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基于PGAM5-Drp1轴探讨温肺降浊方对Aβ诱导BV-2细胞线粒体功能的影响

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中成药 2024年

作者：张鼎胡芷涵周珂青陈炜秦红玲向军军胡跃强广西中医药大学研究生院上海中医药大学中药学院广西中医药大学第一附属医院

目的探讨温肺降浊方对Aβ25-35诱导BV-2细胞线粒体功能的影响。方法通过Aβ25-35诱导BV-2细胞建立阿尔茨海默病（AD）细胞模型，确定Aβ25-35干预的最佳浓度和时间点，设置LFHP-1c组（抑制剂）和温肺降浊方含药血清组。CCK-8法检测最佳... 详细信息

目的探讨温肺降浊方对Aβ25-35诱导BV-2细胞线粒体功能的影响。方法通过Aβ25-35诱导BV-2细胞建立阿尔茨海默病（AD）细胞模型，确定Aβ25-35干预的最佳浓度和时间点，设置LFHP-1c组（抑制剂）和温肺降浊方含药血清组。CCK-8法检测最佳干预浓度和时间点，Transwell实验观察细胞迁移情况，Hoechst33342染色观察细胞凋亡情况，免疫荧光法检测PGAM5、Drp1的阳性细胞数表达情况，RT-qPCR法和Westernblot法检测细胞PGAM5、Drp1、OPA1、Mfn1/2mRNA和蛋白表达。结果以终浓度5μmol/L的Aβ25-35干预48h为制备AD细胞模型的最佳条件，20%温肺降浊方含药血清干预48h细胞活性最佳。与对照组比较，模型组细胞迁移数量减少，存在较多亮蓝色阳性凋亡细胞，PGAM5、Drp1阳性细胞数、mRNA和蛋白表达升高（P＜0.05），OPA1、Mfn1/2mRNA和蛋白表达降低（P＜0.05）；与模型组比较，各给药组细胞迁移数量增加，亮蓝色阳性凋亡细胞减少，PGAM5、Drp1阳性细胞数、mRNA和蛋白表达降低（P＜0.05），OPA1、Mfn1/2mRNA和蛋白表达升高（P＜0.05）。结论温肺降浊方可以调控PGAM5-Drp1轴减轻BV-2模型细胞损伤，改善线粒体稳态平衡，从而提高认知水平，发挥脑保护效应。

关键词：温肺降浊方阿尔茨海默病(AD) Aβ PGAM-Drp1轴线粒体稳态平衡 BV-2细胞

温肺降浊方通过Aβ25-35诱导PC12细胞损伤对PINK1/PARKIN介导的线粒体自噬的影响

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中药材 2024年 448-454页

作者：张鼎胡芷涵宋晨曦李方存姜明贺陈炜胡跃强广西中医药大学研究生院上海中医药大学广西中医药大学第一附属医院

目的:探讨温肺降浊方通过Aβ25-35诱导PC12细胞损伤对线粒体自噬的影响。方法:通过重组大鼠β-NGF分化PC12细胞,Aβ25-35干预其成为阿尔茨海默病细胞模型,确定Aβ25-35造模的最佳浓度和时间点,设立温肺降浊方含药血清低(2%)、中(4%)、高... 详细信息

目的:探讨温肺降浊方通过Aβ25-35诱导PC12细胞损伤对线粒体自噬的影响。方法:通过重组大鼠β-NGF分化PC12细胞,Aβ25-35干预其成为阿尔茨海默病细胞模型,确定Aβ25-35造模的最佳浓度和时间点,设立温肺降浊方含药血清低(2%)、中(4%)、高(8%)浓度组。MDC染色和JC-1染色法观察自噬小体和线粒体膜电位,免疫荧光化学染色、qPCR和Western Blot检测各组细胞中PINK1、PARKIN、Ubl、Ub、p-Ub、LC3B m RNA和(或)蛋白表达。结果:β-NGF分化PC12细胞在第6天后成为海马神经元细胞形态结构,AD细胞造模条件以5μmol/L终浓度的Aβ25-35干预48 h最佳。与正常对照组比较,模型组自噬小体显著增多,线粒体膜电位明显降低,PINK1、PARKIN、Ubl、Ub、p-Ub、LC3B m RNA和(或)蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,温肺降浊方含药血清可使模型细胞自噬小体减少,线粒体膜电位明显升高,PINK1、PARKIN、Ubl、p-Ub、LC3B m RNA和(或)蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:温肺降浊方可减轻Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与PINK1/PARKIN介导的线粒体自噬通路有关。

