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荒漠甲虫小胸鳖甲抗冻蛋白的酵母表达及应用

生物工程学报 2015年第8期31卷 1255-1265页

作者：孟闪闪蔡文萍马纪新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室新疆乌鲁木齐830046

昆虫抗冻蛋白(Antifreeze protein,AFP)的抗冻活性很高,可应用于生物组织和细胞的低温保存。为了在酵母中表达荒漠甲虫小胸鳖甲Microdera punctipennis抗冻蛋白Mp AFP698,并确定其在低温下的保护作用,本文通过构建真核表达载体p PIC9K-M... 详细信息

昆虫抗冻蛋白(Antifreeze protein,AFP)的抗冻活性很高,可应用于生物组织和细胞的低温保存。为了在酵母中表达荒漠甲虫小胸鳖甲Microdera punctipennis抗冻蛋白Mp AFP698,并确定其在低温下的保护作用,本文通过构建真核表达载体p PIC9K-Mpafp698,转化巴斯德毕赤酵母GS115,诱导表达小胸鳖甲抗冻蛋白Mp AFP698。利用免疫印迹(Western blotting)分析Mp AFP698蛋白的特异性表达,结果显示Mpafp698基因可整合到酵母基因组中并分泌表达,且酵母自身蛋白很少分泌表达。检测抗冻蛋白的低温保护作用,结果发现,小胸鳖甲抗冻蛋白可显著改善冷冻小鼠肝脏等器官的细胞形态,降低血细胞在4℃的溶血率,提高SF9细胞冻融后的存活率。本研究表明,小胸鳖甲AFP可以在毕赤酵母中分泌表达,便于纯化,有良好的低温保护效果。

关键词：抗冻蛋白低温保存应用巴斯德毕赤酵母血细胞

城乡高中学生音乐学习现状对比研究——以陕西省部分学校为例

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城乡高中学生音乐学习现状对比研究——以陕西省部分学校为例

作者：蔡文萍陕西师范大学

学位级别：硕士

2007年陕西省全面启动高中新课改以来,音乐课成为了高中学生的必修课。高中阶段的音乐教育是音乐教育的重要组成部分,对“准成人教育阶段”的高中生陶冶高尚的审美情操、培养积极向上的审美观念及身心健康发展等方面都起着举足轻重的作... 详细信息

2007年陕西省全面启动高中新课改以来,音乐课成为了高中学生的必修课。高中阶段的音乐教育是音乐教育的重要组成部分,对“准成人教育阶段”的高中生陶冶高尚的审美情操、培养积极向上的审美观念及身心健康发展等方面都起着举足轻重的作用。但是,基于我国城乡社会经济条件差别较大的状况,陕西省各市县城乡高中音乐教育的差距较大,城乡高中学生音乐学习的现状呈现出一些显著不同的特点。本研究以陕西省城区与县级的各十所高中为例,对来自城市与农村的高中学生的音乐学习现状进行调查与对比研究,了解城乡不同的教育文化背景、课内外音乐学习背景、城乡学生学习音乐的行为与态度。分析产生差异的原因,归纳出影响城乡高中学生不同音乐学习现状的因素,并试图提出促进城乡高中音乐教育均衡的建议与对策,以期为有关部门进一步实现城乡素质教育公平、减小城乡教育差距提供有效信息,从而改善城乡高中不同的音乐教育现状,有针对性地指导高中学生学习音乐。研究主要通过调查问卷、访谈、对比分析等方法;对所调查学校的教师、学生、学校及家长进行多方面的数据资料收集,结合亲身实地调研,通过科学具体的信息处理,综合比较,合理归纳所涉及的问题,最终总结出以下诸多方面的差异：一、教育文化背景上城市工业文明与农村小农文化背景的差异;二、城市课内外学习环境(师资、开课、教材与设备)总体上好于农村;三、城乡学生学习音乐的行为与态度呈现出不同的特点。在以上现状分析的基础上,笔者对如何改进陕西省城乡高中生音乐学习现状,进行了一些思考与探索。一、观念先行,树立教育公平的理念;二、政府主导,建立合理的教育管理体系;三、完善体制,建立公开公正的制度与政策;四、内涵发展,城乡各校自主加强教学效能;五、关注兴趣,铺设校园环境,开展实践活动;六、城市带动,城乡学校的互助交流;七、借鉴经验,逐步实现教育资源共享。

