新基因PKHDL1产物Fibrocystin-L的抗体制备及其亚细胞定位的初步研究

作     者：连培文 付玉龙 李奥 戴宝贞 丁振伟 李兰 吴冠青 

作者机构：北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院北京100021 烟台毓璜顶医院山东烟台266021 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2011年第27卷第1期

页      面：78-81页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30672483 30870501 81072688) 北京市自然基金资助项目(7102133) 

主　　题：PKHDL1基因 Fibrocystin-L 多克隆抗体 亚细胞定位 

摘      要：目的:制备FPC-L蛋白的多克隆抗体,对PKHDL1基因产物进行初步的细胞生物学研究。方法:根据生物信息学分析结果,PCR扩增编码人类FPC-L的N端633L-768K的cDNA片段。将该片段克隆到GST融合蛋白表达载体上,在IPTG诱导下产生人类FPC-L抗原(hFL-N)。纯化目的蛋白并制备兔抗FPC-L蛋白多克隆抗体。Western blot鉴定抗体特异性,并以间接免疫荧光法初步分析该蛋白在细胞内定位。结果:成功地构建了hFL-N片段原核表达载体,在大肠杆菌中实现表达,并制备了hFPC-L蛋白的多克隆抗体hFL-Np。通过生化和细胞学方法证实了该抗体针对FPC-L的特异性和揭示了该蛋白的亚细胞定位。结论:成功制备了高效价并具特异性的兔抗FPC-L蛋白多克隆抗体,并揭示了该蛋白主要表达于细胞质内,为进一步研究PKHDL1基因产物的生物功能奠定了基础。