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Rap1GAP二聚体的形成对其在细胞内定位的影响

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中国生物制品学杂志 2007年第3期20卷 195-197页

作者：赵春艳连培文魏巍孔繁斗大连医科大学检验医学院临床生化教研室大连116027 大连医科大学附属第一医院妇产科大连116011

目的观察Rap1GAP二聚体的形成对其在细胞内定位的影响。方法对绿色荧光蛋白标记的Rap1GAP野生体编码第90和99位氨基酸的核苷酸进行定点突变,制备绿色荧光蛋白标记的Rap1GAP二聚体缺失突变体M90和M99。将Rap1GAP野生体及二聚体缺失突变... 详细信息

目的观察Rap1GAP二聚体的形成对其在细胞内定位的影响。方法对绿色荧光蛋白标记的Rap1GAP野生体编码第90和99位氨基酸的核苷酸进行定点突变,制备绿色荧光蛋白标记的Rap1GAP二聚体缺失突变体M90和M99。将Rap1GAP野生体及二聚体缺失突变体单独或者分别与活化型Gα共转染HEK293细胞,在荧光显微镜下观察野生体和二聚体缺失突变体在细胞内的分布情况。结果野生型Rap1GAP与二聚体缺失突变体Rap1GAP分别单独转染HEK293细胞时,野生型和突变体Rap1GAP均弥漫分布胞质内;当野生型与突变体Rap1GAP分别与活化型Gα共转染HEK293细胞时,野生型和突变体Rap1GAP均主要分布在细胞膜上。结论Rap1GAP二聚体的形成对其在细胞内的定位没有影响。

关键词： Rap1GAP 二聚体点突变细胞内定位

褐藻多糖硫酸酯对人肾小球系膜细胞增殖及纤连蛋白与转化生长因子分泌的影响

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中华肾脏病杂志 2006年第10期22卷 638-639页

作者：薄守波鞠建伟李建远连培文商滨山东烟台毓璜顶医院中西医结合科 264000 山东烟台毓璜顶医院中心实验室 264000 大连医科大学

肾小球硬化是各种原因引起的肾小球损伤的晚期变化，是终末期肾衰的基本病变，而系膜细胞过度增殖和细胞外基质（EC-M）的积聚在肾小球硬化的发生中起重要作用。褐藻多糖硫酸酯（FPS）作为一种新的海洋药物用于治疗慢性肾功能衰竭。在降... 详细信息

肾小球硬化是各种原因引起的肾小球损伤的晚期变化，是终末期肾衰的基本病变，而系膜细胞过度增殖和细胞外基质（EC-M）的积聚在肾小球硬化的发生中起重要作用。褐藻多糖硫酸酯（FPS）作为一种新的海洋药物用于治疗慢性肾功能衰竭。在降低Ser和BUN、抗凝血等方面有非常确切的疗效。我们通过人肾小球系膜细胞（GMC）体外培养，研究FPS对其细胞增殖和分泌纤连蛋白（FN）、转化生长因子β1（TGF-β1）的影响，以期从细胞水平探讨FPS对慢性肾功能衰竭的防治机制。

关键词：肾小球系膜细胞增殖转化生长因子β1 褐藻多糖硫酸酯分泌纤连蛋白慢性肾功能衰竭人肾小球系膜细胞肾小球硬化细胞过度增殖

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藻黄胶囊Ⅲ号对人肾小球系膜细胞的影响

中医杂志 2008年第3期49卷 264-266页

作者：鞠建伟薄守波商滨李建远连培文山东省烟台毓璜顶医院中西医结合科中心实验室烟台市264006 山东省德州市人民医院

目的通过研究藻黄胶囊Ⅲ号(ZHC3)对人肾小球系膜细胞(GMC)的影响,从分子细胞水平探讨ZHC3防治慢性肾功能衰竭(CRF)的机理。方法ZHC3孵育体外培养的人GMC,采用MTT法检测GMC的增殖,ELISA法检测纤维连接蛋白(FN)、白细胞介素6(IL-6)和转化... 详细信息

目的通过研究藻黄胶囊Ⅲ号(ZHC3)对人肾小球系膜细胞(GMC)的影响,从分子细胞水平探讨ZHC3防治慢性肾功能衰竭(CRF)的机理。方法ZHC3孵育体外培养的人GMC,采用MTT法检测GMC的增殖,ELISA法检测纤维连接蛋白(FN)、白细胞介素6(IL-6)和转化生长因子β1(TGF-β1)的分泌水平。结果ZHC3可显著抑制GMC的增殖(P<0.01),减少FN、IL-6、TGF-β1的分泌(P<0.05或P<0.01)。结论ZHC3可减少肾小球内细胞外基质堆积,延缓肾小球硬化,这可能是ZHC3防治CRF的机理。

关键词：藻黄胶囊Ⅲ号肾小球系膜细胞纤维连接蛋白白细胞介素6 转化生长因子β1

新基因PKHDL1产物Fibrocystin-L的抗体制备及其亚细胞定位的初步研究

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第1期27卷 78-81页

作者：连培文付玉龙李奥戴宝贞丁振伟李兰吴冠青北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院北京100021 烟台毓璜顶医院山东烟台266021

