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NDRG1过表达对去势抵抗性前列腺癌耐药细胞株C4-2/ENZA耐药性的影响及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2024年第3期50卷 708-717页

作者：张鹰万朝辉蒋先训南华大学衡阳医学院附属第二医院重症医学科湖南衡阳421001 南华大学衡阳医学院附属第二医院急诊科湖南衡阳421001

目的:探讨N-myc下游调节基因1(NDRG1)对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)恩杂鲁胺(ENZA)耐药的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养人CRPC C4-2细胞和ENZA耐药株C4-2/ENZA细胞,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测C4-2/ENZA细胞及其亲本C4-2... 详细信息

目的:探讨N-myc下游调节基因1(NDRG1)对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)恩杂鲁胺(ENZA)耐药的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养人CRPC C4-2细胞和ENZA耐药株C4-2/ENZA细胞,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测C4-2/ENZA细胞及其亲本C4-2细胞中NDRG1 mRNA表达水平,Western blotting法检测C4-2/ENZA细胞及其亲本C4-2细胞中NDRG1、雄激素受体(AR)和前列腺特异性抗原(PSA)蛋白表达水平,以验证细胞转染效率。将C4-2/ENZA细胞分为空白组(正常培养不进行处理)、阴性对照慢病毒(Lv-NC)组(转染Lv-NC)、Lv-NDRG1组(转染Lv-NDRG1)、Lv-NC+ENZA组(转染Lv-NC后加入ENZA处理)、Lv-NDRG1+ENZA组(转染Lv-NDRG1后加入ENZA处理)、Lv-NDRG1+表皮生长因子(EGF)组(转染Lv-NDRG1后加入EGF处理)和Lv-NDRG1+EGF+ENZA组(转染Lv-NDRG1后加入EGF和ENZA处理)。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞半数抑制浓度(IC_(50))、耐药指数(RI)和细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,RT-qPCR法检测各组细胞中NDRG1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中NDRG1、AR、第213位丝氨酸磷酸化雄激素受体(p-ARSer^(213))、第81位丝氨酸磷酸化雄激素受体(p-ARSer^(81))和PSA蛋白表达水平。结果:与C4-2细胞比较,C4-2/ENZA细胞中NDRG1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),AR和PSA蛋白表达水平明显升高(P<0.01),提示ENZA耐药株C4-2/ENZA中NDRG1低表达;与Lv-NC组比较,LvNDRG1组细胞中NDRG1 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),提示成功构建NDRG1基因过表达C4-2/ENZA耐药细胞株。MTT法,与C4-2细胞比较,C4-2/ENZA细胞IC_(50)明显升高(P<0.01),RI为17.78;与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1组C4-2/ENZA细胞IC_(50)明显降低(P<0.01)。EGF处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NC+EGF组C4-2/ENZA细胞IC_(50)明显升高(P<0.01);与Lv-NDRG1组比较,Lv-NDRG1+EGF组C4-2/ENZA细胞IC_(50)明显升高(P<0.01)。与ENZA处理前比较,不同浓度ENZA处理24 h,C4-2和C4-2/ENZA细胞增殖活性均逐渐降低(F=223.80,P<0.01;F=81.46,P<0.01)。ENZA处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1组C4-2/ENZA细胞增殖活性明显降低(P<0.01)。EGF处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NC+EGF组C4-2/ENZA细胞增殖活性明显升高(P<0.01),Lv-NDRG1+EGF组C4-2/ENZA细胞增殖活性明显降低(P<0.01)。选择10.000μmol·L^(-1) ENZA和干预24 h作为后续检测浓度及时间点。流式细胞术,ENZA处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1组细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与Lv-NC+ENZA组比较,Lv-NDRG1+ENZA组细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。EGF处理24h,与Lv-NDRG1组比较,Lv-NDRG1+EGF组细胞凋亡率明显降低(P<0.01),Lv-NDRG1+ENZA组细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与Lv-NDRG1+ENZA组比较,Lv-NDRG1+EGF+ENZA组细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。Western blotting法,ENZA处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1组细胞中AR和PSA蛋白表达水平及p-ARSer^(213)/AR和p-ARSer^(81)/AR比值均明显降低(P<0.05或P<0.01)。EGF处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NC+EGF组细胞中AR和PSA蛋白表达水平及p-ARSer^(213)/AR和p-ARSer^(81)/AR比值均明显升高(P<0.05或P<0.01);与Lv-NDRG1组比较,Lv-NDRG1+EGF组细胞中AR和PSA蛋白表达水平及p-ARSer^(213)/AR和p-ARSer^(81)/AR比值均明显升高(P<0.01)。结论:NDRG1过表达可降低CRPC对ENZA的耐药性,其作用机制可能与抑制AR信号转导有关。