关键词：温肺降浊方 Aβ PC12细胞 PINK1/PARKIN 线粒体自噬

五脏温阳化瘀方对血管性痴呆大鼠FLVCR1及BCRP表达的影响

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时珍国医国药 2024年第3期35卷 559-562页

作者：姜明贺朱欢欢张鼎李方存宋晨曦陈炜胡跃强广西中医药大学广西南宁530001 广西中医药大学附属瑞康医院广西南宁530011 广西中医药大学第一附属医院广西南宁530023

目的探讨五脏温阳化瘀方对血管性痴呆大鼠猫白血病病毒C亚类受体1(feline leukemia virus subgroup C receptor,FLVCR1)及胸腺癌抵抗蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)表达的影响。方法通过双侧颈总动脉永久性结扎法建立血... 详细信息

目的探讨五脏温阳化瘀方对血管性痴呆大鼠猫白血病病毒C亚类受体1(feline leukemia virus subgroup C receptor,FLVCR1)及胸腺癌抵抗蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)表达的影响。方法通过双侧颈总动脉永久性结扎法建立血管性痴呆大鼠模型,然后将实验动物分为模型组、西药组(尼莫地平片20mg·kg^(-1)·d^(-1))及五脏温阳化瘀方低(1.25 g·kg^(-1)·d^(-1))、中(2.5 g·kg^(-1)·d^(-1))、高(5 g·kg^(-1)·d^(-1))剂量组,另取6只大鼠设为假手术组。各组大鼠给予相应药物干预28 d后,采用Morris水迷宫实验评价各组大鼠学习记忆能力;HE及Nissl染色法进行组织病理学检测;Perls’铁染色检测各组大鼠海马CA1区铁沉积情况;采用qRT-PCR和Western blotting检测各组大鼠海马组织中FLVCR1和BCRP mRNA和蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期显著性延长(P0.05)。结论五脏温阳化瘀方可以通过上调FLVCR1和BCRP的表达,减少细胞内铁过载,调节铁代谢,抑制铁死亡,从而发挥改善血管性痴呆大鼠认知能力的作用。

关键词：五脏温阳化瘀方血管性痴呆铁死亡 FLVCR1 BCRP

基于网络药理学与分子对接技术探讨蛇床子治疗阿尔茨海默病的作用机制

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现代药物与临床 2024年第3期39卷 570-577页

作者：吴东霖张鼎秦红玲李姿晏杨胡跃强广西中医药大学广西南宁530000 广西中医药大学第一附属医院广西南宁530001 成都市青白江区人民医院四川成都610500

目的运用网络药理学结合分子对接技术探讨蛇床子治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法借助TCMSP数据库获取蛇床子的活性成分及潜在作用靶点;检索GeneCards、OMIM、DisGeNET数据平台得到阿尔茨海默病的潜在作用靶点,筛选两者共同靶点;应用Cy... 详细信息

目的运用网络药理学结合分子对接技术探讨蛇床子治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法借助TCMSP数据库获取蛇床子的活性成分及潜在作用靶点;检索GeneCards、OMIM、DisGeNET数据平台得到阿尔茨海默病的潜在作用靶点,筛选两者共同靶点;应用Cytoscape 3.7.1构建蛋白相互作用(PPI)网络图并筛选发挥治疗作用的关键靶点,再借助R语言进行基因本体(GO)功能分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;运用AutoDock Vina软件,对核心靶点和药物主要活性成分进行分子对接,验证网络分析结果。结果蛇床子包含主要活性成分20个,化学成分与疾病共同靶点56个,网络拓扑分析显示B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、雌激素受体α(ESR1)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、糖原合成酶激酶3β(GSK3B)、半胱氨酸蛋白水解酶3(CASP3)为关键靶点,通过调控神经活性配体-受体的相互作用、钙信号通路、p53信号通路、多种细胞凋亡、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路等发挥治疗作用。分子对接验证中受体与配体之间的结合能均≤−5.0 kcal/mol,结合性良好,其中O-乙酰二氢欧山芹酯、邻-异戊酰基二氢山芹醇、蛇床子素与核心靶点GSK3B、PTGS2、Bcl-2的对接亲合度较高。结论蛇床子可通过多成分、多靶点和多通路的方式起到治疗阿尔茨海默病的作用,为进一步探究蛇床子治疗阿尔茨海默病的理论研究提供参考。

