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延展认知视角下大学教育活动的认知化探究

延展认知视角下大学教育活动的认知化探究

作者：范伟伟兰州大学

学位级别：硕士

在教育领域中,高等教育显得尤为复杂和多样。大学教育活动包括学习活动、教学活动、科研活动,而三者又互相交融和影响,变得难以区分。通过不同的理论视角对大学教育活动进行分析和探索,有助于人们产生新的教育理念和思想,进而在应用实... 详细信息

在教育领域中,高等教育显得尤为复杂和多样。大学教育活动包括学习活动、教学活动、科研活动,而三者又互相交融和影响,变得难以区分。通过不同的理论视角对大学教育活动进行分析和探索,有助于人们产生新的教育理念和思想,进而在应用实践时产生有益的改变。心理学为教育学提供了一定的理论基础,而心理学的理论变迁也导致了它对教育产生的影响发生改变。及时将心理学中理论更新的部分对教育学在理论发展和实践应用上的具体展现发掘出来,有利于将心理学研究结果的应用推广和教育研究的进一步发展。当代认知心理学是心理学研究的主流,其中延展认知是第二代认知心理学的激进观点。延展认知相对于经典认知科学,在相关理论观点上有巨大的变化。而这些改变也会使认知心理学在教育方面的影响产生改变。在延展认知视角下,人们关于传统大学教育活动的观点发生了哪些改变?本研究试图在此方面进行一些探索,以为有在此领域研究的研究者们提供一些有益的启示。本文通过对认知心理学、教育心理学、大学教育等相关文献的整理研究,结合作者的思考和分析,简要介绍了认知心理学及其对教育的影响,以及延展认知的产生与发展情况。并在此基础上,简要阐述了大学教育活动的认知化概念。然后在延展认知的视角下分别对大学学习活动、教学活动、科研活动的若干方面进行了分析。得出的主要结论是大学教育活动中行为者的主体地位被削弱,教育活动相关的技术手段、人际环境等周边因素与行为主体共同构成了认知活动进行的载体。

关键词：认知心理学延展认知大学教育活动

普通稠油水驱后转高压蒸汽驱机理及技术界限研究

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普通稠油水驱后转高压蒸汽驱机理及技术界限研究

作者：任伟伟中国石油大学(华东)

学位级别：硕士

蒸汽驱是一种能够改善水驱普通稠油油藏波及系数并提高其洗油效率的驱替方式。普通稠油油藏水驱后转蒸汽驱时通过对油层加热,可以降低原油粘度和流度比,同时蒸汽的超覆作用可以有效动用水驱后的顶部剩余油,提高油藏的波及程度,从而大幅... 详细信息

蒸汽驱是一种能够改善水驱普通稠油油藏波及系数并提高其洗油效率的驱替方式。普通稠油油藏水驱后转蒸汽驱时通过对油层加热,可以降低原油粘度和流度比,同时蒸汽的超覆作用可以有效动用水驱后的顶部剩余油,提高油藏的波及程度,从而大幅度提高普通稠油油藏的采出程度。针对孤岛油田中二中Ng5先导试验区普通稠油埋藏较深,长期水驱造成油层压力高(吞吐降压后仍在7MPa左右)、含水率高,不适于水驱后转蒸汽驱开发的问题,本文运用油藏数值模拟技术,优化了水驱转蒸汽驱的井网形式和注汽参数,研究了水驱普通稠油油藏转高压蒸汽驱的可行性,提出了“等容同效”的概念,并通过孤岛油田中二中Ng5先导试验区的矿场实践验证了高压蒸汽驱具有较好的开发效果。为确定地层压力和蒸汽干度对水驱普通稠油油藏转高压蒸汽驱开发的影响规律,从油层加热和蒸汽扩展两方面研究了普通稠油水驱后转高压蒸汽驱的机理:通过热传递规律、温度前缘移动和平面、纵向温度场分布等研究了地层压力、蒸汽干度和转驱的含水率时机对蒸汽加热油藏的影响;通过含气饱和度前缘移动、蒸汽腔体积和平面、纵向含气饱和度场分布研究了地层压力和蒸汽干度对蒸汽在油层中扩展的影响。最后研究了不同油藏静态参数和动态参数对油层加热和蒸汽扩展两方面机理的影响规律。为确定普通稠油油藏水驱后转高压蒸汽驱开发的参数适应性界限,运用油藏数值模拟手段研究了不同油藏静态参数和动态参数对水驱普通稠油油藏转高压蒸汽驱开发效果的作用规律,并对这些影响因素进行了敏感性分析。在不同油藏静态参数对水驱普通稠油油藏转高压蒸汽驱开发效果的作用规律研究的基础上,结合动态经济评价方法,建立了水驱普通稠油油藏转高压蒸汽驱的油藏参数适应性界限和油价边界。

关键词：数值模拟油层加热蒸汽扩展高压蒸汽驱

拟威克酵母的烷烃利用、CYP450家族基因的表达和功能研究

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拟威克酵母的烷烃利用、CYP450家族基因的表达和功能研究

作者：李伟伟山东大学

学位级别：硕士

槐糖脂是一种由一些非致病性酵母产生的糖脂类生物表面活性剂。微生物产生的槐糖脂是由一系列的槐糖脂分子组成的混合物,这些混合物可以归结为两类,一类是内酯型槐糖脂,另一类是酸型槐糖脂。其中,内酯型槐糖脂具有更好的抗菌活性和更强... 详细信息

