检索结果-南通市图书馆

猪源脑心肌炎病毒GXLC株全基因组序列测定与分析

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病毒学报 2010年第2期26卷 134-142页

作者：施开创屈素洁陈进喜许瑞胜郑敏刘棋陈汉忠李刚中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 广西动物疫病预防控制中心南宁530001 广西大学动物科学技术学院南宁530005

对猪源脑心肌炎病毒(EMCV)GXLC株进行全基因组克隆、测序和分析。采用RT-PCR技术分段扩增基因组可读框(ORF),应用3'-RACE和5'-RACE技术扩增3'-UTR和5'-UTR,分别对扩增片段进行克隆和测序,经拼接后获得GXLC株全基因组序列,共7725个核苷... 详细信息

对猪源脑心肌炎病毒(EMCV)GXLC株进行全基因组克隆、测序和分析。采用RT-PCR技术分段扩增基因组可读框(ORF),应用3'-RACE和5'-RACE技术扩增3'-UTR和5'-UTR,分别对扩增片段进行克隆和测序,经拼接后获得GXLC株全基因组序列,共7725个核苷酸。与NCBI GenBank登录的国内外参考毒株进行同源性比较及系统进化分析结果表明,GXLC株与GX0601、GX0602、BJC3、HB1等国内分离株以及CBNU、K3、K11、BEL-2887A、EMCV-R、PV21等国外分离株同源性达99%以上;基于全基因组、结构蛋白及非结构蛋白基因序列绘制的系统进化树拓扑结构图相近,所有EMCV分离株可分成两个群:I群和II群,I群可细分为Ia亚群和Ib亚群,其中猪源EMCV属于Ia或Ib亚群、鼠源EMCV属于Ia亚群、野猪源EMCV属于II群,GXLC株与其它中国分离株均属于Ia亚群。

关键词：猪脑心肌炎病毒基因组同源性比较系统进化分析

猪凋亡细胞因子Fas、FasL、TNFR1和TNF-α SYBR GreenⅠ real-time PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2009年第10期39卷 910-916页

作者：施开创莫胜兰许瑞胜陆文俊刘棋广西动物疫病预防控制中心广西南宁530001 广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

分别针对猪凋亡细胞因子Fas、FasL、TNFR1、TNF-α基因以及看家基因β-actin的序列设计了1对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测Fas、FasL、TNFR1、TNF-α及β-actin的SYBR GreenⅠreal-ti me PC... 详细信息

分别针对猪凋亡细胞因子Fas、FasL、TNFR1、TNF-α基因以及看家基因β-actin的序列设计了1对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测Fas、FasL、TNFR1、TNF-α及β-actin的SYBR GreenⅠreal-ti me PCR方法。该方法线性关系好(r2≥0.995),敏感性高,初始模板的检出下限除TNFR1为1×102copies/μL外,其他均为1×101copies/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内与组间的变异系数均小于3%。应用所建立的方法对猪生殖与呼吸综合征病毒感染仔猪外周血单个核细胞中Fas、FasL、TNFR1和TNF-αmRNA的表达水平进行了检测。结果表明,建立的real-ti me PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好。

关键词：猪凋亡细胞因子荧光定量PCR SYBR GreenⅠ

猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR诊断方法的建立与应用

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现代农业科技 2018年第4期 229-230页

作者：许瑞胜冯淑萍李剑静熊毅马琳广西动物疫病预防控制中心广西南宁530001 岑溪市动物疫病预防控制中心

为建立一种快速简便的检测猪传染性胃肠炎的RT-PCR方法,根据GenBank中已发表的猪传染性胃肠炎病毒N蛋白基因的核苷酸序列设计1对引物,并以合成的cDNA为模板,初步建立了猪传染性胃肠炎病毒的RT-PCR检测方法,进而对对照病毒及采集的病料... 详细信息

为建立一种快速简便的检测猪传染性胃肠炎的RT-PCR方法,根据GenBank中已发表的猪传染性胃肠炎病毒N蛋白基因的核苷酸序列设计1对引物,并以合成的cDNA为模板,初步建立了猪传染性胃肠炎病毒的RT-PCR检测方法,进而对对照病毒及采集的病料组织进行了敏感性、特异性和重复性检测。结果表明,该研究建立的RT-PCR方法敏感性高,最低核酸检测值为0.5ng/μL,扩增产物特异性好,重复性稳定,可应用于猪传染性胃肠炎病毒的实验室诊断和流行病学调查。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 RT-PCR 诊断流行病学调查