关键词：去势抵抗性前列腺癌 N-myc下游调节基因1 恩杂鲁胺耐药性雄激素受体

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miR-149-5p靶向FGF21对大鼠心肌细胞的缺氧/复氧损伤的促进作用

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解放军医学杂志 2023年第3期48卷 275-282页

作者：蒋先训张凯张鹰南华大学衡阳医学院附属第二医院重症医学科湖南衡阳421000

目的探究miR-149-5p与成纤维细胞生长因子21(FGF21)的靶向关系,及其对大鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的影响。方法将10只C56BL/6J雄性小鼠构建缺血再灌注(I/R)模型,qRT-PCR法检测I/R小鼠心脏组织中miR-149-5p表达水平的变化。将培养... 详细信息

目的探究miR-149-5p与成纤维细胞生长因子21(FGF21)的靶向关系,及其对大鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的影响。方法将10只C56BL/6J雄性小鼠构建缺血再灌注(I/R)模型,qRT-PCR法检测I/R小鼠心脏组织中miR-149-5p表达水平的变化。将培养至生长对数期的H9c2大鼠心肌细胞分为对照组、H/R组、H/R+miR-149-5pinhibitor组、H/R+miR-149-5p NC组、H/R+miR-149-5p mimics组、H/R+miR-149-5p mimics+FGF21组,并诱导H/R模型及转染处理。ELISA法检测H9c2细胞中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性;MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;qRT-PCR检测细胞中miR-149-5p的表达水平;Western blotting检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、FGF21蛋白的表达水平;双荧光素酶测定miR-149-5p与FGF21的靶向关系。结果与假手术组比较,I/R小鼠心脏组织中miR-149-5p表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,H/R组H9c2细胞凋亡率、LDH和CK活性及Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),细胞活力及FGF21、Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与H/R组和H/R+miR-149-5p NC组比较,H/R+miR-149-5pinhibitor组细胞凋亡率、LDH和CK活性及Bax、cleavedcaspase-3蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),细胞活力及FGF21、Bcl-2蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与H/R组比较,H/R+miR-149-5pmimics组细胞凋亡率、LDH和CK活性及Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),细胞活力及FGF21、Bcl-2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与H/R+miR-149-5p mimics组比较,H/R+miR-149-5p mimics+FGF21组细胞凋亡率及LDH和CK活性均明显降低(P<0.05),细胞活力明显升高(P<0.05)。双荧光素酶检测结果显示miR-149-5p与FGF21基因有靶向调控关系。结论 miR-149-5p在I/R小鼠心肌组织中明显上调,可负向调控FGF21水平,导致H/R处理的大鼠心肌细胞活力下降、凋亡增加。

关键词： miR-149-5p 缺血再灌注成纤维细胞生长因子21 细胞凋亡

盐霉素对前列腺癌PC-3细胞及微球体的体外增殖抑制作用

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盐霉素对前列腺癌PC-3细胞及微球体的体外增殖抑制作用

作者：蒋先训南华大学

学位级别：硕士

目的：观察盐霉素对人前列腺癌PC-3细胞体外增殖的影响;观察盐霉素对PC-3细胞中CD44+及CD133+双阳性细胞及其形成微球体的影响;从PC-3细胞中筛选出与盐霉素作用密切相关的基因组。材料与方法：1：采用MTT法检测不同浓度盐霉素作用后... 详细信息

