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H5N1亚型禽流感病毒RNA聚合酶PB1_P亚基片段的表达、纯化和结晶

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家畜生态学报 2012年第2期33卷 31-36页

作者：范克伟庞海陈吉龙黄志勇吴德峰福建农林大学生命科学学院福建福州350002 清华大学医学院北京100084 中国科学院微生物研究所北京100101 福建农林大学动物科学学院福建福州350002

根据GenBank中H5N1亚型禽流感病毒RNA聚合酶PB1基因序列设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增H5N1亚型禽流感病毒的PB1_P基因,克隆到原核表达载体pET-28a载体中,经PCR、酶切和测序分析后,鉴定出阳性重组子。将阳性质粒pET-28a/PB1_P... 详细信息

根据GenBank中H5N1亚型禽流感病毒RNA聚合酶PB1基因序列设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增H5N1亚型禽流感病毒的PB1_P基因,克隆到原核表达载体pET-28a载体中,经PCR、酶切和测序分析后,鉴定出阳性重组子。将阳性质粒pET-28a/PB1_P转化大肠杆菌BL21(DE3),用0.5mol/L IPTG,在37℃诱导表达4h,经SDS-PAGE和Western-blot检测,获得重组蛋白PB1_P表达。并经Ni-NTA柱亲和层析与柱层析纯化表达蛋白,采用悬滴气相扩散法对纯化蛋白进行结晶。结果成功构建pET-28a/PB1_P重组质粒,SDS-PAGE结果显示重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,Western-blot证明表达的融合蛋白具有良好的免疫原性,经蛋白纯化、初筛结晶,得到PB1_P重组蛋白初筛晶体,为深入研究流感病毒聚合酶的生物学功能、开发新型H5N1亚型禽流感病毒检测试剂盒奠定了良好的基础。

关键词：流感病毒H5N1 PB1_P 克隆表达纯化蛋白结晶

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AO锁骨钩钢板治疗肩锁关节脱位

中华创伤骨科杂志 2005年第10期7卷 989-990页

作者：范锡海王仁成赵平厚范克伟董军泰山医学院附属医院骨科山东省泰安市271000

目的探讨AO锁骨钩钢板治疗肩锁关节脱位的疗效。方法2001年6月～2004年6月,采用AO锁骨钩钢板治疗11例TossyⅢ型肩锁关节脱位患者。结果11例患者均获6～12个月随访。术后6～12个月(平均8.5个月)拔除内固定。按Lazzcano标准评定,优8例,良3... 详细信息

目的探讨AO锁骨钩钢板治疗肩锁关节脱位的疗效。方法2001年6月～2004年6月,采用AO锁骨钩钢板治疗11例TossyⅢ型肩锁关节脱位患者。结果11例患者均获6～12个月随访。术后6～12个月(平均8.5个月)拔除内固定。按Lazzcano标准评定,优8例,良3例,优良率为100%。无切口感染、内固定失败等并发症。结论AO锁骨钩钢板是治疗肩锁关节脱位的有效方法之一。

关键词： AO锁骨钩钢板肩锁关节脱位手术治疗切口感染肌腱移植

应用型本科院校《动物病理学》课程教学改革探索与实践

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长江大学学报（自然科学版） 2018年第6期15卷 79-81页

作者：陈洪博段滇宁周孝琼范克伟王华龙岩学院生命科学学院福建龙岩364012

以应用型人才培养的实施为切入点,构建产教融合、注重实践的动物病理学教学课程改革方案,利用"产学研"基地、新媒体辅助技术等手段,采取"以赛促学"、"双师同课"等方式,从课程目标、教学模式、教学方法、实践教学、考核评价方面进行探索... 详细信息

以应用型人才培养的实施为切入点,构建产教融合、注重实践的动物病理学教学课程改革方案,利用"产学研"基地、新媒体辅助技术等手段,采取"以赛促学"、"双师同课"等方式,从课程目标、教学模式、教学方法、实践教学、考核评价方面进行探索和实践,为应用型地方本科院校动物医学专业课程改革提供参考。

关键词：应用型本科院校《动物病理学》应用型人才培养

猪伪狂犬病毒野毒感染的PCR检测方法建立及应用

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家畜生态学报 2015年第10期36卷 66-69页

作者：范克伟戴爱玲吴德峰杨小燕江丹丹龙岩学院生命科学学院福建龙岩364012 福建省预防兽医学与兽医生物技术重点实验室福建龙岩364012 福建农林大学动物科学学院福建福州350002

根据猪伪狂犬病病毒(PRV)gE、gB基因序列,设计并合成了2对特异性引物,以PRV容A株细胞培养毒为模板,通过对PCR扩增条件的优化,建立了区分PRV野毒株和疫苗毒株的双重PCR方法。该方法能从野毒株基因组中同时扩增出2条大小分别为400bp(gE基... 详细信息

根据猪伪狂犬病病毒(PRV)gE、gB基因序列,设计并合成了2对特异性引物,以PRV容A株细胞培养毒为模板,通过对PCR扩增条件的优化,建立了区分PRV野毒株和疫苗毒株的双重PCR方法。该方法能从野毒株基因组中同时扩增出2条大小分别为400bp(gE基因)、582bp(gB基因)的特异性片段,从疫苗毒DNA中仅扩增出1条大小为582bp的片段。试验证明所建立的方法具有良好的特异性和敏感性,对临床上20份PRV感染疑似病料进行检测,双重PCR检测的结果与单重PCR检测结果总体符合率为100%,表明所建立的双重PCR检测方法可用于猪伪狂犬病野毒感染的快速诊断和流行病学调查。

