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OPG/RANKL/RANK系统与骨破坏性疾病

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生物工程学报 2003年第6期19卷 655-660页

作者：刘继中纪宗玲陈苏民第四军医大学西京医院全军骨科研究所西安710032 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

近年来发现的OPG RANKL RANK系统在破骨细胞生成中起着至关重要的作用 ,是骨骼生理研究领域的重大进展。成骨细胞、骨髓基质细胞、激活的T淋巴细胞表达RANKL ,与破骨细胞前体细胞或成熟破骨细胞表面上的RANK结合后 ,促进破骨细胞的分化... 详细信息

近年来发现的OPG RANKL RANK系统在破骨细胞生成中起着至关重要的作用 ,是骨骼生理研究领域的重大进展。成骨细胞、骨髓基质细胞、激活的T淋巴细胞表达RANKL ,与破骨细胞前体细胞或成熟破骨细胞表面上的RANK结合后 ,促进破骨细胞的分化及骨吸收活性。成骨细胞及骨髓基质细胞分泌表达OPG可与RANKL竞争性结合 ,从而阻断RANKL与RANK之间的相互作用。体内多种激素或因子通过影响骨髓微环境内的OPG RANKL比率来调节骨代谢。此外 ,乳腺上皮细胞表达有RANK ,孕期在性激素的诱导下可表达RANKL ,OPG RANKL RANK系统在孕期乳腺发育以及母体向胎儿的钙转运过程中发挥重要作用。阻断RANKL RANK通路有望给骨质疏松、类风湿关节炎及癌症骨转移等骨破坏性疾病的治疗开辟新的途径。进一步研究应了解OPG RANKL RANK系统与其它信号传导途径的关系 ,重视骨骼、免疫及内分泌系统之间的相互作用。目前 ,开发与OPG功能相似或促进其表达的合成药物有可能成为具有良好经济效益和社会效益的产业。

关键词：骨保护素破骨细胞生成 T细胞骨吸收骨破坏性疾病

腺病毒介导的基因治疗在骨创伤及骨病中的应用

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中国修复重建外科杂志 2003年第3期17卷 215-218页

作者：刘继中纪宗玲胡蕴玉第四军医大学西京医院全军骨科研究所西安710032 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室

目的　介绍腺病毒介导的基因治疗的特点及其在骨创伤和骨病中的应用。　方法　广泛查阅有关重组腺病毒载体的制备原理、特点及应用研究进展等方面的文献 ,并总结腺病毒介导的基因治疗在促进骨愈合、治疗骨质疏松及类风湿性关节炎等骨病... 详细信息

目的　介绍腺病毒介导的基因治疗的特点及其在骨创伤和骨病中的应用。　方法　广泛查阅有关重组腺病毒载体的制备原理、特点及应用研究进展等方面的文献 ,并总结腺病毒介导的基因治疗在促进骨愈合、治疗骨质疏松及类风湿性关节炎等骨病研究中的应用情况。　结果　腺病毒载体具有高转染率、目的基因的高表达率及在宿主细胞内的表达有一定的时限等特点 ,能有效转染软骨细胞、成骨细胞、破骨细胞、骨髓基质细胞、关节滑膜细胞、椎间盘髓核细胞及成纤维细胞等 ,适用于骨折愈合、脊柱融合、骨质疏松及类风湿性关节炎等骨病的基因治疗。　结论　腺病毒介导的基因治疗可望为骨创伤、骨病的治疗提供新的途径。

关键词：腺病毒介导基因治疗骨创伤骨病重组腺病毒载体基因治疗应用

Expression of human osteoprotegeringene in E. Coli and bioactivity analysisof expression product

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中华外科杂志 2003年第9期41卷 641-645页

作者：刘继中胡蕴玉纪宗玲陈苏民 InstituteofOrthopedics XijingHospitalFourthMilitaryMedicalUniversityXi＇an710032China InstituteofOrthopedics XijingHospitalFourthMilitaryMedicalUniversityXi＇an710032ChinaDepaxtmentofBiochemistryandMolecularBiology

To express human osteoprotegerin (OPG) inE. Coli and analyze its bioactivity in vitro.

