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低pH胃蛋白酶-甲苯消化法灭活破伤风免疫血浆中脂包膜病毒效果验证

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中国生物制品学杂志 2012年第9期25卷 1214-1215,1219页

作者：王剑锋英志芳李长贵中国食品药品检定研究院病毒三室北京100050

目的验证低pH条件下胃蛋白酶-甲苯消化法对不同核酸类型的脂包膜病毒的灭活效果。方法以水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)作为RNA指示病毒,以伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)作为DNA指示病毒,将破伤风免疫血浆样... 详细信息

目的验证低pH条件下胃蛋白酶-甲苯消化法对不同核酸类型的脂包膜病毒的灭活效果。方法以水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)作为RNA指示病毒,以伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)作为DNA指示病毒,将破伤风免疫血浆样品经低pH(3.2±0.2)、0.2%甲苯、6～12活力单位胃蛋白酶处理后各取27 ml,分别加入3 ml指示病毒(9∶1),在(30.0±1)℃水浴中分别振摇10、30、60、90 min灭活病毒。以Vero细胞、PK-15细胞为基质,采用96孔细胞病变法检测残余病毒滴度,验证病毒灭活效果。结果破伤风免疫血浆样品经低pH胃蛋白酶及甲苯消化处理90 min后,VSV和PRV两种指示病毒的灭活效果分别为3.12～3.88和5.25～5.38 logTCID50/0.1 ml。结论采用低pH胃蛋白酶-甲苯消化法对破伤风免疫血浆中PRV灭活效果较好,而对VSV灭活效果有待提高。

关键词：破伤风免疫血浆脂包膜病毒胃蛋白酶甲苯病毒灭活

以重组人巨细胞病毒pp65制备的多克隆抗体建立检测感染性病毒颗粒方法

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中国生物工程杂志 2005年第10期25卷 47-49页

作者：李长贵王剑锋英志芳周铁群李娟中国药品生物制品检定所北京100050

人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染是造成器官移植失败的重要原因。建立灵敏、特异的检测方法可为及早发现感染、及时给予抗病毒治疗提供依据。以离子交换和分子筛方法纯化重组表达的HCMVpp65(rp65hp)抗原,经两步纯化后,rp65hp纯度达到95%... 详细信息

人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染是造成器官移植失败的重要原因。建立灵敏、特异的检测方法可为及早发现感染、及时给予抗病毒治疗提供依据。以离子交换和分子筛方法纯化重组表达的HCMVpp65(rp65hp)抗原,经两步纯化后,rp65hp纯度达到95%。免疫家兔制备的抗血清,ELISA抗体滴度高达1∶2560000;免疫印迹证明能与HCMVpp65抗原特异反应。将HCMV病毒感染细胞,以纯化的多克隆抗体建立了间接免疫荧光法,成功地检测到细胞中的病毒。因此,该方法为临床检测HCMV病毒活动性感染奠定了良好的基础。

关键词：重组人巨细胞病毒pp65 制备方法多克隆抗体感染性病毒颗粒检测方法间接免疫荧光法

抗人巨细胞病毒pp65抗原单克隆抗体的制备及检测方法

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中华器官移植杂志 2008年第3期29卷 186-187页

作者：李娟李长贵郭四新王剑峰英志芳中国药品生物制品检定所北京100050 北京贝尔生物工程有限公司

巨细胞病毒（CMV）属疱疹病毒科，其中使人致病的为人巨细胞病毒（HCMV），又名人疱疹病毒5型（HHV5）。CMV在人群中的感染非常普遍，人感染病毒后，多数可长期带毒成为潜伏感染。在免疫缺陷患者和接受免疫抑制治疗的器官移植患者，可... 详细信息

巨细胞病毒（CMV）属疱疹病毒科，其中使人致病的为人巨细胞病毒（HCMV），又名人疱疹病毒5型（HHV5）。CMV在人群中的感染非常普遍，人感染病毒后，多数可长期带毒成为潜伏感染。在免疫缺陷患者和接受免疫抑制治疗的器官移植患者，可产生广泛的CMV复发性感染。因此，建立快速、特异的早期检测方法具有重要意义。