关键词：蛇床子阿尔茨海默病网络药理学分子对接 O-乙酰二氢欧山芹酯邻-异戊酰基二氢山芹醇蛇床子素

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从三焦次第疗法看扶阳学派的发展现状

四川中医 2024年第5期42卷 56-60页

作者：李建铮胡跃强邓丽斌广西中医药大学广西南宁530002 广西中医药大学第一临床医学院广西南宁530023

扶阳学派创立至今,形成了独特的“阳主阴从”自然观、“生命以火立极”生命观、“阳虚发病”疾病观与“扶阳抑阴”治疗观。并以此为指导,总结归纳出了“三焦次第”疗法,即先以桂枝法宣通中、上二焦,使阳气运行畅通;再以四逆法温通中、... 详细信息

扶阳学派创立至今,形成了独特的“阳主阴从”自然观、“生命以火立极”生命观、“阳虚发病”疾病观与“扶阳抑阴”治疗观。并以此为指导,总结归纳出了“三焦次第”疗法,即先以桂枝法宣通中、上二焦,使阳气运行畅通;再以四逆法温通中、下二焦,温扶阳气。当代扶阳研究者利用现代研究方法,通过动物实验、临床疗效观察等方法,以实验室检查、统计学方法等找到了“三焦次第”疗法治疗部分疾病的干预通路,并证明其在临床治疗上的确行之有效。本文整理、归纳扶阳学派理论体系,通过综述“三焦次第”疗法的临床应用成果阐述扶阳学派的发展现况,旨在为三焦次第疗法临床应用研究提供参考。

关键词：扶阳学术思想扶阳学派三焦次第疗法中医药治疗发展现况

基于TLR4/NF-κB信号通路探究壮药双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠肠组织损伤及肠道菌群的影响

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中国老年学杂志 2024年第6期44卷 1423-1428页

作者：翟阳莫雪妮郑光珊王凯华胡跃强邹敏梅小平舒建龙马威谢婷婷广西国际壮医医院脑病科广西南宁530200 广西中医药大学广西中医药大学第一附属医院脑病科

目的探究壮药双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠脑组织Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路及肠组织损伤、肠道菌群的影响。方法将50只大鼠建立缺血性脑卒中模型,随机分为低(7.16g/kg)、中(14.33 g/kg)、高(28.66 g/kg)剂量双路通脑... 详细信息

目的探究壮药双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠脑组织Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路及肠组织损伤、肠道菌群的影响。方法将50只大鼠建立缺血性脑卒中模型,随机分为低(7.16g/kg)、中(14.33 g/kg)、高(28.66 g/kg)剂量双路通脑方组和模型(M)组,并设假手术(S)组,每组10只。制作模型前30 min予以相应剂量双路通脑方颗粒溶液灌胃,在大鼠成模清醒后1 h给予该颗粒灌胃,连续6 d,每天2次。M组和S组同步灌胃无菌水。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法测量脑梗死体积;酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、干扰素(INF)-γ水平;Western印迹检测脑TLR4/NF-κB通路蛋白及结肠密封蛋白(Occludin)、闭合蛋白(Claudin)-1、紧密连接蛋白(ZO)-1蛋白表达;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织结构变化;16 S rDNA扩增测序法分析肠道菌群构成。结果 M组脑梗死比例较S组显著增加(P<0.05);中、高剂量双路通脑方组脑梗死比例较M组显著降低(P<0.05),且高剂量双路通脑方组最低,后续以高剂量28.66 g/kg进行研究。与S组相比,M组结肠黏膜结构损伤,TNF-α、IL-6、INF-γ、TLR4、髓样细胞分化因子(MyD)88蛋白及p-核因子κB抑制蛋白(IκB)/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平显著较高,ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平显著较低(均P<0.05)。与M组相比,双路通脑方治疗可改善结肠黏膜结构,TNF-α、IL-6、INF-γ、TLR4、MyD88蛋白及p-IκB/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平明显降低,ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平显著较高(P<0.05)。肠道菌群分析显示,与S组相比,M组菌群多样性和丰度降低,在门水平,M组厚壁菌门丰度和F/B值明显升高,而拟杆菌门明显降低(P<0.05);在属水平,M组瘤球菌属、拟杆菌属等丰度明显较高,双歧杆菌属、乳杆菌属等丰度明显较低(P<0.05)。与M组相比,双路通脑方治疗可上调菌群多样性和丰度,明显提高拟杆菌门丰度,提高降低厚壁菌门丰度和F/B值,明显增加双歧杆菌属、乳杆菌属等丰度,明显降低艾克曼菌属等丰度(均P<0.05)。结论双路通脑方可重塑肠道菌群,恢复肠道屏障,并抑制脑TLR4/NF-κB通路活化,实现对缺血性脑卒中大鼠的治疗作用。