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广西猪细胞巨化病毒感染的初步调查

上海畜牧兽医通讯 2008年第6期 66-67页

作者：朱伟陈磊付薇许瑞胜王常伟熊毅刘棋广西大学广西区动物疫病预防控制中心广西南宁530001

猪细胞巨化病毒病又称猪包涵体鼻炎,是由猪细胞巨化病毒(PCMV)引起的仔猪的一种常见传染病[1].在易感猪群中可引起胚胎和仔猪死亡,表现生长发育不良、仔猪鼻炎、肺炎及增重差等临床症状.PCMV主要是一种'机会性感染'病毒,多呈隐性感染,... 详细信息

猪细胞巨化病毒病又称猪包涵体鼻炎,是由猪细胞巨化病毒(PCMV)引起的仔猪的一种常见传染病[1].在易感猪群中可引起胚胎和仔猪死亡,表现生长发育不良、仔猪鼻炎、肺炎及增重差等临床症状.PCMV主要是一种'机会性感染'病毒,多呈隐性感染,潜伏感染状态的猪在长途运输、寒冷、分娩等应激因素作用下,病毒可被激活并重新排毒.常规条件下饲养的大多数猪群均存在PCMV感染,PCMV抗体阳性率较高,但大多数为亚临床型,临床发病则很少见[2,3].

关键词：仔猪死亡病毒感染细胞广西临床症状常见传染病发育不良隐性感染

O型口蹄疫病毒VP1基因及其多表位基因的原核表达与纯化鉴定

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南方农业学报 2016年第3期47卷 472-477页

作者：何奇松陈磊颜健华许瑞胜易春华韦达有冯淑萍黄胜斌梁晟熊毅广西动物疫病预防控制中心南宁530001 崇左市动物疫病预防控制中心广西崇左532200 桂林市动物疫病预防控制中心广西桂林541002

【目的】通过原核表达并纯化获得O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因及其多表位基因的重组蛋白,为建立O型FMDV抗体ELISA检测试剂盒及制备动物高免血清提供技术支持。【方法】以O型FMDV VP1全基因重组质粒p MD18-T-T-VP1及串联的VP1多表位基因... 详细信息

【目的】通过原核表达并纯化获得O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因及其多表位基因的重组蛋白,为建立O型FMDV抗体ELISA检测试剂盒及制备动物高免血清提供技术支持。【方法】以O型FMDV VP1全基因重组质粒p MD18-T-T-VP1及串联的VP1多表位基因重组质粒p MD18-T-O-VP1为模板,通过特异性引物扩增并回收目的基因,构建重组质粒p ET-32a-VP1和p GEX-6p-1-VP1,然后转入大肠杆菌BL211(DE3)中诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting对融合蛋白进行分析鉴定。【结果】O型FMDV的VP1基因及其多表位基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到正确表达,表达的两种融合蛋白主要以包涵体形式存在,纯度较高,且均能与猪抗O型FMDV阳性血清发生特异性结合,具有良好的反应原性。【结论】表达获得的融合蛋白具有良好的反应原性,可作为包被抗原应用于O型FMDV抗体检测试剂盒研发。

关键词： O型FMDV VP1基因多表位基因原核表达纯化鉴定

猪IL-2、IL-12p40和IFN-γ SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医 2010年第7期37卷 74-79页

作者：施开创莫胜兰许瑞胜李向涛陈宏备郑敏刘棋广西动物疫病预防控制中心南宁530001 广西大学动物科学技术学院南宁530005

针对猪Th1型细胞因子IL-2、IL-12p40、IFN-γ以及管家基因β-actin的基因序列分别设计一对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IL-2、IL-12p40、IFN-γ及β-actin的SYBR Green Ⅰ real-ti mePCR方... 详细信息

针对猪Th1型细胞因子IL-2、IL-12p40、IFN-γ以及管家基因β-actin的基因序列分别设计一对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IL-2、IL-12p40、IFN-γ及β-actin的SYBR Green Ⅰ real-ti mePCR方法。该方法线性关系好,标准曲线的相关系数均达到0.997以上;敏感性高,初始模板的检出下限均达到100拷贝/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内与组间的变异系数均小于3.5%。应用所建立的方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪外周血单个核细胞中IL-2、IL-12p40和IFN-γ mRNA的表达水平进行了检测。结果表明,所建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好。

关键词：猪 Th1型细胞因子荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ

猪脑心肌炎病毒SYBR GreenⅠ real-time PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2009年第2期39卷 135-139页