关键词：城乡高中学生音乐学习现状对比

面向稳态视觉诱发电位识别算法的多通道脑电采集系统研究

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面向稳态视觉诱发电位识别算法的多通道脑电采集系统研究

作者：蔡文萍福州大学

学位级别：硕士

小胸鳖甲抗冻蛋白酵母表达条件优化及应用研究

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小胸鳖甲抗冻蛋白酵母表达条件优化及应用研究

作者：蔡文萍新疆大学

学位级别：硕士

抗冻蛋白（antifreeze protein, AFP）最早是1969年Devries在极区海鱼血液中被发现,是一类抑制冰晶生长的蛋白质,能以非依数性形式降低水溶液的冰点而对其熔点影响甚微,从而导致水溶液的熔点和冰点之间出现差值。这种差值称为热滞活性（... 详细信息

抗冻蛋白（antifreeze protein, AFP）最早是1969年Devries在极区海鱼血液中被发现,是一类抑制冰晶生长的蛋白质,能以非依数性形式降低水溶液的冰点而对其熔点影响甚微,从而导致水溶液的熔点和冰点之间出现差值。这种差值称为热滞活性（thermal hysteresis activity, THA）,因而AFP亦称为热滞蛋白（thermal hysteresis protein, THP）。具有三个基本特征：热滞效应（THA）、冰晶形态效应、重结晶抑制效应（RI）,它广泛存在于多种生物体中,如鱼类、昆虫、植物、细菌和真菌,其中昆虫抗冻蛋白是目前抗冻活性最高的一类抗冻蛋白。昆虫抗冻蛋白一般认为是在脂肪体中合成,然后释放到血淋巴中通过氢键与冰晶结合阻止冰晶生长从而保护自身。对昆虫抗冻蛋白的研究起步较晚,研究发现许多陆生昆虫都存在抗冻蛋白,并且昆虫抗冻蛋白具有非常高的热滞活性。小胸鳖甲（Microdera punctipennis）是分布于新疆荒漠极端环境中的拟步甲科昆虫,能耐受冬季的低温和春季剧烈的温差变化。其抵抗低温的机制与抗冻蛋白（antifreeze protein, AFP）的生物活性有关。抗冻蛋白可广泛应用于农业、医学、食品、工业等科学领域。天然抗冻蛋白来源十分有限,因此获取高活性高质量的抗冻蛋白日益成为舆待解决的问题。由于昆虫抗冻蛋白独特的结构和生物学活性（分子量小,蛋白亚型多）给分离纯化天然昆虫抗冻蛋白带来一定的难度。通过基因工程技术已对少数昆虫抗冻蛋白进行了表达和纯化。由于高活性的昆虫抗冻蛋白p-螺旋结构的正确折叠需要众多二硫键的参与,因而细菌表达系统中往往不能表达具有正确构象的高活性昆虫抗冻蛋白或者是产生不可溶的包涵体蛋白,这类蛋白必须经过变性、复性、重折叠过程之后才能获得正确折叠的有活性的抗冻蛋白,且该过程往往需要较复杂的纯化方法,不适于大量生产。近年有用酵母表达系统来表达富含二硫键的昆虫抗冻蛋白的报道。但是到目前为止还没有获得生产活性抗冻蛋白的高产表达系统。因此采用基因工程技术获取昆虫抗冻蛋白仍是需要解决的问题。巴斯德毕赤酵母表达系统具有如下优点：在蛋白质诱导表达的过程中虽然以甲醇作为唯一的碳源,但不存在像细菌、动物细胞培养中的内毒残留问题：具有真核生物翻译后的糖基化修饰、折叠、加工和外分泌的环境,使生产的蛋白具有天然的空间结构及生物学活性;有两个编码乙醇氧化酶基因：AOX1、AOX2,其中AOXI基因的表达主要受较高水平的甲醇诱导和调节。毕赤酵母既保持了酿酒酵母的优点,还能大幅度提高外源蛋白的产量。本研究采用巴斯德毕赤酵母表达系统表达小胸鳖甲抗冻蛋白MpAFP698,通过筛选高拷贝转化菌株,并对巴斯德毕赤酵母表达条件进行优化;同时对真核表达的MpAFP698的低温保护活性、酸碱及热稳定性进行测定;检测MpAFP698对小鼠脏器,昆虫卵细胞SF9及葡萄的低温保护作用。主要研究结果如下： 1.构建真核表达载体pPIC9K-Mpafp698,转化巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris,筛选获得重组子后甲醇诱导巴斯德酵母表达系统表达小胸鳖甲抗冻蛋白MpAFP698。提取已经获得的酵母重组子基因组,PCR鉴定目的基因的整合及转化子的Mut表型,小量摇瓶发酵后取上清液作Tricine SDS-PAGE电泳和免疫印迹（Western blotting）分析。结果表明Mpafp698基因成功整合到宿主菌的基因组中,且所有的His+阳性转化子均为Mut+表型;经诱导发酵MpAFP698表达正确。 2.采用不同浓度G418抗性筛选高拷贝阳性转化子,诱导表达MpAFP698后对其蛋白浓度,THA, SCP,之间的相关性进行分析;并检测重组抗冻蛋白MpAFP698的耐酸碱性和耐热性,同时测定内源表达MpAFP698的酵母菌的耐寒性及外源添加MpAFP698对细菌的保护活性。在MD平板上筛选到His+阳性克隆,经G418抗性筛选,获得高拷贝阳性转化子;同时昆虫抗冻蛋白MpAFP698具有较强的热稳定特性,可以耐受100℃高温,并能维持10-15min而使活性变化不大。MpAFP698具有较强的酸碱稳定特性,可耐受极端酸碱环境。表达MpAFP698的酵母菌耐寒性显著提高;MpAFP698可显著提高菌体在-7℃及42℃的存活率。 3.对工程菌发酵甲醇诱导浓度、诱导时间及温度条件进行优化。研究表明,在甲醇浓度为1.0%,温度为25℃时,发酵时间为4d时MpAFP698的表达量最高。 4.检测低温条件下小胸鳖甲抗冻蛋白对小鼠脏器细胞形态、血细胞的溶血、昆虫SF9细胞存活率以及低温保存葡萄的影响,表明小胸鳖甲抗冻蛋白可显著改善冷冻小鼠肝脏等的细胞形态,明

