抗子宫内膜抗体(EMAb)水平;West-ern blot检测异位内膜组织中Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达情况。结果诺美孕酮(0.5、1.5、15 ***-1)异位内膜萎缩,间质疏松,腺体数目明显减少,腺腔萎缩;诺美孕酮呈剂量依赖性地降低异位内膜厚度和EMAb的浓度;诺美孕酮(0.5、1.5、15 ***-1)异位内膜组织中Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达升高、Bcl-2蛋白表达降低。结论诺美孕酮(0.5、1.5、15 ***-1)可促进大鼠子宫异位内膜细胞凋亡,其作用机制可能与降低EMAb水平、上调Bax和下调Bcl-2蛋白表达、激活细胞凋亡的内源性途径启动因子Caspase-9蛋白、激活执行因子Caspase-3蛋白表达有关。

关键词：诺美孕酮子宫内膜异位症细胞凋亡 Bcl-2 Bax Caspase-9 Caspase-3

孕三烯酮阴道环小型猪体内药动学和阴道刺激性研究

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孕三烯酮阴道环小型猪体内药动学和阴道刺激性研究

中国药理学会第九届全国基础与临床生殖药理学术研讨会

作者：郭湘洁李钊谢淑武桂幼伦周洁芸周娴颖朱焰上海市计划生育科学研究所生殖药理研究组国家人口和计划生育委员会计划生育药具重点实验室上海生殖健康药具工程技术研究中心

目的:建立快速灵敏测定巴马小型猪血浆中孕三烯酮的血药浓度的方法,同时考察孕三烯酮阴道环对小型猪阴道的刺激反应。方法:以巴马小型猪为实验动物,通过手术阴道内放置阴道环,分别于放环前及放环后不同时间点前腔静脉取血置肝素钠采血管... 详细信息

目的:建立快速灵敏测定巴马小型猪血浆中孕三烯酮的血药浓度的方法,同时考察孕三烯酮阴道环对小型猪阴道的刺激反应。方法:以巴马小型猪为实验动物,通过手术阴道内放置阴道环,分别于放环前及放环后不同时间点前腔静脉取血置肝素钠采血管中,取上层血浆置-70℃保存待测。在给药结束时每组各解剖3只,剩余5只巴马小型猪恢复14天时解剖,分别观察给药局部阴道有无红肿、充血、糜烂等刺激性反应,取巴马小型猪给药部位阴道作病理组织学检查,评价放置阴道环84天和恢复14天对巴马小型猪给药局部阴道刺激反应和恢复程度。血浆样品采用环己烷液液萃取方法处理,内标采用孕二烯酮,色谱柱为Agilent ZORBAXExtend-C18（2.1×50mm,5μm）,流动相为水（含0.1%甲酸）-乙腈（含0.1%甲酸）,梯度洗脱,流速为0.45mL·min﹣1,柱温为35℃。质谱检测采用ESI正离子模式,扫描方式为多重反应监测（MRM）模式,选择检测离子反应对为m/z309.2→241.1（孕三烯酮）,m/z311.2→109.1（孕二烯酮）,测定巴马小型猪放置人用阴道环84天及取出阴道环14天内血浆中孕三烯酮的浓度。结果:孕三烯酮在0.1～10ng·m L-1浓度范围内线性良好（r=0.9999）,提取回收率均高于83.14%,日间、日内RSD均小于11.27%,专属性良好,在本实验涉及的条件下样品稳定。巴马小型猪放置孕三烯酮阴道环后平均放置后2h左右达峰值,峰浓度为3.853±1.331ng/ml;放置12周血药浓度较平稳,平均浓度为0.508±0.174ng/ml;取出阴道环后孕三烯酮消除很快,体内无蓄积。巴马小型猪放置阴道环84天及取出阴道环14天,肉眼观察给药局部阴道粘膜呈轻度炎症刺激反应,;组织学检查给药期和恢复期阴道也出现轻度炎症反应,肉眼观察和组织学检查结果结果相一致。结论:该测定方法准确、灵敏、专属性强,适用于临床前及临床上测定血浆中孕三烯酮的浓度及其药代动力学研究。放置阴道环给药84天的实验周期内,巴马小型猪体内孕三烯酮血药浓度稳定维持在一定水平范围内。巴马小型猪放置阴道环84天及取出阴道环14天,孕三烯酮阴道环对巴马小型猪阴道均出现轻度炎症反应。讨论:孕三烯酮已在临床应用多年,其抗子宫内膜异位增生的有效性已得到肯定的评价和积极的实践。本次小型猪药代动力学实验结果表明孕三烯酮阴道环能平稳、缓慢释放孕三烯酮,可用于治疗子宫内膜异位症。巴马小型猪放置阴道环84天及取出阴道环14天的给药局部阴道粘膜均有轻度炎性反应,推测这种轻度的炎性反应与猪阴道常见自发性炎症有关,而与孕三烯酮阴道环无明显关联性。