关键词：人巨细胞病毒早期检测 pp65抗原单克隆抗体制备潜伏感染器官移植患者免疫抑制治疗

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SARS抗体酶联诊断试剂盒比较

药物分析杂志 2006年第2期26卷 156-158页

作者：范行良英志芳王剑峰易敏李长贵方捍华周铁群中国药品生物制品检定所北京100050

目的:对国内 SARS 抗体(IgG 和/或总抗体)检测试剂盒的质量进行比较和评价。方法:本文选用4种国内 SARS 抗体ELISA 检测试剂盒分别检测已知同样样品,并对结果进行比较。结果:4种试剂盒的阳性参考品符合率均为100%(18/18),阴性参考品符... 详细信息

目的:对国内 SARS 抗体(IgG 和/或总抗体)检测试剂盒的质量进行比较和评价。方法:本文选用4种国内 SARS 抗体ELISA 检测试剂盒分别检测已知同样样品,并对结果进行比较。结果:4种试剂盒的阳性参考品符合率均为100%(18/18),阴性参考品符合率均为100%(20/20);3批 D 试剂盒的精密性(10/10)试验的 CV 值均在3%以下,A 试剂盒及3批 B 试剂盒的的 CV 值均在5%～10%之间,3批 C 试剂盒的 CV 值均在10%～15%之间;B、C、D3种试剂盒的灵敏度均达到5/7或以上,其中第1批 C 试剂盒及前2批 D 试剂盒灵敏度较高,均达到了7/7。结论:4种试剂盒均有较好的灵敏度、特异性及检出率。

关键词： SARS 诊断试剂盒

基于NA活性检测细胞基质流感疫苗病毒滴度新方法的建立

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中华微生物学和免疫学杂志 2020年第4期40卷 295-299页

作者：赵慧王剑锋英志芳徐康维李娟李长贵中国食品药品检定研究院呼吸道病毒疫苗室北京102629

目的:建立基于神经氨酸酶(neuraminidase,NA)活性检测细胞基质流感疫苗病毒滴度的新方法,并进行初步应用。方法:对NA活性检测使用底物的浓度和终止液类型、病毒感染靶细胞数目以及细胞裂解剂等反应条件进行优化,采用建立的方法检测细胞... 详细信息

目的:建立基于神经氨酸酶(neuraminidase,NA)活性检测细胞基质流感疫苗病毒滴度的新方法,并进行初步应用。方法:对NA活性检测使用底物的浓度和终止液类型、病毒感染靶细胞数目以及细胞裂解剂等反应条件进行优化,采用建立的方法检测细胞基质培养的流感疫苗毒种的病毒滴度,并与传统的病毒滴定法检测结果进行比较。结果:NA活性检测法的最适底物浓度为25μmol/L,最适终止液为0.2 mol/L Na 2CO 3。细胞数目为4×10^4个/孔,病毒感染48 h后,用0.5%TritonX-100裂解,检测细胞内复制病毒的NA活性,产生的相对荧光值最大。检测4批细胞基质培养的流感疫苗毒种病毒滴度,该方法与传统病毒滴定法检测结果差异无统计学意义(P>0.05),具有较好的一致性。结论:本研究建立了基于NA活性检测细胞基质流感疫苗病毒滴度的新方法,可用于生产过程中细胞基质流感病毒毒种的检定。

关键词：细胞基质流感病毒疫苗病毒滴度试验神经氨酸酶质量控制

2016—2020年口服脊髓灰质炎减毒活疫苗批签发汇总及质量分析

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中国生物制品学杂志 2022年第10期35卷 1278-1280页

作者：刘悦越英志芳赵荣荣范行良王剑锋李长贵中国食品药品检定研究院北京102629

脊髓灰质炎(简称脊灰)是由脊灰病毒感染引起的急性传染病,严重者可瘫痪甚至死亡,全球免疫接种疫苗是消灭脊灰的唯一解决方案[1]。几十年来,口服脊灰减毒活疫苗(oral polio vaccine,OPV)一直是免疫接种的支柱,是根除野生型脊灰病毒工作... 详细信息

脊髓灰质炎(简称脊灰)是由脊灰病毒感染引起的急性传染病,严重者可瘫痪甚至死亡,全球免疫接种疫苗是消灭脊灰的唯一解决方案[1]。几十年来,口服脊灰减毒活疫苗(oral polio vaccine,OPV)一直是免疫接种的支柱,是根除野生型脊灰病毒工作的重要组成部分。OPV能够在胃肠道中复制,诱导肠道黏膜免疫,并在个体随后接触活病毒时减少病毒脱落,有效建立免疫屏障。