目的:制备FPC-L蛋白的多克隆抗体,对PKHDL1基因产物进行初步的细胞生物学研究。方法:根据生物信息学分析结果,PCR扩增编码人类FPC-L的N端633L-768K的cDNA片段。将该片段克隆到GST融合蛋白表达载体上,在IPTG诱导下产生人类FPC-L抗原(hFL... 详细信息

目的:制备FPC-L蛋白的多克隆抗体,对PKHDL1基因产物进行初步的细胞生物学研究。方法:根据生物信息学分析结果,PCR扩增编码人类FPC-L的N端633L-768K的cDNA片段。将该片段克隆到GST融合蛋白表达载体上,在IPTG诱导下产生人类FPC-L抗原(hFL-N)。纯化目的蛋白并制备兔抗FPC-L蛋白多克隆抗体。Western blot鉴定抗体特异性,并以间接免疫荧光法初步分析该蛋白在细胞内定位。结果:成功地构建了hFL-N片段原核表达载体,在大肠杆菌中实现表达,并制备了hFPC-L蛋白的多克隆抗体hFL-Np。通过生化和细胞学方法证实了该抗体针对FPC-L的特异性和揭示了该蛋白的亚细胞定位。结论:成功制备了高效价并具特异性的兔抗FPC-L蛋白多克隆抗体,并揭示了该蛋白主要表达于细胞质内,为进一步研究PKHDL1基因产物的生物功能奠定了基础。

关键词： PKHDL1基因 Fibrocystin-L 多克隆抗体亚细胞定位

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类脂蛋白沉积症一家系调查及基因突变检测

中华皮肤科杂志 2014年第4期47卷 263-266页

作者：高冬连培文陈剑马先莹周素荣山东省烟台毓璜顶医院 264000

目的报道1例来自山东的类脂蛋白沉积症家系，研究其家系成员的细胞外基质蛋白（ECM1）基因突变。方法类脂蛋白沉积症家系3代8名成员，有2例患者，分别为先证者（III 1）及其母亲（II 2），均表现为睑缘丘疹、舌系带增厚变短及声音嘶哑... 详细信息

目的报道1例来自山东的类脂蛋白沉积症家系，研究其家系成员的细胞外基质蛋白（ECM1）基因突变。方法类脂蛋白沉积症家系3代8名成员，有2例患者，分别为先证者（III 1）及其母亲（II 2），均表现为睑缘丘疹、舌系带增厚变短及声音嘶哑。间接喉镜检查显示声带浸润增厚。睑缘及喉部黏膜组织病理检查均提示真皮透明蛋白样物质沉积，PAS染色强阳性，淀粉酶染色阴性，病理诊断符合类脂蛋白沉积症。采用DNA直接测序检测家系8例成员ECM1基因，巢式PCR琼脂糖凝胶电泳对患者的ECM1编码区进行基因突变分析。取100例正常汉族人基因组DNA样品做对照。结果2例患者均为遗传复合体，先证者母亲（112）ECM1的两个等位基因分别存在3个错义突变（p．P169T，P．A44T，p．R392W）。先证者除了从其母亲遗传来的一个错义突变外（p．P169T），还有从其父亲（II 1）遗传来的一个同义突变（c．879G〉A），这个突变产生一个潜在的剪切受体位点“AG”，巢式PCR琼脂糖凝胶电泳结果和PCR产物测序结果证实，该同义突变导致ECM1基因的剪切发生改变。结论本类脂蛋白沉积症家系存在新的ECM1基因同义突变导致的剪切突变。

关键词： Urbach—Wiethe类脂蛋白沉积症细胞外基质蛋白质类突变

重组人附睾特异表达蛋白ESC42及其生物学鉴定

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中华男科学杂志 2005年第2期11卷 106-111页

作者：沈肖方李建远王海燕薛江南曹奇志连培文陈辉解美娜烟台毓璜顶医院中心实验室山东省干细胞工程技术研究中心山东烟台264000

　目的:利用基因工程技术合成出人附睾特异表达基因ESC42重组蛋白,为其功能研究提供材料。　方法: 从人附睾cDNA文库扩增出ESC42基因片段,构建原核表达载体,进行克隆、表达、蛋白质纯化及单克隆抗体制备; Western印迹鉴定纯化产物... 详细信息

　目的:利用基因工程技术合成出人附睾特异表达基因ESC42重组蛋白,为其功能研究提供材料。　方法: 从人附睾cDNA文库扩增出ESC42基因片段,构建原核表达载体,进行克隆、表达、蛋白质纯化及单克隆抗体制备; Western印迹鉴定纯化产物及其单克隆抗体的特异性;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS)鉴定ESC42蛋白相对分子质量(Mr)和肽质量指纹,用MS Fit软件查询NCBI数据库。　结果:获得rhESC42融合蛋白纯度为99%;Mr为11978.12,制备出抗rhESC42单克隆抗体;质谱分析的数据覆盖了所预测氨基酸序列的48%, 且符合率为100%。在Expasy数据库中进行结构域扫描,发现ESC42属于β defensin家族,具有抗菌活性。　结论:获得了高纯度且具有生物效应的rhESC42重组蛋白质,并从蛋白质水平对预测氨基酸序列进行了证实,为以后的功能研究奠定基础。