关键词：猪伪狂犬病毒双重PCR 野毒株疫苗株

闽西地区猪伪狂犬病毒变异株TK基因新变异序列鉴定

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中国兽医学报 2015年第9期35卷 1415-1421页

作者：范克伟戴爱玲刘建奎吴德峰方来杉杨小燕龙岩学院生命科学学院福建龙岩364012 福建省预防兽医学与兽医生物技术重点实验室福建龙岩364012 福建农林大学动物科学学院福建福州350002

为了解闽西地区2013年以来猪伪狂犬病毒（PRV）流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律,本试验收集了闽西不同地区的14株PRV分离株,并对其TK基因进行遗传变异分析。结果表明：14株PRV分离株的TK基因与其他参考毒株相应序列具有严... 详细信息

为了解闽西地区2013年以来猪伪狂犬病毒（PRV）流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律,本试验收集了闽西不同地区的14株PRV分离株,并对其TK基因进行遗传变异分析。结果表明：14株PRV分离株的TK基因与其他参考毒株相应序列具有严格的保守性,这些毒株之间的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为98.3%~99.8%和96.9%~99.4%。氨基酸多序列比对发现,14株PRV分离株在2个位点发生了独特性的氨基酸突变,即第16位氨基酸（除PRV FJLY04和FJLY06株外）由K突变为R和第129位氨基酸由S突变为G,这是国内首次报道TK基因在该位置发生氨基酸突变的毒株。其中,第16位氨基酸突变导致TK蛋白ATP结合结构域由-G＊＊G＊GK-转变为-G＊＊G＊GR-,同时该位点还位于TK蛋白的抗原表位区内。这些新的氨基酸突变与PRV致病性及其与生物学特性的关系有待进一步研究。

关键词：猪伪狂犬病毒 TK基因突变

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持续性压力对VEGF分泌的影响

持续性压力对VEGF分泌的影响

超高效液相色谱-串联质谱联用法对水产品中亚甲基蓝及其代谢物残留的检测

第21届中国康协肢残康复学术年会暨第二届“泰山杯”全国...

作者：芮泽张喜善张辉范克伟王德峰泰山医学院附属医院

[目的]探讨持续性压力促进成骨细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)的机制。[方法]取1日龄SD大鼠颅盖骨进行成骨细胞原代培养,检测并鉴定成骨细胞。细胞培养至第3代,分为加压组和不加压组,每组再分成PD98059不预处理组和预处理组。加压组在... 详细信息

[目的]探讨持续性压力促进成骨细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)的机制。[方法]取1日龄SD大鼠颅盖骨进行成骨细胞原代培养,检测并鉴定成骨细胞。细胞培养至第3代,分为加压组和不加压组,每组再分成PD98059不预处理组和预处理组。加压组在密闭容器内采用压缩空气施以100kPa的静压力,分别加压0.5、2.0、6.0 h,ELISA法检测培养液中VEGF浓度,RT-PCR检测VEGF mRNA的变化;Western blot检测各组成骨细胞内磷酸化ERK1/2(pERK1/2)的水平。[结果]持续性压力促进成骨细胞VEGFmRNA的表达和蛋白的分泌,同时也明显增加ERK1/2的磷酸化水平;而ERK1/2总蛋白的量却无明显变化。PD98059在显著抑制持续性加压所诱导的成骨细内ERK1/2磷酸化水平的同时,抑制了VEGF的表达及分泌。[结论]持续性压力通过ERK1/2的激活调节成骨细胞VEGF的分泌。

关键词：持续性压力 VEGF分泌成骨细胞原代培养

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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分析测试学报 2009年第1期28卷 32-36页

作者：杨方范克伟刘正才吴德峰林永辉陈健陈国南福建出入境检验检疫局福建福州350001 福州大学食品安全分析与检测技术教育部重点实验室福建福州350003 福建农林大学动物科学学院福建福州350003

建立了超高效液相色谱-串联质谱同时检测水产品中亚甲基蓝及其代谢物天青A、天青B、天青C残留的方法。试样中的残留药物采用离子对试剂提取,正己烷脱脂净化,超高效液相色谱-串联质谱法测定。对前处理及液相色谱分离条件进行了探讨与优化... 详细信息

建立了超高效液相色谱-串联质谱同时检测水产品中亚甲基蓝及其代谢物天青A、天青B、天青C残留的方法。试样中的残留药物采用离子对试剂提取,正己烷脱脂净化,超高效液相色谱-串联质谱法测定。对前处理及液相色谱分离条件进行了探讨与优化。4种分析物在0.25～50μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999,方法定量下限可达0.5μg/kg。在0.5、1.0、5.0μg/kg范围内,平均加标回收率为80%～91%;相对标准偏差为6.38%～9.41%。方法灵敏、稳定,可满足水产品中亚甲基蓝及其代谢物残留的检测与确证及对药物动力学研究的需要。

关键词：亚甲基蓝天青A 天青B 天青C 残留水产品超高效液相色谱-质谱联用仪