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中国药理学与毒理学杂志 2013年第3期 494-495页

作者：黄尚辉沈旭许容颜方晓峰苏州西山中科药物研究开发有限公司

随着现代农业的发展,农药的地位不可或缺。农药对人类健康的危害日益受到关注。我国农药安全评价体对农药毒性的危害识别主要集中于一般毒性、神经毒性和"三致"等方面的研究。人体暴露于农药后,免疫系统作为人体抵御外来物质的重要场所... 详细信息

随着现代农业的发展,农药的地位不可或缺。农药对人类健康的危害日益受到关注。我国农药安全评价体对农药毒性的危害识别主要集中于一般毒性、神经毒性和"三致"等方面的研究。人体暴露于农药后,免疫系统作为人体抵御外来物质的重要场所,首当其冲的成为农药损害的主要对象。因此基于现有毒性数据,对农药免疫毒性研究和评价日益得到重视。动物的脾脏和胸腺在免疫作用中起重要作用,根据其重量变化是评定农药免疫毒性为最直接数据。对硫磷、二嗪农和甲基对硫磷的动物试验表明,脾脏和胸腺在小鼠接触后出现重量下降和病理性损伤,在大鼠实验中则发现其能抑制始祖细胞的发展。林丹、乐果、西维因等都会引起动物胸腺和脾脏指数降低。农药能引起机体体液免疫应答。二嗪农、灭害威、马拉硫磷、氰戊菊酯和毒杀芬能引起总IgG和IgM下降,对基础抗体应答,抗体空斑形成细胞数量也有影响,主要显现下调效应。同时发现IL6,TNF-α等细胞因子也发生相应的下调作用。农药能引发免疫细胞的毒性。一定剂量甲基对硫磷连续灌胃7 d促使小鼠外周血T淋巴细胞α醋酸萘酯酶阳性率降低,并有剂量效应关系。DTT和马拉硫磷能减弱大鼠白细胞迁移抑制现象。氯氢菊酯会使孕鼠后代得T淋巴细胞亚群细胞减少。农药还能引起机体非特异性免疫和改变宿主抵抗力,如甲基对硫磷能降低巨噬细胞的游离基形成NK细胞的活性并增加兔的细菌感染。毒理学研究最终目的是评估外源化学物对人群的安全性或可能产生的风险。目前对人群免疫毒性风险评估的模型和方法尚未完善,现有方法主要集中于农药的职业和环境暴露对免疫系统的影响。研究表明,室内和车间暴露于林丹的环境中能增加IL-1,IL-3,IL-7,IL-9,IL-11,IL-12,IL-15等细胞因子的增加,同时增加鼻窦炎和支气管炎的发生概率。毒死蜱能增加增加患遗传性过敏症和抗生素过敏症的风险,同时降低CD4,CD5,CD26和T细胞的产生。意外中毒数据表明,DIMP和DEMP能降低NK和CTL活性,而六氯苯增加IgM和IgG的产生并增加患自身免疫性疾病的风险。农药种类繁多,对免疫系统的作用复杂多样。随着农药免疫毒理学的研究深入,日益完善农药免疫毒性危害识别机制,建立免疫毒性风险评估的机制和方法,对农药人类健康风险评估体系的建立愈发重要。

关键词：农药免疫毒性危害识别风险评估

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柑橘黄酮生物活性及其抗癌活性的研究进展

柑橘黄酮生物活性及其抗癌活性的研究进展

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作者：沈旭许容颜黄尚辉方晓峰苏州西山中科药物研究开发有限公司

柑橘黄酮,主要存在于柑橘属植物果实的外皮中(包括外果皮,囊膜,筋络)。柑橘作为中药材常入药在中国已经有数千年历史。对于柑橘黄酮的生物活性及抗癌活性的研究已日益获得关注。柑橘黄酮根据黄酮结构命名大致可分成两类:黄酮苷类,如柚... 详细信息