关键词： MpAFP698 巴斯德毕赤酵母发酵优化性质应用

在医院管理中加强价格监督检查机制建设的思考

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中国医院管理 2007年第2期27卷 13-14页

作者：侯淑芳蔡文萍薛赤吉林大学第一医院吉林长春130021

1 严格医院价格监督检查的意义医院内部的价格监督检查是指医院的经营管理者在医院内部树立起价格法制观念，认真审核医院在价格方面是否符合国家有关法律、法规和政策的要求，发现错误和偏差时，自觉、主动、及时进行纠正，对自身行为... 详细信息

1 严格医院价格监督检查的意义医院内部的价格监督检查是指医院的经营管理者在医院内部树立起价格法制观念，认真审核医院在价格方面是否符合国家有关法律、法规和政策的要求，发现错误和偏差时，自觉、主动、及时进行纠正，对自身行为进行自我约束的一种监督检查方式。它是国家监督和社会监督的基础。进行医院内部的价格监督检查，是促进医院全面发展的必然要求。

关键词：医院价格监督机制建设基本要求

乌鲁木齐市中小学生膳食模式与超重肥胖的相关性研究

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中国儿童保健杂志 2023年第4期31卷 433-437页

作者：蔡文萍郭妮娅乌鲁木齐市第一人民医院新疆乌鲁木齐830011

目的分析乌鲁木齐市中小学生膳食模式,并探究其与超重肥胖的相关性。方法通过分层整群抽样法,于2020年3月—2021年12月抽取乌鲁木齐市新市区、天山区、沙依巴克区、水磨沟区8所中小学共674名中小学生作为调查对象,通过问卷收集调查对象... 详细信息

目的分析乌鲁木齐市中小学生膳食模式,并探究其与超重肥胖的相关性。方法通过分层整群抽样法,于2020年3月—2021年12月抽取乌鲁木齐市新市区、天山区、沙依巴克区、水磨沟区8所中小学共674名中小学生作为调查对象,通过问卷收集调查对象的一般资料、膳食数据,分别采用膳食频率法、因子分析法分析乌鲁木齐市中小学生膳食摄入频率、摄入量及膳食模式。同时采用三维建模体成分分析仪测量中小学生体成分数据、计算BMI-Z值,评定超重及肥胖。采用多元Logistic回归模型分析膳食模式与超重肥胖的相关性。结果本研究提取了乌鲁木齐市儿童的3种膳食模式:甜品加工组与饮料、冰淇淋、汉堡包、饼干等高摄入量有关,健康意识组以牛奶、蔬菜、水果、谷类食品等为主要食物,主食肉类组以牛肉、猪肉、羊肉等有关的食物为主要食物;按照年龄分层,与7~11岁甜品加工组、主食肉类组比较,7~11岁健康意识组BMI、体脂量、基础代谢率、体脂百分比更低(P<0.05),与12~17岁甜品加工组、主食肉类组比较,12~17岁健康意识组肌肉量、基础代谢率、体脂百分比更低(P<0.05);Logistic回归分析模型分析结果显示,在调整混杂因素后,健康意识组得分越高,中小学生超重肥胖发生风险越小(OR=0.59,95%CI:0.39~0.92)。结论乌鲁木齐市中小学生膳食模式与超重肥胖之间有相关性,改变膳食模式有利于中小学生健康成长。