关键词：缺血性脑卒中双路通脑方壮药肠道菌群 Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路

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扶阳“桂枝法”的创建及其临床应用发挥

中医临床研究 2024年第6期16卷 122-125页

作者：伍叙州胡芷涵胡跃强广西中医药大学广西南宁530012 上海中医药大学上海201203 广西中医药大学第一附属医院广西南宁530023

扶阳学派上继黄老易道,下承医圣张机(字仲景)之学,创始人乃晚清的郑寿全先生,至今已传承近200年。“阳主阴从”观是扶阳思想的理论核心,“阴阳本体结构”失调是其疾病的病因病机观,桂枝法和四逆法是本学派的两大治疗大法。疾病的治疗一... 详细信息

扶阳学派上继黄老易道,下承医圣张机(字仲景)之学,创始人乃晚清的郑寿全先生,至今已传承近200年。“阳主阴从”观是扶阳思想的理论核心,“阴阳本体结构”失调是其疾病的病因病机观,桂枝法和四逆法是本学派的两大治疗大法。疾病的治疗一般先用桂枝法宣导涤荡,恢复中上焦的气机,再用四逆法温阳固摄,以恢复人体的阴阳本体结构。扶阳学派认为三阳即为一阳,三阴即是一阴,提出以太阳病统领三阳病,以少阴病统领三阴病,其代表性传承人卢崇汉教授首先提出并创立桂枝法加减运用于治疗三阳病,其运用的法则名为宣通法,其病因病机为阳气郁滞不通,该法是在桂枝汤或姜、桂基础上进行化裁的以宣通为主要扶阳手段的一个法则(基本药物包括桂枝尖、苍术、陈皮、南山楂、炙甘草、生姜等)。其加减应用心法即在桂枝法方药的基础上加以和解少阳(柴胡剂)或清降阳明(承气类方)的药物,达到层层清通的目的。故而桂枝法加减药物能最大限度地发挥宣通作用,其作为统领三阳病的先行法度,具有调和阴阳、宣导痰瘀秽浊、疏通阴阳道路之功能,最终达到恢复人体正常的“内阳外阴”状态的目的。这就为三阳病的防治提供了一个非常清晰的思路,也无疑为我们临床实践提供了可供借鉴的旨归。

关键词：扶阳桂枝法三阳病临床应用

壮药双路通脑方对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡的影响

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中成药 2024年第3期46卷 795-802页

作者：翟阳莫雪妮滕红丽胡跃强郑光珊马威杨鹏梅小平邹敏王凯华广西国际壮医医院脑病科广西南宁530200 广西中医药大学广西南宁530200 广西中医药大学第一附属医院脑病科广西南宁530200 广西国际壮医医院科技部广西南宁530200 广西国际壮医医院内分泌代谢病科广西南宁530200 广西国际壮医医院儿科广西南宁530200

目的基于氧化应激和炎症反应探讨壮药双路通脑方对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡的影响。方法将大鼠随机分为假手术组,模型组,壮药双路通脑方低、中、高剂量组(9.0、18.0、36.0 g/kg),依达拉奉组(3.0 mg/kg),每组18只,采用线栓法构... 详细信息

目的基于氧化应激和炎症反应探讨壮药双路通脑方对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡的影响。方法将大鼠随机分为假手术组,模型组,壮药双路通脑方低、中、高剂量组(9.0、18.0、36.0 g/kg),依达拉奉组(3.0 mg/kg),每组18只,采用线栓法构建大脑中动脉闭塞/再灌注模型以模拟脑缺血再灌注损伤,给予相应药物干预6 d,采用Zeal Longa评分法对大鼠进行神经功能缺损评分,TTC染色检测脑梗死面积,HE染色和TUNEL染色检测脑组织缺血半暗带海马CA1区神经元病理损伤和细胞凋亡情况,试剂盒检测脑组织SOD活性和GSH、MDA、IL-6、IL-1β、TNF-α水平,Western blot法检测大鼠脑组织Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved-caspase-3、TLR4、NF-κB p65、Nrf2、HO-1蛋白表达。结果与模型组比较,壮药双路通脑方中、高剂量组和依达拉奉组大鼠神经功能缺损评分,脑梗死率,神经元凋亡率,脑组织缺血半暗带IL-6、IL-1β、TNF-α、MDA水平,Bax、TLR4蛋白表达,cleaved-caspase-3/caspase-3、p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低(P<0.05),GSH水平、SOD活性和Bcl-2、Nrf2、HO-1蛋白表达升高(P<0.05)。结论壮药双路通脑方可抑制氧化应激和炎症反应,抑制神经元凋亡,改善神经功能,减轻脑缺血再灌注损伤大鼠的脑损伤,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路和激活Nrf2/HO-1信号通路有关。