柑橘黄酮,主要存在于柑橘属植物果实的外皮中(包括外果皮,囊膜,筋络)。柑橘作为中药材常入药在中国已经有数千年历史。对于柑橘黄酮的生物活性及抗癌活性的研究已日益获得关注。柑橘黄酮根据黄酮结构命名大致可分成两类:黄酮苷类,如柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷等;多甲氧基黄酮,如川陈皮素、橙黄酮、蜜橘黄素等。其中,橙皮苷辅助药物常被用于改善病人血管疾病;橙皮苷具有抗炎症和镇痛的功效,与地奥明联合使用,体内和体外的研究结果都显示出明显的炎症保护作用;与柚皮苷联合使用,具有降低胆固醇以及抗癌的效用;还有临床研究表明其可以减轻妇女绝经期症状。近来对于多甲氧基黄酮的研究也日益增多,例如:川陈皮素有拮抗哮喘炎症,抗肝炎C型病毒等。柑橘黄酮具有抗癌活性,其显著的抗癌作用随着研究成果的不断报道得到了证实。涉及到的癌症种类繁多,例如:人淋巴细胞白血病、肝癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、胃癌等。体外试验表明不同的柑橘黄酮对不同的癌症细胞均有较好的特异性抑制作用。例如:川陈皮素对Hela细胞、THP-1细胞、Colon26细胞、S180细胞具有较好的抑制作用;橙皮苷对THP-1细胞、P388细胞、SNIU-668细胞抑制作用明显;对BEL-740,Bcap37,SW1990,KB-3-1细胞,异鼠李素的抑制作用较好。体内试验表明川陈皮素能够抑制小鼠结肠癌的转移,抑制S180细胞的生长,抑制Lewis的生长和转移,抑制小鼠黑色素瘤B16的生长;川陈皮素和桔红素联合使用对小鼠WEHI3B(JCS)细胞的抑制率较高;橙皮苷对诱导肺癌发生的致癌物质具有抑制其诱癌作用的效果。关于柑橘黄酮抗癌作用的机制研究逐渐深入,目前主要运用到的技术有Hoechst荧光检测染色体聚集和凋亡小体的产生,流式细胞仪检测细胞凋亡,凝胶电泳检测DNA的断裂,免疫印迹法Western blot检测细胞凋亡调控蛋白Bcl-2与BAX等,以及检测Caspase-3的活性等。这些方法提供了研究其作用机理的科学依据,例如柚皮苷能够激活Caspase-3活性,抑制P-糖蛋白表达,提高细胞对药物的敏感性;川陈皮素直接抑制MEK活性,从而抑制ERK磷酸化,抑制MMP表达,达到抗癌作用;陈皮素抑制NF-κB活性,使其不能与DNA结合,从而抑制RCS产物产生。随着柑橘黄酮抗癌作用机理研究的日趋明朗,其作为新药运用于临床癌症治疗指日可待。

关键词：柑橘黄酮生物活性抗癌活性

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农药免疫毒性的危险识别和风险评估进展

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2013年（第三届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛

作者：黄尚辉沈旭许容颜方晓峰苏州西山中科药物研究开发有限公司

关键词：农药免疫毒性危害识别风险评估

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3种农药的急性毒性

3种农药的急性毒性

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2013年（第三届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛

作者：许容颜沈旭黄尚辉方晓峰苏州西山中科药物研究开发有限公司

目的检测70%吡虫啉可湿性粉剂、5%己唑醇悬浮剂、450 g·L戊唑醇悬浮剂3种农药的急性毒性。方法按照GB 15670-1995《农药登记毒理学试验方法》对3种农药进行急性毒性6项试验。急性经口毒性试验中70%吡虫啉可湿性粉剂采用机率单位法,5%... 详细信息