关键词：膳食模式超重肥胖青少年

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抗冻蛋白应用前景及基因工程表达研究进展

新疆农业科学 2012年第10期49卷 1897-1901页

作者：蔡文萍马纪新疆生物资源基因工程重点实验室/新疆大学生命科学与技术学院乌鲁木齐830046

抗冻蛋白(antifreeze protein,AFP)又称为热滞蛋白,是一类抑制冰晶生长的蛋白,它具有三个基本特征:热滞效应(thermal hysteresis activity,THA)、冰晶形态效应和重结晶抑制效应(frecrystallization inhibition,RI),抗冻蛋白是一类广泛存在于鱼类、植物、真菌、昆虫中的蛋白,不同生物的AFPs的化学结构、理化性质、空间构型各不相同,并且同类生物之间的AFPs同源性也不高,不存在相似性序列或结构模式,说明它们可能是在不同的有机体中独立进化而来,没有共同的演化规律。随着研究的深入,抗冻蛋白可广泛应用于医学农学食品工业等领域,起到冷冻保护剂,食品添加剂的作用,前人已经对抗冻蛋白的结构、生化性质和抗冻机制进行了阐述,研究主要对抗冻蛋白应用方面及基因工程的表达作了系统综述,为抗冻蛋白的深入研究奠定基础。

关键词：抗冻蛋白应用基因工程表达

聚乙二醇修饰的壳聚糖包裹DNA的转染效果研究

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生物技术 2010年第5期20卷 29-32页

作者：蔡文萍李轶杰新疆生物资源基因工程重点实验室新疆大学生命科学与技术学院新疆乌鲁木齐830046

目的:为探讨聚乙二醇(PEG,MW4000)修饰的壳聚糖用于包裹质粒DNA(Chi-DNA)是否能有效提高口服发送的外源基因在消化道中的表达量。方法:用PEG修饰的壳聚糖包裹不同剂量(10μg,50μg,100μg)的质粒(pCMVβ),形成壳聚糖纳米复合物,通过口... 详细信息

目的:为探讨聚乙二醇(PEG,MW4000)修饰的壳聚糖用于包裹质粒DNA(Chi-DNA)是否能有效提高口服发送的外源基因在消化道中的表达量。方法:用PEG修饰的壳聚糖包裹不同剂量(10μg,50μg,100μg)的质粒(pCMVβ),形成壳聚糖纳米复合物,通过口服发送后经X-gal染色法检测pCMVβ在小鼠消化道内的表达效果。结果:胃酸消化实验及DNaseⅠ消化实验均表明经PEG修饰的壳聚糖纳米粒能有效地保护DNA,使其免受胃酸及DnaseⅠ的降解。同时在小鼠消化道内的表达量较修饰前明显增加,随着所发送DNA剂量的增加,表达量也相应增加,且包裹10μg质粒的DNA纳米复合物的表达量相当于100μg未修饰复合物的表达水平。结论:经PEG修饰的Chi-DNA纳米复合物有较高的基因转染效果,有望作为基因治疗中高效非病毒口服发送系统的材料。

关键词：聚乙二醇(PEG) 壳聚糖 Chi-DNA纳米复合物口服转染效果

财务管理企业腾飞的翅膀——基于我国工艺品企业财务管理的研究

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财经界 2015年第27期 239-239页

作者：蔡文萍泉州亚伦轻工有限公司

改革开放三十多年来,带动了我国旅游业的大发展,我国具有民族特色的工艺品成为国内外游客竞相购买的商品。并在其旅游成本支出中占到很大一部分。目前,我国工艺品行业的发展呈现出欣欣向荣的局面。在我国工艺品市场一派繁荣的景象背后... 详细信息

改革开放三十多年来,带动了我国旅游业的大发展,我国具有民族特色的工艺品成为国内外游客竞相购买的商品。并在其旅游成本支出中占到很大一部分。目前,我国工艺品行业的发展呈现出欣欣向荣的局面。在我国工艺品市场一派繁荣的景象背后我们不能不承认这些企业中存在的财务管理问题。本文将就目前我国工艺品企业存在的财务管理问题进行分析,并找出具有针对性的对策。

关键词：财务管理企业发展问题策略