关键词：脊髓灰质炎减毒活疫苗批签发质量分析

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口服脊髓灰质炎疫苗效力标准品国际协作研究

中国生物制品学杂志 2005年第5期18卷 394-397页

作者：周铁群王剑锋英志芳中国药品生物制品检定所北京100050

目的评价第2代脊髓灰质炎疫苗效力国际标准品的适用性,并确定其标示滴度。方法由WHO参考实验室英国国家检定所(NIBSC)组织协作研究,并提供测定样本及单克隆抗体,共有13个实验室参加,各实验室分别采用单抗及内部参考品进行测定,结果递交N... 详细信息

目的评价第2代脊髓灰质炎疫苗效力国际标准品的适用性,并确定其标示滴度。方法由WHO参考实验室英国国家检定所(NIBSC)组织协作研究,并提供测定样本及单克隆抗体,共有13个实验室参加,各实验室分别采用单抗及内部参考品进行测定,结果递交NIBSC进行总结。结果本实验室对各样本测定的结果与各实验室测定结果均值总体上是一致的,变异系数基本在5%以下。结论本实验室目前采用的病毒滴度测定方法及试剂的敏感性、标准化程度均与国际一致。

关键词：口服脊髓灰质炎疫苗效力测定标准品国际协作疫苗效力灰质脊髓测定结果口服病毒滴度

两种低pH孵放法灭活静注人免疫球蛋白中脂包膜病毒效果比较

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中国生物制品学杂志 2019年第8期32卷 919-922页

作者：王剑锋英志芳徐康维李长贵中国食品药品检定研究院呼吸道病毒疫苗室

目的比较两种低pH孵放法对静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)中脂包膜病毒的灭活效果。方法 IVIG中分别加入两种核酸类型的脂包膜病毒水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)及伪狂犬病毒(pseudorabies viru... 详细信息

目的比较两种低pH孵放法对静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)中脂包膜病毒的灭活效果。方法 IVIG中分别加入两种核酸类型的脂包膜病毒水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)及伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)作为指示病毒,以经典工艺(23~25℃灭活21 d)及新工艺[(37±0. 5)℃灭活9 h]低pH(pH为3. 8~4. 4)孵放法进行病毒灭活,分别检测不同灭活时间的病毒滴度,比较灭活效果。结果经典工艺低pH孵放法对VSV灭活效果≥5. 88 logTCID50/0. 1 mL,对PRV的灭活效果≥6. 00 logTCID50/0. 1 mL,且灭活的样品在敏感细胞盲传3代无细胞病变。新工艺低pH孵放法对VSV灭活效果≥4. 62 logTCID50/0. 1 mL,对PRV的灭活效果≥6. 12 logTCID50/0. 1 mL。结论两种低p H孵放法对指示病毒的灭活能力均符合国家标准,但经典工艺对两种指示病毒的灭活效果好且灭活彻底。

关键词：静注人免疫球蛋白脂包膜病毒低pH孵放法病毒灭活

S/D法灭活血液制剂中脂包膜病毒效果验证的研究

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微生物学免疫学进展 2008年第3期36卷 38-41页

作者：王剑锋英志芳李长贵方捍华中国药品生物制品检定所北京100050

选用不同核酸的脂包膜病毒，其中RNA病毒为水疱性口炎病毒（VSV），DNA病毒为伪狂犬病毒（PRV），将两种指示病毒分别用于验证S／D法处理对纤维蛋白原、凝血酶原复合物、凝血因子Ⅷ、静注丙种球蛋白、免疫血浆等血液制剂的病毒灭活效果... 详细信息

选用不同核酸的脂包膜病毒，其中RNA病毒为水疱性口炎病毒（VSV），DNA病毒为伪狂犬病毒（PRV），将两种指示病毒分别用于验证S／D法处理对纤维蛋白原、凝血酶原复合物、凝血因子Ⅷ、静注丙种球蛋白、免疫血浆等血液制剂的病毒灭活效果。结果该法对所有被处理的血液制剂中的PRV及VSV灭活能力分别为≥3.38－5.88和≥3.50－4.75logTCID50／0．1ml，表明S／D法对两种病毒核酸类型的脂包膜病毒有良好的灭活效果。

关键词：脂包膜病毒S/D(有机溶剂/去污剂)法血液制剂病毒灭活