关键词：孕三烯酮液质联用巴马小型猪血药浓度阴道刺激

新型左炔诺孕酮/炔雌醇复方避孕贴剂的家兔药代动力学研究

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生殖与避孕 2012年第12期32卷 805-813页

作者：谢淑武郭湘洁李钊吴树明杨明京夏敏桂幼伦曹霖朱焰上海市计划生育科学研究所生殖药理研究组国家人口与计划生育委员会计划生育药具重点实验室上海200032 润和生物医药科技(汕头)有限公司汕头515063

目的:探讨新型左炔诺孕酮(levonorgestrel,LNG)和炔雌醇(ethynylestradiol,EE)在家兔体内的药物动力学特征,评价多次给药后是否出现药物蓄积情况。方法:家兔在单次和多次给药及停止给药后不同时间点耳缘静脉采血,选择放射免疫分析(radio... 详细信息

目的:探讨新型左炔诺孕酮(levonorgestrel,LNG)和炔雌醇(ethynylestradiol,EE)在家兔体内的药物动力学特征,评价多次给药后是否出现药物蓄积情况。方法:家兔在单次和多次给药及停止给药后不同时间点耳缘静脉采血,选择放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)法测定各时间点各组家兔雌/孕激素的血药浓度,使用药物动力学软件计算各药物动力学参数并对其进行统计分析。结果:单次给药后受试贴剂低(10cm2)、中(20 cm2)和高剂量(40 cm2)组血清LNG峰浓度(Cmax)分别为1.04±0.12 ng/ml、2.42±0.60 ng/ml和4.90±1.39 ng/ml,3组间有显著差异(P0.05)。EE血药浓度-时间曲线下面积(AUC)分别为4.70±1.34 ***/ml、6.59±***/ml和16.59±2.33 ***/ml,中、高剂量组之间有显著差异(P0.05)。中剂量组血清EE浓度与Evra避孕贴剂的相比显著降低(P<0.05)。多次给药后LNG/EE避孕贴剂10 cm2组和20 cm2组在重复给药10次的过程中未出现LNG和EE血药浓度蓄积现象,Evra贴剂组在重复给药4次的过程中未出现LNG和EE血药浓度蓄积现象。结论:中剂量的LNG/EE避孕贴剂具有良好的避孕效果,同时其副作用可能小于Evra。

关键词：左炔诺孕酮(LNG) 炔雌醇(EE) 放射免疫分析方法(RIA) 药代动力学透皮贴剂

青蒿素衍生物对人子宫内膜癌(RL95-2)生长抑制的体内外研究

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青蒿素衍生物对人子宫内膜癌(RL95-2)生长抑制的体内外研究

中国药理学会第七届全国生殖药理学术交流会

作者：周洁芸郭湘洁谢淑武桂幼伦李钊周娴颖曹霖朱焰上海市计划生育科学研究所国家人口与计划生育委员会计划生育药具重点实验室生殖药理组

目的:研究青蒿素衍生物(SM1 051、SM1 052)对人子宫内膜癌(RL95-2)的体外和裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法 :(1)MTT法检测不同浓度青蒿素衍生物对细胞增殖抑制。(2)建立裸鼠人子宫内膜癌移植模型,并随机分成溶剂对照组、SM1051低...

