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老年大鼠肝脏解偶联蛋白2表达与衰老关系的研究

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老年大鼠肝脏解偶联蛋白2表达与衰老关系的研究

作者：胡祥上大连医科大学

学位级别：硕士

目的:解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP)是晚近发现的线粒体内膜上解偶联蛋白家族成员之一,广泛分布于啮齿类动物的多种器官、组织中。UCP具有质子漏功能,使细胞氧化磷酸化解偶联,降低线粒体内膜两侧质子梯度和呼吸链电子漏,因此,... 详细信息

目的:解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP)是晚近发现的线粒体内膜上解偶联蛋白家族成员之一,广泛分布于啮齿类动物的多种器官、组织中。UCP具有质子漏功能,使细胞氧化磷酸化解偶联,降低线粒体内膜两侧质子梯度和呼吸链电子漏,因此,可减少线粒体活性氧(reactive oxygen species, ROS)的产生,在细胞受到氧化损伤时起到保护作用。大量研究结果证明,ROS是衰老的重要因素之一,机体衰老时表现为线粒体三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)生成减少,ROS生成增多及细胞损害加重,以及神经内分泌调控紊乱的一系列变化。衰老的机制有多种学说,其中自由基与衰老的关系受到广泛关注。UCP可以降低ROS水平,因此我们推测UCP可能通过降低ROS介导的细胞氧化损伤而参与组织、细胞抗氧化损伤,起到延缓衰老的作用。另外,UCP在引发质子漏时,可降低线粒体内质子跨膜梯度,使质子直接进入基质而不参与ATP的合成,从而导致储存在质子电化学势能中的自由能被消耗,氧化磷酸化解偶联,ATP水平下降。鉴于UCP、ROS、ATP及其与衰老的关系目前尚不清楚,本研究以老年大鼠肝脏为研究对象,通过不同年龄、生理状态下大鼠肝脏组织内UCP的表达与ROS的关系以及UCP的表达与ATP含量关系的研究,力求为临床治疗因衰老相关性的疾病及延缓机体衰老提供理论依据。方法:选用不同年龄健康雄性SD大鼠,按年龄分为3组:幼年组(出生21天,n=10),成年组(出生3月,n=10),老年组(出生18月,n=10)。分笼饲养,自由饮水进食,室温,自然昼夜。在本实验室适应3天后进行实验,术前禁食12小时。处死动物,取肝组织检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)和ATP的含量。通过免疫组织化学观察肝组织中UCP蛋白的表达与分布。Western blot方法检测肝细胞线粒体内UCP蛋白的表达并进行定量分析。结果: 1.不同年龄大鼠肝组织内MDA含量的改变肝组织内MDA含量幼年组为4.84±0.16 nmol/mg,成年组为1.88±0.21 nmol/mg,老年组为17.62±7.36 nmol/mg。老年组大鼠肝组织中MDA含量显著高于幼年组和成年组的含量(P<0.01)。 2.不同年龄大鼠肝组织GSH含量的改变肝组织内GSH含量幼年组为100.19±7.29 mg/g,成年组为98.76±5.06 mg/g,老年组为76.93±13.88 mg/g。老年组大鼠肝组织GSH含量显著低于幼年组和成年组的含量(P<0.01)。 3.不同年龄大鼠肝组织ATP水平的改变肝组织ATP水平幼年组为0.24±0.06 nmol/L,成年组为0.19±0.10 nmol/L,老年组为0.06±0.03 nmol/L。老年组的ATP水平比幼年组和成年组的水平显著降低(P<0.01)。 4.不同年龄大鼠肝组织UCP表达的改变免疫组化结果显示,老年组肝实质细胞内UCP表达较多,幼年组肝实质细胞内UCP表达次之,成年组肝实质细胞内UCP表达较少。Western blot实验进一步证实免疫组化结果,定量分析表明,幼年组为110.53±0.59 (相对灰度,%),老年组为160.74±0.80(相对灰度,%),老年组UCP表达高于幼年组和成年组,P<0.01。结论: 1.老年大鼠肝MDA含量下降、GSH含量升高,提示老年大鼠肝内ROS水平较高,并引起UCP表达增多,UCP可能对延缓肝细胞的衰老起重要作用。 2. UCP的高表达可能是老年大鼠肝组织ATP下降的原因之一。 3.肝组织UCP表达水平主要受ROS水平的调节,但ATP水平不仅受到UCP的调节,还受细胞的代谢状态的影响。