目的检测70%吡虫啉可湿性粉剂、5%己唑醇悬浮剂、450 g·L戊唑醇悬浮剂3种农药的急性毒性。方法按照GB 15670-1995《农药登记毒理学试验方法》对3种农药进行急性毒性6项试验。急性经口毒性试验中70%吡虫啉可湿性粉剂采用机率单位法,5%己唑醇悬浮剂采用限量法,450 g·L戊唑醇悬浮剂采用霍恩氏法。急性经皮毒性试验3种农药均采用限量法进行试验。急性吸入毒性试验中采用大鼠全身暴露于染毒柜内接触的方式进行给药。急性皮肤刺激试验和眼刺激试验均选择4只健康成年新西兰白兔进行试验。豚鼠皮肤变态反应试验设阴性对照组、给药组和阳性对照组;致敏接触时阳性对照组给予α-己基肉桂醛原液,激发接触时阳性对照组给予50%α-己基肉桂醛。结果 70%吡虫啉可湿性粉剂急性经口毒性试验中,给药后30 min观察,大鼠呈现与剂量相关的毒性症状,出现了抽搐、呼吸困难、流涎和死亡的症状,LD值为891 mg·kg;5%己唑醇悬浮剂经口给予5000 mg·kg的剂量后未出现任何毒性症状,LD大于5000 mg·kg;450 g·L戊唑醇悬浮剂急性经口LD等于5000 mg·kg;根据指导原则分级标准,3种农药经口毒性均为低毒级。急性经皮毒性3种农药的LD值均大于2000 mg·kg,根据指导原则分级标准均为低毒级。急性吸入毒性试验中,3种农药急性吸入LC(2 h)均大于2000 mg·m,属低毒级。3种农药家兔皮肤刺激性试验中,皮刺最高积分均值均为0,根据指导原则皮肤刺激强度分级标准为无刺激性。70%吡虫啉可湿性粉剂的眼刺最高积分均值为11.3,眼刺激的平均指数48 h后为4.8,根据指导原则眼刺激强度分级标准属轻度刺激;其余2种农药对家兔眼无刺激性。3种农药皮肤变态反应试验均为Ⅰ级弱致敏物。结论 3种农药的急性毒性数据与现有文献报道基本一致。生产者和使用者要注意个人防护。

关键词：农药急性毒性试验

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柑橘黄酮生物活性及其抗癌活性的研究进展

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2013年（第三届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛

作者：沈旭许容颜黄尚辉方晓峰苏州西山中科药物研究开发有限公司

柑橘黄酮,主要存在于柑橘属植物果实的外皮中(包括外果皮,囊膜,筋络)。柑橘作为中药材常入药在中国已经有数千年历史。对于柑橘黄酮的生物活性及抗癌活性的研究已日益获得关注。柑橘黄酮根据黄酮结构命名大致可分成两类:黄酮苷类,如柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷等;多甲氧基黄酮,如川陈皮素、橙黄酮、蜜橘黄素等。其中,橙皮苷辅助药物常被用于改善病人血管疾病;橙皮苷具有抗炎症和镇痛的功效,与地奥明联合使用,体内和体外的研究结果都显示出明显的炎症保护作用;与柚皮苷联合使用,具有降低胆固醇以及抗癌的效用;还有临床研究表明其可以减轻妇女绝经期症状。近来对于多甲氧基黄酮的研究也日益增多,例如:川陈皮素有拮抗哮喘炎症,抗肝炎C型病毒等。柑橘黄酮具有抗癌活性,其显著的抗癌作用随着研究成果的不断报道得到了证实。涉及到的癌症种类繁多,例如:人淋巴细胞白血病、肝癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、胃癌等。体外试验表明不同的柑橘黄酮对不同的癌症细胞均有较好的特异性抑制作用。例如:川陈皮索对Hela细胞、THP-1细胞、Colon26细胞、S180细胞具有较好的抑制作用;橙皮苷对THP-1细胞、P388细胞、SNIU-668细胞抑制作用明显;对BEL-740,Bcap37,SW1990,KB-3-1细胞,异鼠李素的抑制作用较好。体内试验表明川陈皮素能够抑制小鼠结肠癌的转移,抑制S180细胞的生长,抑制Lewis的生长和转移,抑制小鼠黑色素瘤B16的生长;川陈皮素和桔红素联合使用对小鼠WEH13B(JCS)细胞的抑制率较高;橙皮苷对诱导肺癌发生的致癌物质具有抑制其诱癌作用的效果。关于柑橘黄酮抗癌作用的机制研究逐渐深入,目前主要运用到的技术有Hoechst荧光检测染色体聚集和凋亡小体的产生,流式细胞仪检测细胞凋亡,凝胶电泳检测DNA的断裂,免疫印迹法Western blot检测细胞凋亡调控蛋白Bcl-2与BAX等,以及检测Caspase-3的活性等。这些方法提供了研究其作用机理的科学依据,例如柚皮苷能够激活Caspase-3活性,抑制P-糖蛋白表达,提高细胞对药物的敏感性;川陈皮素直接抑制MEK活性,从而抑制ERK磷酸化,抑制MMP表达,达到抗癌作用;陈皮素抑制NF-κB活性,使其不能与DNA结合,从而抑制RCS产物产生。随着柑橘黄酮抗癌作用机理研究的日趋明朗,其作为新药运用于临床癌症治疗指日可待。