目的：观察盐霉素对人前列腺癌PC-3细胞体外增殖的影响;观察盐霉素对PC-3细胞中CD44+及CD133+双阳性细胞及其形成微球体的影响;从PC-3细胞中筛选出与盐霉素作用密切相关的基因组。材料与方法：1：采用MTT法检测不同浓度盐霉素作用后PC-3细胞的活性，酶标仪在570nm波长下测定其吸光值，绘制曲线并计算出IC50;2:将培养的PC-3细胞分为A、B、C三组，A组为空白对照组，B组为加9uM DMSO溶媒对照组，C为加9uM盐霉素的实验组，各组内再分别予CD133鼠抗人单抗、CD44鼠抗人单抗及两种抗体同时标记，予流式细胞仪检测盐霉素作用前后各组细胞的阳性比例，统计学软件进行数据分析;3:将分选的干细胞培养成肿瘤微球体，显微镜下观察肿瘤微球体的变化，并观察盐霉素作用后微球体的解聚情况;4：通过microarray技术检测盐霉素作用前后PC-3细胞的基因表达谱，并采用Treeview软件对基因表达谱进行差异性分析，以上调或下调10倍以上为标准，筛选出与盐霉素作用密切相关的靶基因组，统计学分析筛选出最具代表性的2个靶基因，探讨基因的功能。结果：（1）不同浓度的盐霉素对PC-3均有抑制作用，其IC50为9.12μmol/ml。（2）与空白对照组相比较，盐霉素组中CD44+、CD133+细胞及双阳性细胞的比例均降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。（3）与DMSO组相比较，盐霉素组CD44+、CD133+细胞及双阳性细胞的比例均降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。（4）与空白对照组相比较，DMSO组CD44+、CD133+细胞及双阳性细胞的比例无明显降低，差异无统计学意义（P＞0.05）。（5）盐霉素能促进肿瘤微球体的解聚，使细胞体积增大，肿胀而死亡。（6） microarray检测结果显示：表达10倍以上下调的基因15个，表达10倍以上上调基因的34个，其中， POSTN基因下调13.2倍，CALB2基因上调47.55倍。结论：（1）盐霉素能有效抑制体外人前列腺癌PC-3细胞的增殖。（2）盐霉素能明显降低PC-3细胞中CD44+及CD133+细胞的比例，并能促使肿瘤干细胞形成的肿瘤微球体的解聚，其可能是通过杀灭前列腺癌肿瘤干细胞来抑制PC-3细胞的生长。（3）盐霉素能改变PC-3细胞的基因表达，明显上调CALB2基因的表达及下调POSTN基因的表达。

关键词：微球体盐霉素肿瘤干细胞前列腺癌

薯蓣皂苷元对心肌缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响及相关机制的分析

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中国循环杂志 2022年第5期37卷 526-532页

作者：蒋先训张凯张鹰南华大学衡阳医学院附属第二医院重症医学科湖南省衡阳市421000

目的:探究薯蓣皂苷元对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠细胞凋亡的影响,并初步分析其对NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)信号通路的作用。方法:采用左冠状动脉前降支结扎法建立MIRI大鼠模型,将造模成功的7... 详细信息

目的:探究薯蓣皂苷元对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠细胞凋亡的影响,并初步分析其对NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)信号通路的作用。方法:采用左冠状动脉前降支结扎法建立MIRI大鼠模型,将造模成功的72只大鼠,按照随机数字表法分成MIRI组、薯蓣皂苷元低剂量组(50 mg/kg)、薯蓣皂苷元中剂量组(75 mg/kg)和薯蓣皂苷元高剂量组(100 mg/kg),每组18只;另取18只大鼠为假手术组。造模完成后,给予相应药物灌胃,每日1次。末次给药后,记录每组大鼠在不同时间段的心脏血液动力学参数;三苯基四氮唑(TTC)法检测大鼠心肌梗死面积;苏木素-伊红染色检测各组心肌组织病理学变化;TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况;ELISA法检测大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;免疫蛋白印迹法检测大鼠心肌组织中NLRP3、Caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、IL-1β蛋白表达水平。结果:与假手术组相比,MIRI组大鼠心肌梗死面积更大,心肌细胞凋亡率、左心室舒张末期压力(LVEDP)、血清IL-6、IL-1β、TNF-α含量及心肌组织中NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β蛋白表达水平均显著升高(P均<0.05),左心室收缩压(LVSP)、左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS)及最大收缩/舒张期压力变化速率(±dp/dtmax)均显著降低(P均<0.05);与MIRI组相比,薯蓣皂苷元不同剂量干预组大鼠心肌梗死面积较小,细胞凋亡率、LVEDP、血清IL-6、IL-1β、TNF-α含量及心肌组织中NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β蛋白表达水平均显著降低(P均<0.05),LVSP、LVEF、FS及±dp/dtmax均显著升高(P均<0.05)。结论:薯蓣皂苷元可改善MIRI大鼠的心功能,减少炎症反应和细胞凋亡,可能与抑制NLRP3/caspase-1信号通路有关。