关键词：解偶联蛋白2 肝脏活性氧衰老

解耦联蛋白2在不同年龄大鼠脾、胸腺中的分布与表达

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中国老年学杂志 2013年第23期33卷 5900-5902页

作者：胡祥上宫德正易传安邹原怀化医学高等专科学校基础医学部湖南怀化418000 大连医科大学生理教研室

目的探讨解耦联蛋白2(UCP2)在老年大鼠免疫器官中的表达。方法健康雄性SD大鼠30只,按年龄分为幼年组、成年组和老年组,实验室适应性喂养7 d后断头处死,分别取各组大鼠脾、胸腺组织测定丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH);测定脾、胸腺指数;通... 详细信息

目的探讨解耦联蛋白2(UCP2)在老年大鼠免疫器官中的表达。方法健康雄性SD大鼠30只,按年龄分为幼年组、成年组和老年组,实验室适应性喂养7 d后断头处死,分别取各组大鼠脾、胸腺组织测定丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH);测定脾、胸腺指数;通过免疫组织化学观察脾、胸腺组织中UCP2蛋白的表达与分布。结果①老年组大鼠脾、胸腺组织中MDA含量显著高于幼年组和成年组(P<0.01)。②GSH含量在老年组大鼠脾组织中显著低于幼年组和成年组(P<0.01),在老年组大鼠胸腺组织中显著低于幼年组(P<0.01)。③老年组大鼠胸腺指数、脾指数均低于幼年组和成年组。④UCP2蛋白在老年组大鼠脾、胸腺实质细胞内表达较多,在幼年组、成年组大鼠脾、胸腺实质内表达较少(几乎无表达)。结论老年大鼠脾、胸腺MDA含量升高,GSH含量下降,提示老年大鼠脾、胸腺内活性氧(ROS)水平较高,并引起UCP2表达增多,UCP2可能对延缓脾、胸腺细胞的衰老和增强免疫功能起重要作用。

关键词：解耦联蛋白2 脾胸腺活性氧衰老

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山东胶东地区国人肝门区的应用解剖

解剖学杂志 2013年第4期36卷 839-840页

作者：蔡世昌白如银胡祥上不详泰山医学院泰安271000 怀化医学高等专科学校解剖学教研室怀化418000

胆道系统以及周围门静脉、肝动脉系统解剖关系复杂、变异几率较高，很大程度上影响了肝门区手术的实施，因此熟悉胆道系统以及相关结构的解剖学，有助于提高肝门区手术的根治可能性和安全性，降低术后并发症，延长患者生存期。笔者对胶... 详细信息

胆道系统以及周围门静脉、肝动脉系统解剖关系复杂、变异几率较高，很大程度上影响了肝门区手术的实施，因此熟悉胆道系统以及相关结构的解剖学，有助于提高肝门区手术的根治可能性和安全性，降低术后并发症，延长患者生存期。笔者对胶东地区国人30具大体标本进行肝门区应用解剖研究，观察了肝门管道系统中胆管、肝固有动脉来源、走行、分支及其毗邻关系，以及肝门区、尾状叶、胰头区等解剖结构，测量肝门区管道系统中胆管、肝固有动脉、肝门静脉的外径以及管道之间的夹角等，掌握了第一手解剖资料及数据，现报道如下。

关键词：应用解剖胶东地区肝门区肝固有动脉山东管道系统胆道系统解剖结构

何首乌提取物对血管性痴呆大鼠5-HT受体及生化指标的影响

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中国老年学杂志 2014年第4期34卷 945-947页

作者：易传安汪冶胡祥上于鹏辉王滨中南大学湘雅医学院湖南长沙410000 怀化医学高等专科学校大连医科大学

目的研究何首乌提取物对血管性痴呆大鼠学习记忆的影响,初步探讨血管性痴呆大鼠5-HT2A受体的表达及血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的变化。方法采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立大鼠血管性痴呆模型,随机分为假手术组、... 详细信息