关键词：柑橘黄酮生物活性抗癌活性

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农药免疫毒性的危险识别和风险评估进展

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关键词：农药免疫毒性危害识别风险评估

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3种农药的急性毒性

3种农药的急性毒性

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作者：许容颜沈旭黄尚辉方晓峰苏州西山中科药物研究开发有限公司

目的检测70%吡虫啉可湿性粉剂、5%己唑醇悬浮剂、450 g·L~(-1)戊唑醇悬浮剂3种农药的急性毒性。方法按照GB 15670-1995《农药登记毒理学试验方法》对3种农药进行急性毒性6项试验。急性经口毒性试验中70%吡虫啉可湿性粉剂采用机率单位法... 详细信息

目的检测70%吡虫啉可湿性粉剂、5%己唑醇悬浮剂、450 g·L~(-1)戊唑醇悬浮剂3种农药的急性毒性。方法按照GB 15670-1995《农药登记毒理学试验方法》对3种农药进行急性毒性6项试验。急性经口毒性试验中70%吡虫啉可湿性粉剂采用机率单位法,5%己唑醇悬浮剂采用限量法,450 g·L~(-1)戊唑醇悬浮剂采用霍恩氏法。急性经皮毒性试验3种农药均采用限量法进行试验。急性吸入毒性试验中采用大鼠全身暴露于染毒柜内接触的方式进行给药。急性皮肤刺激试验和眼刺激试验均选择4只健康成年新西兰白兔进行试验。豚鼠皮肤变态反应试验设阴性对照组、给药组和阳性对照组;致敏接触时阳性对照组给予α-己基肉桂醛原液,激发接触时阳性对照组给予50%α-己基肉桂醛。结果 70%吡虫啉可湿性粉剂急性经口毒性试验中,给药后30 min观察,大鼠呈现与剂量相关的毒性症状,出现了抽搐、呼吸困难、流涎和死亡的症状,LD_(50)值为891 mg·kg~(-1);5%己唑醇悬浮剂经口给予5000 mg·kg~(-1)的剂量后未出现任何毒性症状,LD_(50)大于5000 mg·kg~(-1);450 g·L~(-1)戊唑醇悬浮剂急性经口LD_(50)等于5000 mg·kg~(-1);根据指导原则分级标准,3种农药经口毒性均为低毒级。急性经皮毒性3种农药的LD_(50)值均大于2000 mg·kg~(-1),根据指导原则分级标准均为低毒级。急性吸入毒性试验中,3种农药急性吸入LC_(50)(2 h)均大于2000 mg·m~(-3),属低毒级。3种农药家兔皮肤刺激性试验中,皮刺最高积分均值均为0,根据指导原则皮肤刺激强度分级标准为无刺激性。70%吡虫啉可湿性粉剂的眼刺最高积分均值为11.3,眼刺激的平均指数48 h后为4.8,根据指导原则眼刺激强度分级标准属轻度刺激;其余2种农药对家兔眼无刺激性。3种农药皮肤变态反应试验均为1级弱致敏物。结论 3种农药的急性毒性数据与现有文献报道基本一致。生产者和使用者要注意个人防护。

关键词：农药急性毒性试验

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细胞成像技术在药物发现毒理学中的应用

细胞成像技术在药物发现毒理学中的应用

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2013年（第三届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛

作者：方晓峰沈旭张宝林黄尚辉许容颜苏州西山中科药物研究开发有限公司

虽然药物研发领域的科研投入和科学性成果在过去几十年进展显著,但制药行业的有效产出不高却是不争的事实。目前越来越多的研究者将疾病或生物学相关的筛选方法和模型应用在药物开发的早期阶段以降低现有药物研发模式的高消耗率。体外... 详细信息