关键词：表达大肠杆菌生物活性表达产物活性分析

利用基因工程技术构建重组人血小板因子4真核表达载体

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中国临床康复 2003年第26期7卷 3543-3545,T001页

作者：陈衍杨岚朱帮福纪宗玲陈苏民任军解放军第四军医大学西京医院肿瘤科陕西省西安市710032 解放军第四军医大学西京医院血液科陕西省西安市710032 解放军第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西省西安市710032

目的:构建携带绿色荧光蛋白标签的重组人血小板因子4基因(plateletfactor4,PF4)的真核表达载体,并在真核细胞中表达,为研究其生物学功能奠定基础。方法:人工合成PF4基因模板,通过PCR方法扩增PF4-cDNA,然后克隆至pUC19克隆载体,经序列测... 详细信息

目的:构建携带绿色荧光蛋白标签的重组人血小板因子4基因(plateletfactor4,PF4)的真核表达载体,并在真核细胞中表达,为研究其生物学功能奠定基础。方法:人工合成PF4基因模板,通过PCR方法扩增PF4-cDNA,然后克隆至pUC19克隆载体,经序列测定后重组入pIRES2-EGFP真核表达载体并进行酶切鉴定。将鉴定正确的质粒用脂质体转染法瞬式转染至COS7细胞中。结果:获得了PF4-cDNA基因,序列分析表明,该序列与GenBank数据库中的序列一致。重组质粒酶切鉴定表明,PF4基因已与pIRES2-EGFP真核表达载体正确连接。荧光显微镜示,此载体成功转染至COS7细胞中,并获得有效表达。结论:利用基因工程技术,成功的构建了携带绿色荧光蛋白标签的PF4的真核表达载体,并在真核细胞中获得有效表达,为下一步研究其在真核细胞中的生物学功能奠定基础。

关键词：重组人血小板因子4基因真核表达载体绿色荧光蛋白基因工程技术

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骨形成蛋白诱导型真核载体的构建及其表达

中国生物化学与分子生物学报 2003年第1期19卷 71-76页

作者：朱帮福卢兹凡陈苏民陈南春纪宗玲张斌柴玉波李毅第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

成骨分化相关基因骨钙素 (OC)等的启动子内均含有成骨特异性转录因子Cbfa1特异性作用元件 ,而骨形成蛋白 (bonemorphogeneticprotein ,BMP)的促成骨分化作用正是通过其首先引起Cbfa1的升高 ,而后Cbfa1激活这些基因的表达 ,最终出现成骨... 详细信息

成骨分化相关基因骨钙素 (OC)等的启动子内均含有成骨特异性转录因子Cbfa1特异性作用元件 ,而骨形成蛋白 (bonemorphogeneticprotein ,BMP)的促成骨分化作用正是通过其首先引起Cbfa1的升高 ,而后Cbfa1激活这些基因的表达 ,最终出现成骨分化表型 .为解决BMP没有理想的活性测定方法的问题 ,在RT PCR结果证实BMP 2可促进NIH3T3和C2C12细胞Cbfa1表达后 ,构建了串联6个Cbfa1作用元件的小鼠OC部分启动子 (6OCP)控制萤光素酶 (luciferase)报告基因的真核表达质粒 ,以期来放大BMP诱导报告基因表达的作用效果 .即通过细胞转染、rhBMP 2刺激后检测萤光素酶活性变化 ,从而间接定量测定rhBMP 2的生物学活性 .结果表明 ,pcDNA3 6OCP Luc转染细胞后其报告基因的基础活性较pcDNA3 Luc大为降低 ;而且在一定剂量范围内 ,转染细胞的萤光素酶活性 (荧光值 )随rhBMP 2剂量增加而升高 ,并呈线性正相关。

关键词：骨形成蛋白载体构建基因表达萤光素酶

谷胱甘肽转硫酶-血小板因子4融合蛋白表达载体的构建、鉴定与表达

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细胞与分子免疫学杂志 2002年第2期18卷 131-133页

作者：陈衍杨岚纪宗玲朱帮福田琼张晓楠陈苏民第四军医大学西京医院血液科第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学教学实验中心陕西西安710032

目的　　构建谷胱甘肽转硫酶－血小板因子４　（ＧＳＴ－ＰＦ４）融合蛋白表达载体，并研究其编码的蛋白质在大肠杆菌中的表达。方法通过ＲＴ－ＰＣＲ方法，从ＨＬ－６０细胞中克隆ＰＦ４　ｃＤＮＡ，然后克隆至载体ｐＵＣ１９中，序列... 详细信息

目的　　构建谷胱甘肽转硫酶－血小板因子４　（ＧＳＴ－ＰＦ４）融合蛋白表达载体，并研究其编码的蛋白质在大肠杆菌中的表达。方法通过ＲＴ－ＰＣＲ方法，从ＨＬ－６０细胞中克隆ＰＦ４　ｃＤＮＡ，然后克隆至载体ｐＵＣ１９中，序列测定后把ＰＦ４基因重组入谷胱甘肽转硫酶融合基因表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－３中，并用ＩＰＴＧ诱导其在大肠杆菌中表达。结果获得了ＰＦ４　ｃＤＮＡ。序列分析表明，该序列与ＧｅｎＢａｎｋ数据库中的序列一致。重组质粒酶切鉴定表明，ＰＦ４基因已正确插入到ｐＧＥＸ－４Ｔ－３中。重组融合蛋白表达载体ＧＳＴ－ＰＦ４经ＩＰＴＧ诱导表达，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后得到１条蛋白表达带，相对分子质量（Ｍｒ）约为３６　０００。结论成功地构建融合蛋白表达载体ＧＳＴ－ＰＦ４，并在大肠杆菌中获得有效表达，为进一步研究打下良好的基础。