目的研究何首乌提取物对血管性痴呆大鼠学习记忆的影响,初步探讨血管性痴呆大鼠5-HT2A受体的表达及血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的变化。方法采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立大鼠血管性痴呆模型,随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、何首乌组。通过水迷宫实验检测各组大鼠的学习记忆能力和血清SOD活性、MDA含量的变化;通过免疫组化技术检测各组大鼠丘脑前核内5-HT2A受体的表达水平。结果模型组大鼠d4逃避潜伏期(38.95±27.42)s,平台象限游泳时间(20.35±3.52)s,穿过平台次数(1.50±0.76),SOD活性(0.855±0.094)kU/g prot,MDA含量(5.187±1.237)μmol/g prot,5-HT2A受体的阳性细胞积分光密度值增高。何首乌组大鼠d4逃避潜伏期(15.28±9.83)s,平台象限游泳时间(24.66±3.56)s,穿过平台次数2.75±1.28,SOD活性(0.968±0.158)kU/g prot,MDA含量(4.595±1.104)μmol/g prot,5-HT2A受体的阳性细胞积分光密度值降低。其机制与何首乌组与模型组差异显著(P<0.05),假手术组、阳性对照组与何首乌组差异不显著。结论何首乌提取物能够改善血管性痴呆大鼠学习记忆功能,其机制与使5-HT2A受体表达增强以及抗氧化损伤有关。

关键词：何首乌血管性痴呆 5-HT受体超氧化物歧化酶丙二醛

NMDA受体NR1、NR2A/B在丘脑前核-海马CA1、CA3脑区和齿状回的分布与表达

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中国老年学杂志 2011年第7期31卷 1152-1155页

作者：易传安何绘敏胡祥上岳晓玲王滨怀化医学高等专科学校湖南怀化418000 大连医科大学解剖学教研室

目的探讨NMDA受体NR1、NR2A/B在丘脑前核-海马CA1、CA3脑区和齿状回的分布与表达,以及丘脑前核-海马神经元的学习记忆功能及作用机制。方法运用原位杂交检测技术观测丘脑前核及海马CA1、CA3和齿状回内NMDA受体NR1、NR2A及NR2B mRNA的分... 详细信息

目的探讨NMDA受体NR1、NR2A/B在丘脑前核-海马CA1、CA3脑区和齿状回的分布与表达,以及丘脑前核-海马神经元的学习记忆功能及作用机制。方法运用原位杂交检测技术观测丘脑前核及海马CA1、CA3和齿状回内NMDA受体NR1、NR2A及NR2B mRNA的分布特点。结果①原位杂交阳性产物呈棕黄色,主要分布在神经元的胞浆中,胞核基本不着色。②在丘脑前核,阳性神经元分布较密集,细胞形态较一致。③在海马锥体层阳性神经元分布较多,呈带状。在分子层、多形层分布少。④NR1、NR2A/B在丘脑前核和海马CA1、CA3脑区及齿状回均有表达,其中NR1在齿状回表达水平最强,NR2B在丘脑前核、海马CA1、CA3和齿状回表达水平基本相同。结论在丘脑前核-海马的局部神经元环路中NMDA受体NR1、NR2A及NR2B mRNA分布广泛。其中NR2B mRNA在丘脑前核和海马CA1、CA3脑区及齿状回表达水平基本相同,可能与此环路学习记忆有关。

关键词：丘脑前核海马CA1、CA3脑区齿状回 NMDA受体神经元环路

全外显子组测序技术及其在遗传性耳聋研究中的应用

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中华耳科学杂志 2015年第1期13卷 179-182页

作者：姜海鸥全庆丽胡祥上王义旺湖南医药学院医学遗传学教研室湖南418000 湖南医药学院附属怀化市第一人民医院耳鼻喉科湖南418000

近年来,全外显子组测序技术迅猛发展,为遗传疾病的基因研究带来了新的机遇,受到遗传学多个领域的重视与应用,其在遗传性耳聋的应用也日益受到关注。该技术先应用靶向富集技术捕获基因组的外显子区域,再通过高通量测序获得编码区序列遗... 详细信息

近年来,全外显子组测序技术迅猛发展,为遗传疾病的基因研究带来了新的机遇,受到遗传学多个领域的重视与应用,其在遗传性耳聋的应用也日益受到关注。该技术先应用靶向富集技术捕获基因组的外显子区域,再通过高通量测序获得编码区序列遗传信息。本文主要介绍全外显子组测序的技术路线及在遗传性耳聋中的应用与研究成果。

关键词：外显子组测序遗传性耳聋致病基因

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干细胞移植治疗骨骼肌损伤的实验研究

干细胞移植治疗骨骼肌损伤的实验研究

不同年龄大鼠肝脏UCP2表达与ATP含量关系的研究

中国解剖学会2021年年会

作者：刘杏胡祥上湖南医药学院解剖学教研室

复制骨骼肌钝挫伤模型,探讨骨骼肌损伤后给予干细胞移植治疗后效果。实验兔随机分为3组:正常组(3只)、对照组(15只)、BM-MSC移植组(15只)。除正常组外均用钝性暴力法制造骨骼肌钝挫伤模型,损伤后对照组注入无细胞低糖DMEM培养液,BM-MSC...