关键词：薯蓣皂苷元心肌缺血/再灌注损伤 NOD样受体蛋白3炎性小体细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1

circTLK1通过miR-26a-5p/YES1轴减轻小鼠心肌缺血/再灌注损伤

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中国比较医学杂志 2023年第8期33卷 86-94页

作者：蒋先训张凯张鹰南华大学衡阳医学院附属第二医院重症医学科湖南衡阳421000

目的探讨环状RNA凌乱样激酶1(circTLK1)在心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用和潜在机制。方法48只C57BL/6小鼠分为假手术组(Sham组)、MIRI组、sh-NC组、sh-circTLK1组、sh-circTLK1+antagomir-NC组、sh-circTLK1+antagomir-miR-26a-5p组,每组8只;采用结扎左冠状动脉前降支(LAD)建立MIRI小鼠模型。超声心动图检测小鼠左心室射血分数(EF)、左心室缩短分数(FS)、左心室舒张末期内径(LVEDD)和收缩末期内径(LVESD)以评估心脏功能,ELISA检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CKMB)水平,苏木精-伊红(HE)染色检测心肌组织病理学变化,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测心肌组织中circTLK1、miR-26a-5p、YES1 mRNA和蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验、RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)验证circTLK1/YES1和miR-26a-5p之间的相互作用。结果与Sham组相比,MIRI组小鼠EF、FS、心肌组织miR-26a-5p水平显著降低,LVEDD、LVESD、血清LDH、CK-MB活性和cTnI水平、心肌细胞凋亡率、心肌组织circTLK1、YES1 mRNA和蛋白水平显著升高(均P<0.05),心肌细胞排列紊乱,细胞间质有炎性细胞浸润;circTLK1敲低可显著上调miR-26a-5p,抑制YES1表达,改善上述指标变化(均P<0.05),减轻心肌损伤;抑制miR-26a-5p可通过上调YES1,显著减弱circTLK1敲低对MIRI的保护作用。双荧光素酶报告基因实验和RIP证实了circTLK1和miR-26a-5p之间的直接相互作用,YES1是miR-26a-5p的靶标。结论敲低circTLK1可能通过调节miR-26a-5p/YES1轴在MIRI中发挥保护作用,circTLK1可能是MIRI的潜在治疗靶点。

关键词：心肌缺血再灌注损伤环状RNA凌乱样激酶1 miR-26a-5p YES原癌基因1 细胞凋亡

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导致肾移植手术患者在术后不同时间段发生肺部混合感染的微生物种类分析

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当代医药论丛 2016年第23期14卷 22-24页

作者：蒋先训南华大学附属第二医院湖南衡阳421001

目的 :探讨导致进行肾移植手术的患者在术后不同时间段发生肺部混合感染(MPI)的微生物种类。方法 :将在我院接受肾移植手术后发生MPI的21例患者根据发病时间的不同分为早期组(术后3个月内发病)、中期组(术后3-12个月发病)与远期组(术后1... 详细信息

目的 :探讨导致进行肾移植手术的患者在术后不同时间段发生肺部混合感染(MPI)的微生物种类。方法 :将在我院接受肾移植手术后发生MPI的21例患者根据发病时间的不同分为早期组(术后3个月内发病)、中期组(术后3-12个月发病)与远期组(术后12个月后发病)。对各组患者进行病原体检测,然后分析其发生细菌(包括革兰阳性杆菌、革兰阴性杆菌与结核分枝杆菌)、真菌及病毒感染的情况,并观察其预后。结果:对本研究中的患者进行病原体检测的结果显示,其中有5例患者发生多重细菌混合感染,有7例患者发生细菌+真菌混合感染,有3例患者发生细菌+病毒混合感染,有6例患者发生细菌+真菌+病毒混合感染,其细菌感染的发生率为100%。在本研究的21例患者的血液、痰液及咽部分泌物中共培养出细菌26株。三组患者细菌感染、真菌感染的发生率相比较差异无统计学意义(P>0.05)。与早期组患者相比,中期组患者与远期组患者病毒感染的发生率较高,差异有统计学意义(P<0.05)。经治疗,在这21例患者中共有20例患者病愈出院,有1例患者因发生多器官功能障碍综合征(MODS)而死亡。该例死亡的患者为远期组患者。结论 :细菌是导致肾移植术后患者发生MPI的主要病原体。接受肾移植术的患者若在术后12个月后发生MPI,其合并病毒感染的几率较高,而且较易发生死亡。