虽然药物研发领域的科研投入和科学性成果在过去几十年进展显著,但制药行业的有效产出不高却是不争的事实。目前越来越多的研究者将疾病或生物学相关的筛选方法和模型应用在药物开发的早期阶段以降低现有药物研发模式的高消耗率。体外细胞成像技术作为一种在细胞或组织水平进行高分辨率成像和精确定量分析的技术,在发现和鉴别药物靶点、新化合物实体(New Chemical Entities,NCEs)毒性筛选以及早期的毒性研究和安全性评价中广泛应用。药物靶点的发现和鉴别使用荧光显微镜或激光共聚焦扫描显微镜追踪在细胞水平表达的荧光蛋白(如绿色荧光蛋白,GFP),可以进行药物或配体与受体间相互作用的实时分析,其分辨率可以精确到200 nm。流式细胞术广泛应用于生物类药物相关的肿瘤相关细胞表面标志物的筛选。在G蛋白偶联受体(GPCR)类药物作用于靶受体后,可以使用细胞成像技术追踪和定量检测细胞质和内质网的Ca浓度变化动态,确定药物是否能引起细胞Ca过载的毒性作用。新化合物实体毒性筛选体外细胞成像技术在作用于GPCR类新化合物实体的高通量筛选(HTS)研究中应用广泛。使用荧光染料检测新化合物实体对稳定转染表达肾上腺素类,嘌呤类和神经激肽类受体的细胞的Ca浓度变化,细胞的电压依赖性离子通道(BK,Kir 3.x,hERG)开放以及膜电位的变化,可以进行新化合物实体的药效和毒性筛选试验。药物早期毒性研究和安全性评价在药物开发阶段采用体外细胞成像技术进行候选药物的体外吸收、分布、代谢、和排泄毒性(ADME)研究可以完善和补充药物后期的体内ADME毒性研究数据,并具有高效率和低成本的优势。基于细胞成像技术的体外微核试验目前在候选药物早期遗传毒性研究中得到逐渐应用。使用培养的哺乳动物细胞系进行体外微核试验,其快速高效低成本的优势可以作早期遗传毒性筛选,并为传统体内微核试验提供数据完善和补充。体外微核试验现在已经突破性地可以使用细胞成像技术进行高通量地定量计算微核形成率。细胞成像技术在新化合物实体毒性筛选以及候选药物早期毒性研究和安全性评价中的应用,可以实现对药物进行实时药物活性的动态分析和毒性研究,确立药物结构-通路的药物开发模式,淘汰具有潜在毒性的新化合物实体,减少资源消耗并加速药物研发的效率和进程。

关键词：细胞成像技术新化合物实体发现毒理学毒性安全性评价

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细胞成像技术在药物发现毒理学中的应用

细胞成像技术在药物发现毒理学中的应用

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作者：方晓峰沈旭张宝林黄尚辉许容颜苏州西山中科药物研究开发有限公司

虽然药物研发领域的科研投入和科学性成果在过去几十年进展显著,但制药行业的有效产出不高却是不争的事实。目前越来越多的研究者将疾病或生物学相关的筛选方法和模型应用在药物开发的早期阶段以降低现有药物研发模式的高消耗率。体外细胞成像技术作为一种在细胞或组织水平进行高分辨率成像和精确定量分析的技术,在发现和鉴别药物靶点、新化合物实体(New Chemical Entities,NCEs)毒性筛选以及早期的毒性研究和安全性评价中广泛应用。药物靶点的发现和鉴别使用荧光显微镜或激光共聚焦扫描显微镜追踪在细胞水平表达的荧光蛋白(如绿色荧光蛋白,GFP),可以进行药物或配体与受体间相互作用的实时分析,其分辨率可以精确到200 nm。流式细胞术广泛应用于生物类药物相关的肿瘤相关细胞表面标志物的筛选。在G蛋白偶联受体(GPCR)类药物作用于靶受体后,可以使用细胞成像技术追踪和定量检测细胞质和内质网的Ca~(2+)浓度变化动态,确定药物是否能引起细胞Ca~(2+)过载的毒性作用。新化合物实体毒性筛选体外细胞成像技术在作用于GPCR类新化合物实体的高通量筛选(HTS)研究中应用广泛。使用荧光染料检测新化合物实体对稳定转染表达肾上腺素类,嘌呤类和神经激肽类受体的细胞的Ca~(2+)浓度变化,细胞的电压依赖性离子通道(BK,Kir 3.x,hERG)开放以及膜电位的变化,可以进行新化合物实体的药效和毒性筛选试验。药物早期毒性研究和安全性评价在药物开发阶段采用体外细胞成像技术进行候选药物的体外吸收、分布、代谢、和排泄毒性(ADME)研究可以完善和补充药物后期的体内ADME毒性研究数据,并具有高效率和低成本的优势。基于细胞成像技术的体外微核试验目前在候选药物早期遗传毒性研究中得到逐渐应用。使用培养的哺乳动物细胞系进行体外微核试验,其快速高效低成本的优势可以作早期遗传毒性筛选,并为传统体内微核试验提供数据完善和补充。体外微核试验现在已经突破性地可以使用细胞成像技术进行高通量地定量计算微核形成率。细胞成像技术在新化合物实体毒性筛选以及候选药物早期毒性研究和安全性评价中的应用,可以实现对药物进行实时药物活性的动态分析和毒性研究,确立药物结构-通路的药物开发模式,淘汰具有潜在毒性的新化合物实体,减少资源消耗并加速药物研发的效率和进程。