复制骨骼肌钝挫伤模型,探讨骨骼肌损伤后给予干细胞移植治疗后效果。实验兔随机分为3组:正常组(3只)、对照组(15只)、BM-MSC移植组(15只)。除正常组外均用钝性暴力法制造骨骼肌钝挫伤模型,损伤后对照组注入无细胞低糖DMEM培养液,BM-MSC组注射自体BM-MSC,并于伤后1、3、7、14、21d处死动物,进行相关检测。兔骨髓间充质干细胞CD90阳性,CD45阴性;损伤区肿胀,72 h后肿胀消至实验前

关键词：

来源： cnki会议评论

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怀化医专学报 2008年第1期7卷 11-14页

作者：胡祥上宫德正邹原怀化医专基础医学部湖南怀化418000 大连医科大学生理教研室

目的探讨解偶联蛋白2（UCP2）在大鼠肝脏组织中的表达及其与年龄的关系。方法选用健康雄性SD大鼠，按年龄分为新生组、成年组和老年组（n=10），实验室适应性喂养7d后断头处死，分别取各组大鼠肝组织测定丙二醛、谷胱甘肽、ATP的含量并... 详细信息

目的探讨解偶联蛋白2（UCP2）在大鼠肝脏组织中的表达及其与年龄的关系。方法选用健康雄性SD大鼠，按年龄分为新生组、成年组和老年组（n=10），实验室适应性喂养7d后断头处死，分别取各组大鼠肝组织测定丙二醛、谷胱甘肽、ATP的含量并采用Westernblot方法检测肝细胞线粒体内UCP2的表达并进行定量分析。结果实验证实老年组大鼠肝组织中MDA（丙二醛）含量最高，GSH（谷胱甘肽）和ATP含量最低；老年组UCP2的水平明显高于新生组和成年组。老年组与新生组比较P〈0．01；新生组与成年组比较P〈0．01；老年组与成年组比较P〈0．01。各组别比较均有显著性差异。结论UCP2在肝脏组织对肝细胞的损伤与衰老过程中起重要作用。

关键词：解偶联蛋白2 不同年龄三磷酸腺苷丙二醛谷胱甘肽

一个遗传性非综合征型耳聋家系的GJB2基因突变分析

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重庆医学 2015年第33期44卷 4635-4637页

作者：王义旺胡祥上全庆丽姜海鸥湖南医药学院附属医院/怀化市第一人民医院耳鼻喉科湖南怀化418000 湖南医药学院医学遗传学教研室湖南怀化418000

目的对1个遗传性非综合征型耳聋家系的临床表型特征进行分析,并选取GJB2基因进行突变检测。方法详细询问病史和临床检查后,提取患者及家系成员的外周血基因组DNA,PCR扩增GJB2基因的外显子及外显子和内含子的交界区域,然后对扩增产物进行... 详细信息

目的对1个遗传性非综合征型耳聋家系的临床表型特征进行分析,并选取GJB2基因进行突变检测。方法详细询问病史和临床检查后,提取患者及家系成员的外周血基因组DNA,PCR扩增GJB2基因的外显子及外显子和内含子的交界区域,然后对扩增产物进行DNA测序和BLAST比对进行突变分析。结果该家系所有患者为迟发性、渐进性、早期以高频听力下降为主的感觉神经性聋。GJB2基因突变分析检测到6种单核苷酸多态,其中c.79G>A(***27Ile)和c.341G>A(***114Gly)为已知单核苷酸多态,而位于3′-UTR的g.4159T>C、g.5142G/T、g.5227G/A、g.5352T/C突变为本研究新发现。结论该家系未发现GJB2外显子致病性突变,遗传性非综合征型耳聋存在明显的遗传异质性。

关键词：突变分析遗传性非综合征型耳聋 GJB2基因