目的:研究青蒿素衍生物(SM1 051、SM1 052)对人子宫内膜癌(RL95-2)的体外和裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法 :(1)MTT法检测不同浓度青蒿素衍生物对细胞增殖抑制。(2)建立裸鼠人子宫内膜癌移植模型,并随机分成溶剂对照组、SM1051低、高和SM1052低、高剂量组。两个治疗组分别每次腹腔注射2.5mk/kg和10mg/kg,3次/周,溶剂对照组腹腔注射给予等体积溶剂,连续给药4周后,处死动物,测量瘤体积变化和移植瘤的瘤质量,计算抑瘤率。结果 :6个不司浓度(0.3、1、3、12.5、25、30μmol)SM1051、SM1052作用RL95-2细胞48h后,IC50分别为:1 6.7±0.3μmol(CI:8.7～3 1.4μmol)、1 7.9±2.4μmol(CI:9.6～33.3μmol)。连续给药4周后,各给药前、后体重均无明显差异(P>0.05)。各组给药前、后肿瘤体积和瘤重如下:(1)溶剂对照组:给药前瘤体积为163.48±102.45 mm,给药后瘤体积为1730.25±1 169.52 mm,瘤重1.21±0.48g。(2)SM1051低剂量组:给药前瘤体积为1 73.29±74.51mm、给药后瘤体积为1 634.60±890.61 mm,瘤重为1.10±0.58 g。(3)SM1051高剂量组:给药前瘤体积为194.48±255.69 mm;给药后瘤体积为950.51±708.64 mm,瘤重0.59±0.48 g;(4)SM1052低剂量组:给药前瘤体积为1 89.10±121.50 mm;给药后瘤体积为754.1 8±588.22 mm,瘤重0.74±1.08g。(5)SM1052高剂量组:给药前瘤体积为140.28±70.71 mm;给药后瘤体积为522.06±330.85 mm;瘤重0.44±0.35 g。统计结果显示,与溶剂对照组相比,SM1052高剂量组瘤体积明显降低,体积增长率明显降低(P0.05)。结论 :SM1051、SM1052在体外对RL95-2细胞有较强的抑制作用,SM1 052对RL95-2裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用。

关键词：

母体接触双酚A对子代大鼠子宫和卵巢发育的影响

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母体接触双酚A对子代大鼠子宫和卵巢发育的影响

中国药理学会第七届全国生殖药理学术交流会

作者：周娴颖谢淑武周洁芸郭湘洁桂幼伦李钊曹霖朱焰复旦大学上海市计划生育科学研究所生殖药理研究组国家人口和计划生育委员会计划生育药具重点实验室上海市计划生育科学研究所生殖药理研究组

目的:研究在发育的不同阶段(妊娠期和哺乳期),通过母体接触BPA对大鼠子代子宫和卵巢发育的影响,找出BPA作用的敏感阶段和对子代子宫、卵巢基因表达的影响。方法:分别于母鼠妊娠期(D7-20天)和哺乳期(PNDl-21天)灌胃给予低(0.05mg/kg)、中...

目的:研究在发育的不同阶段(妊娠期和哺乳期),通过母体接触BPA对大鼠子代子宫和卵巢发育的影响,找出BPA作用的敏感阶段和对子代子宫、卵巢基因表达的影响。方法:分别于母鼠妊娠期(D7-20天)和哺乳期(PNDl-21天)灌胃给予低(0.05mg/kg)、中(0.5mg/kg)、和高剂量(2.5mg/kg)的BPA,并同时设置溶剂对照组和己烯雌酚(0.05mg/kg)阳性对照组。记录仔鼠的体重变化、阴道开口时间、并分别