关键词：血小板因子4 融合基因载体基因表达谷胱甘肽转硫酶

人DOC-2氨基端PID结构域的克隆与原核表达

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第2期19卷 140-141,144页

作者：刘淑娟郑维国纪宗玲陈苏民张新海杨力军第四军医大学西京医院妇产科陕西西安710032 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学免疫学教研室陕西西安710032 第四军医大学西京医院泌尿外科陕西西安710032

目的 :克隆人DOC 2氨基端PID结构域 (暂命名为nDOC 2 ) ,并在原核细胞中表达。方法 :用RT PCR从正常人卵巢组织中扩增nDOC 2基因 ,并克隆到载体 pUC 19中。经测序证实后 ,用BamHI/EcoRI双酶切 ,亚克隆到原核表达载体 pGEX 4T 1,并转化E ... 详细信息

目的 :克隆人DOC 2氨基端PID结构域 (暂命名为nDOC 2 ) ,并在原核细胞中表达。方法 :用RT PCR从正常人卵巢组织中扩增nDOC 2基因 ,并克隆到载体 pUC 19中。经测序证实后 ,用BamHI/EcoRI双酶切 ,亚克隆到原核表达载体 pGEX 4T 1,并转化E .coliDH5α菌株。取工程菌 ,用IPTG诱导表达 ,对表达产物进行SDS PAGE鉴定。结果 :①经RT PCR、测序和酶切鉴定 ,成功地克隆了人nDOC 2基因。②经IPTG诱导的重组质粒pGEX 4T nDOC 2表达出相对分子质量 (Mr)约为 5 0 0 0 0的融合蛋白 ,与预期的结果相符。结论 :成功克隆到人DOC 2氨基端PID结构域 ,并在E .coliDH5α中表达出GST nDOC

关键词： DOC-2 肿瘤抑制基因 PID结构域基因克隆原核表达

人era基因酵母双杂交诱饵载体的构建及其激活作用的检测

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细胞与分子免疫学杂志 2001年第6期17卷 525-526页

作者：程轶梦吴元明陈苏民陈南春纪宗玲第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

era基因是细菌生存繁殖所必需的重要基因,与细胞周期和细胞分裂有关.era基因首先在大肠杆菌被发现,由于其编码的氨基酸序列与人及酵母的BAS蛋白有部分相似之处,故命名为*** RAS-like(era)基因[1].era基因不仅广泛存在于原核生物中,而且... 详细信息

era基因是细菌生存繁殖所必需的重要基因,与细胞周期和细胞分裂有关.era基因首先在大肠杆菌被发现,由于其编码的氨基酸序列与人及酵母的BAS蛋白有部分相似之处,故命名为*** RAS-like(era)基因[1].era基因不仅广泛存在于原核生物中,而且在真核生物(如蠕虫、小鼠和人)的组织中都发现有与细菌era高度同源的基因存在[2-4].人era基因的全长cDNA于1998年被克隆,与原核era基因具有很高的同源性.人ERA蛋白与大肠杆菌ERA蛋白的氨基酸序列有30%相同,两者的相似性为53%.人era基因的功能尚不清楚.我们拟采用酵母双杂交技术,克隆了人era结合蛋白基因,研究了人era与其结合蛋白的相互作用,以便对其功能的研究提供依据.

关键词：酵母双杂交 era基因载体克隆

人Era不同结构域在酵母双杂交系统中的表达及对报告基因激活作用的检测

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第2期18卷 254-258页

作者：吴元明程轶梦陈苏民陈南春纪宗玲第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

To construct the bait vector with different domains of human Era in yeast two-hybrid system, then assay whether its expression product can affect the growth of yeast cells and activate the reporter genes, the cDNA fragments encoding different domains of human Era was amplified by PCR, and subsequently they were cloned into pUC19. After being verified by sequencing, they were subcloned into the bait vector pGBKT7 of yeast two-hybrid system. Furthermore, these recombinant plasmids were transferred into AH109, and their expression products were assayed whether they could activate the reporter genes. The cDNA fragments encoding different domains of human Era were amplified successfully. The different domains of human Era were not toxic to AH109 and could not activate the reporter genes. Yeast two-hybrid GAL4 system could be used to fish human Era interacting protein.

关键词：人Era 结构域酵母双杂交系统表达报告基因激活作用检测