关键词：附睾 ESC42 重组大肠埃希菌生物学鉴定人类

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藻黄胶囊Ⅲ号对人肾小球系膜细胞的影响

中国现代药物应用 2007年第1期1卷 1-3页

作者：鞠建伟李建远连培文商滨山东省烟台毓璜顶医院 264006 烟台毓璜顶医院中心实验室山东省干细胞研究中心大连医科大学

目的研究藻黄胶囊Ⅲ号(ZHC3)对人肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响,其对GMC分泌纤维连接蛋白(FN)、白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响,以期从分子细胞水平探讨ZHC3防治慢性肾功能衰竭(CRF)的机理。方法ZHC3孵育体外培... 详细信息

目的研究藻黄胶囊Ⅲ号(ZHC3)对人肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响,其对GMC分泌纤维连接蛋白(FN)、白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响,以期从分子细胞水平探讨ZHC3防治慢性肾功能衰竭(CRF)的机理。方法ZHC3孵育体外培养的GMC,采用MTT法检测GMC增殖,ELISA法检测FN、IL-6、TGF-β1的分泌水平。结果ZHC3可显著抑制GMC的增殖(P<0.01),显著减少FN、IL-6、TGF-β1的分泌(P<0.01)。结论ZHC3可减少肾小球内细胞外基质堆积,延缓肾小球硬化,这可能是ZHC3防治CRF的机理。

关键词：藻黄胶囊Ⅲ号肾小球系膜细胞纤维连接蛋白白细胞介素-6 转化生长因子β1

垂体腺苷酸环化酶激活肽拮抗lactacystin细胞毒性的作用

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中国组织工程研究 2015年第46期19卷 7461-7465页

作者：管丽娜冀永强巴茂文连培文李宁牟贤玉于国平烟台毓璜顶医院急诊科山东省烟台市264000 烟台毓璜顶医院肾内科山东省烟台市264000 烟台毓璜顶医院神经内科山东省烟台市264000 烟台毓璜顶医院中心实验室山东省烟台市264000

背景:帕金森病的发病机制未明确,目前尚没有有效的治疗方法能从根本上阻止其病程进展。目的:分析垂体腺苷酸环化酶激活肽对lactacystin诱导的帕金森病多巴胺能PC12细胞凋亡的影响及其分子机制。方法:用神经生长因子将PC12细胞诱导分化... 详细信息

背景:帕金森病的发病机制未明确,目前尚没有有效的治疗方法能从根本上阻止其病程进展。目的:分析垂体腺苷酸环化酶激活肽对lactacystin诱导的帕金森病多巴胺能PC12细胞凋亡的影响及其分子机制。方法:用神经生长因子将PC12细胞诱导分化成神经元的细胞模型,经不同浓度泛素-蛋白酶体抑制剂lactacystin处理,分别作用不同时间,取细胞存活约为50%的lactacystin作用浓度与时间,建立帕金森病细胞实验模型。实验分组:对照组、lactacystin组、垂体腺苷酸环化酶激活肽1-27干预组(干预1组)、垂体腺苷酸环化酶激活肽1-27和垂体腺苷酸环化酶激活肽6-27共同干预组(干预2组)。观察各组细胞形态变化;MTT法检测细胞活力;免疫印迹(Western blot)法检测内质网应激特异性蛋白caspase-12的表达情况。并观察垂体腺苷酸环化酶激活肽1-26及垂体腺苷酸环化酶激活肽6-27对lactacystin毒性作用的影响。结果与结论:不同浓度及作用时间的lactacystin处理PC12细胞后,细胞活力呈浓度及时间依赖性下降,其中lactacystin 20μmol/L作用24 h使细胞活力下降约50%。在相同的lactacystin作用条件下(20μmol/L,24 h),与对照组比较,lactacystin组细胞发生损伤性改变,细胞活力降低,caspase-12活性明显升高(P<0.01);与lactacystin组比较,干预1组细胞损伤性改变明显好转,细胞活力增强,下调凋亡蛋白caspase-12的表达(P<0.01)。干预2组细胞状态则明显不如干预1组,与lactacystin组相差不大。结果提示泛素-蛋白酶体抑制剂lactacystin引起内质网应激导致细胞损伤;垂体腺苷酸环化酶激活肽1-27通过调节上述信号通路发挥保护作用。而作为垂体腺苷酸环化酶激活肽1-27的受体拮抗剂,垂体腺苷酸环化酶激活肽6-27则减弱了垂体腺苷酸环化酶激活肽1-27的这一作用。

关键词：组织构建组织工程帕金森病 PACAP lactacystin 内质网应激细胞毒性细胞保护细胞形态细胞活力 caspase-12 山东省自然科学基金

酪氨酸激酶PYK2结合并磷酸化E-Cadherin

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酪氨酸激酶PYK2结合并磷酸化E-Cadherin