作者：施开创陈进喜屈素洁许瑞胜熊毅刘棋陈汉忠李刚中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100081 广西动物疫病预防控制中心广西南宁530001 广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因序列设计并合成了1对引物,以构建的含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测EMCV核酸的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法。检测结果显示,该方法线性关系好,标准曲线的相关系数达到0.991;... 详细信息

针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因序列设计并合成了1对引物,以构建的含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测EMCV核酸的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法。检测结果显示,该方法线性关系好,标准曲线的相关系数达到0.991;对初始模板的检出下限为1×101copies/μL,比常规PCR方法高100倍;与其他猪源病毒,如口蹄疫病毒(FMDV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)均不发生交叉反应;组内与组间的变异系数均小于3%。应用建立的方法检测了17份临床可疑病例的心、脑组织样本,结果1份为阳性。表明,建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于EMCV的病原检测及定量分析。

关键词：脑心肌炎病毒猪荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ

A型口蹄疫病毒VP1蛋白竞争ELISA检测方法的初步建立

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西南农业学报 2015年第5期28卷 2268-2272页

作者：颜健华何奇松蒋家霞冯淑萍黄胜斌胡巧云易春华许瑞胜梁晟熊毅广西动物疫病预防控制中心广西南宁530001 桂林市动物疫病预防控制中心广西桂林541002 广西水产畜牧兽医局广西南宁530021

用纯化的融合蛋白p GEX-6p-1-VP1作为包被抗原,4E12单抗为检测抗体与待检血清竞争固相抗原,建立了单抗竞争ELISA方法来检测口蹄疫A型抗体,并进行了反应条件的优化,确定阴阳临界值。结果表明,抗原最适包被浓度为0.625μg/m L,待检血清稀... 详细信息

用纯化的融合蛋白p GEX-6p-1-VP1作为包被抗原,4E12单抗为检测抗体与待检血清竞争固相抗原,建立了单抗竞争ELISA方法来检测口蹄疫A型抗体,并进行了反应条件的优化,确定阴阳临界值。结果表明,抗原最适包被浓度为0.625μg/m L,待检血清稀释度为1∶2,单抗最大稀释度为1∶400,酶标抗体工作浓度为1∶5000,封闭液、待检血清和单抗作用时间分别为60、60、45 min;阴阳性判断抑制率(PI)≥30%为阳性。与液相阻断ELISA检测试剂盒比对,符合率为84.8%。试验表明,建立的单抗竞争ELISA检测方法具有特异性强、稳定性好等优点,可用于口蹄疫A型血清抗体的检测,这为口蹄疫A型免疫抗体水平检测、疫情监控及流行病学调查提供了技术平台。

关键词： A型口蹄疫病毒 VP1蛋白竞争ELISA

A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的原核表达、纯化及鉴定

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南方农业学报 2016年第2期47卷 301-305页

作者：颜健华何奇松蒋家霞冯淑萍黄胜斌韦达有易春华许瑞胜梁晟熊毅广西动物疫病预防控制中心南宁530001 桂林市动物疫病预防控制中心广西桂林541002 崇左市动物疫病预防控制中心广西崇左532200

【目的】通过原核表达及纯化获得A型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1,为建立A型FMDV的ELISA诊断方法及开发安全、高效、广谱的新型基因工程疫苗提供技术支持。【方法】以含A型FMDV VP1基因的重组质粒p MD18-T-A-VP1为模板,通过特异性引物扩... 详细信息

【目的】通过原核表达及纯化获得A型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1,为建立A型FMDV的ELISA诊断方法及开发安全、高效、广谱的新型基因工程疫苗提供技术支持。【方法】以含A型FMDV VP1基因的重组质粒p MD18-T-A-VP1为模板,通过特异性引物扩增A型FMDV的VP1基因,构建表达质粒p ET-32a-VP1和p GEX-6p-1-VP1,然后转入感受态细胞*** BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白。【结果】诱导表达获得的VP1融合蛋白主要以包涵体形式存在,分别经His·Bind和GST·Bind柱层析纯化,SDS-PAGE分析结果表明融合蛋白纯度较高;Western blotting检测分析发现,VP1融合蛋白能与豚鼠抗A型FMDV阳性血清发生特异性结合,但不与豚鼠抗O型和Asia1型FMDV阳性血清反应。【结论】经原核表达及纯化获得的A型FMDV VP1融合蛋白具有良好的特异性和抗原性,可用于易感动物的免疫及血清抗体筛查。

关键词： A型FMDV VP1蛋白原核表达纯化鉴定