关键词：肾移植术后肺部混合感染不同阶段治疗

雄激素非依赖性前列腺癌发生机制相关的信号传导通路研究进展

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现代医药卫生 2011年第23期27卷 3584-3585页

作者：蒋先训王毅彭潋南华大学附属第二医院泌尿外科湖南衡阳421101

几乎所有经过内分泌治疗的前列腺癌(prostate cancer,PCa)患者都会发展为雄激素非依赖性前列腺癌(androgen-inde-pendent prostate cancer,AIPC),而目前对AIPC尚无有效的治疗手段,因此,探索AIPC可能的发生机制成为基础与临床研究的重点... 详细信息

几乎所有经过内分泌治疗的前列腺癌(prostate cancer,PCa)患者都会发展为雄激素非依赖性前列腺癌(androgen-inde-pendent prostate cancer,AIPC),而目前对AIPC尚无有效的治疗手段,因此,探索AIPC可能的发生机制成为基础与临床研究的重点,本文就与AIPC相关的信号传导通路研究进展做一综述。

关键词：雄激素非依赖性前列腺癌磷脂酰肌醇-3-激酶雄激素受体肿瘤干细胞

血清25-(OH)D_(3)水平与儿童社区获得性肺炎(CAP)严重程度的相关性研究

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当代医药论丛 2024年第25期22卷 43-46页

作者：蒋训楠安顺市人民医院贵州安顺561000

目的:研究血清25-羟维生素D_(3)[25-(OH)D_(3)]水平与儿童社区获得性肺炎(CAP)严重程度的相关性。方法:收集2022年1月至2023年12月安顺市人民医院收治的重症CAP患儿86例(重症组)、轻症CAP患儿91例(轻症组)以及同期健康体检儿童98例(对照... 详细信息

目的:研究血清25-羟维生素D_(3)[25-(OH)D_(3)]水平与儿童社区获得性肺炎(CAP)严重程度的相关性。方法:收集2022年1月至2023年12月安顺市人民医院收治的重症CAP患儿86例(重症组)、轻症CAP患儿91例(轻症组)以及同期健康体检儿童98例(对照组)的血清25-(OH)D_(3)的检测结果,进行比较研究,并将肺炎患儿的生化指标差异[白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、血沉(ESR)、25-(OH)D_(3)]进行对比,分析25-(OH)D_(3)与儿童CAP严重程度的相关性。结果:重症组、轻症组与对照组的血清25-羟维生素D_(3)[25-(OH)D_(3)]差异显著,有统计学意义(P0.05)。结论:CAP患儿的血清25-(OH)D_(3)水平较健康儿童低,与疾病严重程度呈负相关。对25-(OH)D_(3)水平进行监测在一定程度上可评估患儿病情,为临床治疗提供依据。

关键词：血清25-羟维生素D_(3) 儿童社区获得性肺炎生化指标

核心素养下的跨学科主题学习实践策略——以地理课程与劳动课程融合为例

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学苑教育 2024年第22期 25-27页

作者：蒋国训河南省清丰县实验初级中学河南清丰457300

《义务教育课程方案(2022年版)》设置跨学科主题学习活动,提出课程协同育人价值。地理课程与劳动课程都具备实践性,将二者融合进行跨学科主题学习对培养学生在真实的生活情景中解决复杂问题的能力具有重要意义,是学生核心素养发展的重... 详细信息

《义务教育课程方案(2022年版)》设置跨学科主题学习活动,提出课程协同育人价值。地理课程与劳动课程都具备实践性,将二者融合进行跨学科主题学习对培养学生在真实的生活情景中解决复杂问题的能力具有重要意义,是学生核心素养发展的重要途径。文章倡导构建以地理课程为主导融合劳动课程的跨学科主题学习活动,并从跨学科主题选择、课程内容、课程实施和课程评价等方面提出实施策略。

关键词：核心素养跨学科主题学习实践策略