关键词：细胞成像技术新化合物实体发现毒理学毒性安全性评价

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3种农药的急性毒性

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中国药理学与毒理学杂志 2013年第3期 552-552页

作者：许容颜沈旭黄尚辉方晓峰苏州西山中科药物研究开发有限公司

目的检测70%吡虫啉可湿性粉剂、5%己唑醇悬浮剂、450 g.L-1戊唑醇悬浮剂3种农药的急性毒性。方法按照GB 15670-1995《农药登记毒理学试验方法》对3种农药进行急性毒性6项试验。急性经口毒性试验中70%吡虫啉可湿性粉剂采用机率单位法,5%... 详细信息

目的检测70%吡虫啉可湿性粉剂、5%己唑醇悬浮剂、450 g.L-1戊唑醇悬浮剂3种农药的急性毒性。方法按照GB 15670-1995《农药登记毒理学试验方法》对3种农药进行急性毒性6项试验。急性经口毒性试验中70%吡虫啉可湿性粉剂采用机率单位法,5%己唑醇悬浮剂采用限量法,450 g.L-1戊唑醇悬浮剂采用霍恩氏法。急性经皮毒性试验3种农药均采用限量法进行试验。急性吸入毒性试验中采用大鼠全身暴露于染毒柜内接触的方式进行给药。急性皮肤刺激试验和眼刺激试验均选择4只健康成年新西兰白兔进行试验。豚鼠皮肤变态反应试验设阴性对照组、给药组和阳性对照组;致敏接触时阳性对照组给予α-己基肉桂醛原液,激发接触时阳性对照组给予50%α-己基肉桂醛。结果 70%吡虫啉可湿性粉剂急性经口毒性试验中,给药后30 min观察,大鼠呈现与剂量相关的毒性症状,出现了抽搐、呼吸困难、流涎和死亡的症状,LD50值为891 mg·kg-1;5%己唑醇悬浮剂经口给予5000 mg·kg-1的剂量后未出现任何毒性症状,LD50大于5000 mg·kg-1;450 g.L-1戊唑醇悬浮剂急性经口LD50等于5000 mg·kg-1;根据指导原则分级标准,3种农药经口毒性均为低毒级。急性经皮毒性3种农药的LD50值均大于2000 mg·kg-1,根据指导原则分级标准均为低毒级。急性吸入毒性试验中,3种农药急性吸入LC50(2 h)均大于2000 mg.m-3,属低毒级。3种农药家兔皮肤刺激性试验中,皮刺最高积分均值均为0,根据指导原则皮肤刺激强度分级标准为无刺激性。70%吡虫啉可湿性粉剂的眼刺最高积分均值为11.3,眼刺激的平均指数48 h后为4.8,根据指导原则眼刺激强度分级标准属轻度刺激;其余2种农药对家兔眼无刺激性。3种农药皮肤变态反应试验均为Ⅰ级弱致敏物。结论 3种农药的急性毒性数据与现有文献报道基本一致。生产者和使用者要注意个人防护。

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