关键词：

恶病质模型的构建及诺美孕酮对恶病质模型大鼠的影响研究

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恶病质模型的构建及诺美孕酮对恶病质模型大鼠的影响研究

第十二届全国基础与临床生殖药理暨出生缺陷防控与遗传咨询学术研讨会

作者：钟瑞华李国停杨文捷郭湘洁朱焰国家卫生健康委员会计划生育药具重点实验室上海生殖健康药具工程技术研究中心上海市生物医药技术研究院生殖药理组

目的:建立顺铂诱导的恶病质模型,探索诺美孕酮对大鼠体重及脂肪的影响。方法:将大鼠随机分成三组,每组9只,分别腹腔注射1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg的化疗药物顺铂,每天对大鼠进行称重,大鼠体重下降5%停止给予顺铂,给药时间最长为5天。确定... 详细信息

目的:建立顺铂诱导的恶病质模型,探索诺美孕酮对大鼠体重及脂肪的影响。方法:将大鼠随机分成三组,每组9只,分别腹腔注射1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg的化疗药物顺铂,每天对大鼠进行称重,大鼠体重下降5%停止给予顺铂,给药时间最长为5天。确定构建恶病质大鼠的剂量及给药时间。通过预先给予顺铂,筛选出对顺铂有反应的大鼠,随机分为空白组、模型对照组,甲地孕酮组(5、10mg/kg),诺美孕酮(2.5、5、10mg/kg),每组10只,给药方式为灌胃。大鼠给予甲地孕酮和诺美孕酮1周后,除空白组外,其他组腹腔注射顺铂,给药持续3天。给予顺铂期间,每天对大鼠进行称重,给予诺美孕酮11天后,大鼠进行麻醉取血处死。通过Image Pro Plus 6.0软件计算病理切片中大鼠腹股沟脂肪和附睾周围脂肪的横截面积及周长的变化。Western blot测定腹股沟脂肪细胞脂肪降解相关基因激素敏感性脂肪酶(hormone-sensitive lipase, HSL)、脂肪甘油三酯脂肪酶(adipose triglyceride lipase, ATGL),脂肪生成相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ (peroxisome proliferator activated receptor γ, PPARγ)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase FASN)、甾醇调节元件结合蛋白-1 (sterol regulatory element binding protein-1, SREBP-1)表达的变化。结果:给予2mg/kg的顺铂连续给药3天,能够构建大鼠恶病质模型。与模型组相比,2.5、5mg/kg诺美孕酮和10mg/kg的甲地孕酮能减轻顺铂诱导的恶病质大鼠的体重降低(p0.05)。诺美孕酮能够降低脂质降解基因HSL和ATGL在腹股沟脂肪的表达(p<0.05),增加脂质生成基因FASN、SREBP-1和PPARγ的表达(p<0.05)。结论:2mg/kg的顺铂连续腹腔给药3天能够构建大鼠恶病质的模型及诺美孕酮能够通过降低脂肪的萎缩改善顺铂诱导的恶病质大鼠的体重降低。

关键词：诺美孕酮恶病质顺铂脂肪

母鼠妊娠期接触双酚A对F1代卵巢发育的影响及作用机制研究

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母鼠妊娠期接触双酚A对F1代卵巢发育的影响及作用机制研究

中国药理学会第八届全国生殖药理学术研讨会

作者：周娴颖谢淑武桂幼伦周洁芸郭湘洁李钊曹霖朱焰上海市计划生育科学研究所生殖药理研究组国家人口利计划生育委员会计划生育药具重点实验室

目的:研究SD大鼠妊娠期接触双酚A(BPA)对F1代卵巢发育的影响及可能的作用机制。方法:母鼠妊娠期D7-20灌胃给予0.05、0.5、2.5mg/kg BPA,于F1代雌性大鼠出生后第30、60天(分别相当于人青春期和成年)处死仔鼠,观察F1代大鼠卵巢组织学变化... 详细信息