关键词：壮药双路通脑方缺血性脑卒中脑缺血再灌注损伤凋亡氧化应激炎症反应 TLR4/NF-κB信号通路 Nrf2/HO-1信号通路

温阳复元方通过调控miRNA-137/线粒体铁死亡通路保护大鼠脑缺血再灌注损伤机制研究

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辽宁中医药大学学报 2024年第2期26卷 31-36页

作者：邓秋媚吴林袁莉陈炜黄秋霞胡跃强广西中医药大学广西南宁530001 广西中医药大学第一附属医院广西南宁530023

目的探讨温阳复元方对miRNA-137/线粒体铁死亡通路的调控作用,阐明该方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)的神经保护作用机制。方法线栓法制备大鼠CIRI模型,将144只SD大鼠随机分为假手术(SO)组、模型(I/R)组、补阳还五汤对照(BYHW)组、温阳复元... 详细信息

目的探讨温阳复元方对miRNA-137/线粒体铁死亡通路的调控作用,阐明该方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)的神经保护作用机制。方法线栓法制备大鼠CIRI模型,将144只SD大鼠随机分为假手术(SO)组、模型(I/R)组、补阳还五汤对照(BYHW)组、温阳复元方(WYFY)组、温阳复元方+miRNA-137模拟物(WYFY+mimic)组、温阳复元方+miRNA-137抑制物(WYFY+Inhibitor)组,每组按再灌注时间点分为3个亚组。采用Zea-Longa评分法进行神经功能缺损评分(NFS);TTC染色测量脑梗死体积;qRT-PCR和Western blot法观察miRNA-137、膜铁转运蛋白(FPN)和二价金属离子转运体1(DMT1)的mRNA及其蛋白表达水平。结果(1)NFS结果:I/R组NFS较SO组显著增加(P<0.01),与I/R组相比,BYHW组NFS仅在12 h时评分降低(P<0.05),而WYFY组在24 h和3 d的NFS明显降低(P<0.05或P<0.01),WYFY+mimic组NFS显著下降(P<0.01),WYFY+Inhibitor组在3 d时NFS降低(P<0.05);与WYFY组相比,WYFY+mimic组NFS仅在12 h时明显降低(P<0.05)。(2)TTC染色结果:I/R组梗死体积较SO组显著增大(P<0.01),BYHW组和WYFY组较I/R组明显减小(P<0.05或P<0.01),WYFY组梗死体积较BYHW组进一步减小(P<0.01);相较于WYFY组,WYFY+mimic组能进一步减小其梗死体积(P<0.05),而WYFY+Inhibitor组梗死灶明显增大(P<0.05)。(3)miRNA-137 mRNA表达水平:I/R组miRNA-137mRNA的表达较SO组显著下降(P<0.01),WYFY治疗后其表达量显著增加(P<0.01),且WYFY组其表达水平较BYHW组进一步增高(P<0.01);与WYFY组同期比较,WYFY+mimic组miRNA-137 mRNA表达量均进一步升高(P<0.01),WYFY+Inhibitor组抑制该表达(P<0.01)。(4)FPN mRNA及蛋白表达水平:I/R组FPN mRNA和蛋白表达水平较SO组均降低(P<0.01),WYFY组能显著增加其表达(P<0.01),该组在12 h和3 d时的表达量较BYHW组进一步增加(P<0.05或P<0.01);与WYFY组同期对比,WYFY+mimic组其表达水平在24 h及3 d时增加(P<0.01),而WYFY+Inhibitor组其表达水平均降低(P<0.01)。(5)DMT1 mRNA及蛋白表达水平:I/R组DMT1mRNA和蛋白表达量较SO组均显著增加(P<0.01);与I/R组比较,WYFY能降低其表达水平(P<0.01),且WYFY组在3 d时其表达量较BYHW组进一步降低(P<0.05);与WYFY组同期相比,WYFY+mimic组其表达水平在24 h和3 d时均降低(P<0.01),而WYFY+Inhibitor组其表达水平均显著增加(P<0.01)。结论温阳复元方可能通过上调miRNA-137的表达,进而上调铁转运蛋白FPN的表达,下调DMT1的表达,调节铁代谢,最终抑制线粒体铁死亡,发挥其神经保护作用,其疗效优于补阳还五汤。

关键词：缺血性中风脑缺血再灌注损伤温阳复元方 miRNA-137 线粒体铁死亡