目的:研究SD大鼠妊娠期接触双酚A(BPA)对F1代卵巢发育的影响及可能的作用机制。方法:母鼠妊娠期D7-20灌胃给予0.05、0.5、2.5mg/kg BPA,于F1代雌性大鼠出生后第30、60天(分别相当于人青春期和成年)处死仔鼠,观察F1代大鼠卵巢组织学变化,并利用高通量基因芯片技术检测F1代大鼠卵巢炎症反应和自身免疫mRNA基因表达。结果:妊娠期母鼠经口摄入BPA0.05～2.5mg/kg可导致F1代大鼠青春期前和成年后卵巢组织出现典型的多囊样改变,表现为囊状扩张卵泡内卵母细胞或放射冠消失、颗粒细胞层数减少、排列疏松、且囊状扩张卵泡比例随剂量线性增加,与临床PCOS特征相似;其中BPA 2.5mg/kg可诱导青春期前和成年仔鼠卵巢囊性卵泡比例明显增加(P<0.05)。高通量基因芯片筛选结果显示BPA可明显干扰F1代大鼠卵巢炎症反应与自身免疫信号通路的基因表达,引起IL6、TNF-α、Nfkb1等炎症因子基因的表达异常升高。结论:母鼠妊娠期接触BPA可能诱导F1代青春期前和成年后卵巢出现多囊样病变,其作可能与卵巢炎症信号通路的活跃和炎症因子的异常表达有关。

关键词：双酚A F1代卵巢多囊样病变炎症信号通路 IL6 TNF-α

左炔诺孕酮口崩片的人体药代动力学及相对生物利用度研究

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生殖与避孕 2012年第2期32卷 92-98页

作者：郭湘洁李钊桂幼伦朱忠义赵宪平李雪宁曹霖朱焰．上海市计划生育科学研究所生殖药理组国家人口计生委计划生育药具重点实验室上海200032 上海信谊康捷药业有限公司上海201419 上海复旦大学附属中山医院药物临床试验机构上海200032

目的:比较左炔诺孕酮口崩片和市售口服片的人体药代动力学及相对生物利用度。方法:20名健康女性志愿者随机双交叉单剂量服用左炔诺孕酮口崩片和市售口服片,剂量均为0.75 mg,分别于服药前和服药后72 h内不同时间点抽取静脉血,清洗期为2周... 详细信息

目的:比较左炔诺孕酮口崩片和市售口服片的人体药代动力学及相对生物利用度。方法:20名健康女性志愿者随机双交叉单剂量服用左炔诺孕酮口崩片和市售口服片,剂量均为0.75 mg,分别于服药前和服药后72 h内不同时间点抽取静脉血,清洗期为2周,以放射免疫分析(radioimmuno-assay,RIA)法测定血清中左炔诺孕酮的浓度,并利用SAS软件计算口崩片与市售口服片的药代动力学和相对生物利用度。结果:采用RIA测定左炔诺孕酮的最低检测限为10 pg/ml,低、中、高(300 pg/ml、2 000 pg/ml、6 000 pg/ml)3种浓度左炔诺孕酮标准质控血清的日内精密度分别为12.4%、9.3%、3.1%(n=5),日间精密度分别为4.3%、11.7%、5.7%(n=5)。口崩片和市售口服片的主要药代动力学参数分别为:tmax1.6±0.2 h、tmax1.7±0.3 h;Cmax6.2±0.8 ng/ml、Cmax6.5±1.0 ng/ml;AUC0～72 h 85.5±24.4 ***/ml、AUC0～72 h 90.8±27.1 ***/ml;AUC0-inf96.8±27.9 ***/ml、AUC0-inf 101.2±30.8 ***/ml;t1/2 25.3±3.5 h、t1/224.2±3.1 h。口崩片的AUC0～72 h、AUC0-inf和Cmax的90%置信区间分别为市售口服片相应参数的87.72%～101.87%、89.01%～103.73%和89.80%～101.75%。口崩片tmax与市售口服片相比无显著差异(P>0.05)。口崩片的相对生物利用度为96.1±18.3%。结论:建立的分析方法准确灵敏,可用于左炔诺孕酮血药浓度的测定;左炔诺孕酮口崩片与市售口服片的生物利用度无显著性差异,2种制剂具有生物等效性。

关键词：左炔诺孕酮口崩片放射免疫分析方法药动学生物利用度生物等效性

基于P450酶的诺美孕酮与紫杉醇/顺铂相互作用的研究

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基于P450酶的诺美孕酮与紫杉醇/顺铂相互作用的研究

第十二届全国基础与临床生殖药理暨出生缺陷防控与遗传咨询学术研讨会

作者：郭湘洁李钊李国停钟瑞华杨文捷谢淑武朱焰国家卫生健康委员会计划生育药具重点实验室上海生殖健康药具工程技术研究中心上海市生物医药技术研究院生殖药理组

目的基于不同药物对细胞色素P450酶（CYP450）的代谢亚型酶活性的影响,考察醋酸诺美孕酮（NOMAc）体外与紫杉醇（PTX）、顺铂（CDDP）的相互作用,初步探讨NOMAc、PTX、CDDP的相互作用,为NOMAc用于多药联合化疗辅助治疗子宫内膜腺癌提供... 详细信息

目的基于不同药物对细胞色素P450酶（CYP450）的代谢亚型酶活性的影响,考察醋酸诺美孕酮（NOMAc）体外与紫杉醇（PTX）、顺铂（CDDP）的相互作用,初步探讨NOMAc、PTX、CDDP的相互作用,为NOMAc用于多药联合化疗辅助治疗子宫内膜腺癌提供数据支持。方法建立适合的肝微粒体酶体外孵育体系:包含肝微粒体、MgCl2、探针底物混合样品、不同浓度的药物及抑制剂,37℃水浴预孵育5min后,加入NADPH再生系统启动反应,继续孵育60min;加入含内标氘代来曲唑的冰甲醇终止反应,涡旋震荡30 S后,4℃下13000×g离心10 min,取上清液进液质联用仪（HPLC-MS/MS）测定。确定探针药物的米氏常数、半数抑制浓度及CYP酶对应探针药物底物产物的浓度。结果 1、探针药物米氏常数（Km）分别为氯唑沙宗（CYP2E1）:0.4949;咪达唑仑（CYP3A4）:5.852;紫杉醇（CYP2C8）:3.041。2、药物半数抑制浓度（IC50）分别为双硫仑（CYP2E1）:5.533;酮康唑（CYP3A4）:3.145;槲皮素（CYP2C8）:0.07728。3、NOMAc与PTX/CDDP对3种CYPs酶活性的影响结果分别为:（1）CYP3A4酶:空白组浓度为22.975±1.168μmol·L,NOMAc组23.445±0.382μmol·L,NOMAc+PTX组21.593±0.985μmol·L,NOMAc+CDDP组24.329±0.727μmol·L,NOMAc+PTX+CDDP组21.224±1.462μmol·L;（2）CYP2E1酶:空白组浓度为0.892±0.069μmol·L,NOMAc组0.780±0.138μmol·L,NOMAc+PTX组0.447±0.026μmol·L,NOMAc+CDDP组0.799±0.080μmol·L,NOMAc+PTX+CDDP组0.499±0.107μmol·L;（3）CYP2C8酶:空白组浓度为16.472±1.332μmol·L,NOMAc组15.782±1.287μmol·L,NOMAc+PTX组15.926±0.973μmol·L,NOMAc+CDDP组16.631±0.419μmol·L, NOMAc+PTX+CDDP组15.973±1.331μmol·L。讨论1、NOMAc及NOMAc和CDDP联合用药组对三种酶均无显著影响;2、、NOMAc联合PTX、NOMAc联合PTX/CDDP用药时,与空白组相比对CYP3A4、CYP2C8无显著影响,但对CYP2E1有显著的抑制作用。临床上NOMAc与PTX联合用药时,在同时使用通过CYP2E1代谢的药物（如苯妥英钠、双香豆素、甲苯磺丁脲、优降糖、格列齐特、普萘洛尔、维拉帕米、利福平等）时应特别注意药物不良反应。联合用药时体内相互作用的实际情况需进行更深入研究。

关键词：诺美孕酮、紫杉醇、顺铂 P450酶药物相互作用肝微粒体