槐糖脂是一种由一些非致病性酵母产生的糖脂类生物表面活性剂。微生物产生的槐糖脂是由一系列的槐糖脂分子组成的混合物,这些混合物可以归结为两类,一类是内酯型槐糖脂,另一类是酸型槐糖脂。其中,内酯型槐糖脂具有更好的抗菌活性和更强的降低表面张力的能力,而酸型槐糖脂则具有更强的发泡能力和更好的水溶性。由于槐糖脂具有低毒性、生物可降解性和良好的环境兼容性等特点,使其能够广泛应用在洗涤剂、化妆品、石油工业和环境保护等诸多领域。拟威克酵母是本实验室从污水中分离得到的高产槐糖脂的菌株,槐糖脂的产量可达130 g/L以上,具有较大的应用潜力。因此,对拟威克酵母槐糖脂合成调控途径中相关基因的深入研究,有助于我们促进槐糖脂在更多工业领域中的应用开发。本论文的主要研究内容和结果如下：1.拟威克酵母对不同碳链烷烃的利用在拟威克酵母的发酵培养基中分别添加不同碳链的烷烃(正辛烷、正癸烷、正十二烷、正十四烷、正十六烷和正十八烷),通过测定添加不同碳链长度的烷烃时槐糖脂的产量和用HPLC-MS分析产物槐糖脂的成分可知：拟威克酵母对正十六烷的利用效果最好,对正十四烷和正十八烷也能较好的利用,但对正辛烷、正癸烷和正十二烷只能微弱地利用;拟威克酵母利用正辛烷、正癸烷、正十二烷、正十四烷和正十六烷产生较多的内酯型槐糖脂,利用正十八烷产生较多的酸型槐糖脂。2.不同碳链烷烃对拟威克酵母CYP450基因的诱导表达通过分析拟威克酵母基因组的测序结果,发现了7个细胞色素P450基因,它们是CYP52-M1、CYP52-N1、CYP52-N2、CYP52-E1、CYP52-E2、CYP51和CYP-X。在发酵培养基中分别添加不同碳链的烷烃(正辛烷、正癸烷、正十二烷、正十四烷、正十六烷和正十八烷),通过对拟威克酵母CYP450基因表达量的测定可知：在烷烃代谢方面,CYP52-M1、CYP52-E1、CYP52-E2、CYP52-N1和CYP51基因起到了较为重要的作用,其中CYP51基因是组成型表达的基因,CYP52-M1、CYP52-E1、 CYP52-E2和CYP52-N1基因是诱导型表达的基因;在烷烃代谢方面,CYP52-N2和CYP-X基因不像其他CYP450基因一样起到较为重要的作用。3.拟威克酵母CYP450家族基因的功能研究成功构建了拟威克酵母的三种CYP450基因的敲除株ΔCYP52-E1、ΔCYP52-E2和ΔCYP52-N2.以油酸为碳源对拟威克酵母野生株和构建的这三个敲除株进行发酵,通过对发酵产物槐糖脂产量的测定和组分的分析,推断CYP52-E1、CYP52-E2和CYP52-N2是CYP52-M1的同工酶。同时,采用原核异源表达和真核异源表达两种方法对拟威克酵母的CYP52-E1和CYP51蛋白进行异源表达,但均未表达成功。对异源表达失败的重组菌中相关基因进行了荧光定量的检测,发现相关基因在重组菌中进行了转录,但是不能诱导出目的蛋白,推测相关基因在翻译时出现了问题,或是蛋白在分泌时出了问题,抑或是这两种蛋白难以异源表达,原因仍在进一步的探索之中。

关键词：拟威克酵母烷烃利用槐糖脂细胞色素P450 基因表达

采用排间界面静压约束伴随方法的多级压气机叶片优化

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航空动力学报 2015年第8期30卷 1869-1874页

作者：唐方明余佳李伟伟季路成中国航空工业集团公司中国航空动力机械研究所湖南株洲412002 北京理工大学宇航学院北京100081

为解决伴随优化应用在多级压气机中出现的优化工况点漂移问题,在前期薄层N-S方程伴随方法基础上,对目标函数——出口熵增不仅施以质量流量、总压比约束,还添加排间界面静压展向分布作为新的约束条件.以某5级压气机为对象,对其中第1级转... 详细信息

为解决伴随优化应用在多级压气机中出现的优化工况点漂移问题,在前期薄层N-S方程伴随方法基础上,对目标函数——出口熵增不仅施以质量流量、总压比约束,还添加排间界面静压展向分布作为新的约束条件.以某5级压气机为对象,对其中第1级转、静叶分别在首1.5级和全5级压气机环境下进行了优化.结果表明,施加排间界面静压展向分布约束能够显著解决优化工作点漂移问题,优化后5级压气机的效率提高0.4个百分点.

关键词：多级压气机伴随方法优化设计排间界面压强分布约束

宣木瓜果实生长发育及主要营养物质动态变化研究

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宣木瓜果实生长发育及主要营养物质动态变化研究

作者：张伟伟安徽农业大学

学位级别：硕士

宣木瓜是安徽省名贵的中药材特产之一。宣木瓜营养价值高,富含氨基酸、有机酸、维生素、胡萝卜素、果胶、皂苷、黄酮类物质和氮、磷、钙、钾、镁等大量元素及铁、锌、锰等多种微量元素,其中富含的齐墩果酸具有护肝、抗炎抑菌、抗病毒、... 详细信息

宣木瓜是安徽省名贵的中药材特产之一。宣木瓜营养价值高,富含氨基酸、有机酸、维生素、胡萝卜素、果胶、皂苷、黄酮类物质和氮、磷、钙、钾、镁等大量元素及铁、锌、锰等多种微量元素,其中富含的齐墩果酸具有护肝、抗炎抑菌、抗病毒、降糖降脂等作用。本试验以罗汉脐、小苹果、长香、野生四个宣木瓜品种为试材,研究了四个宣木瓜品种果实中粗蛋白、总糖、还原糖、果胶、和矿质元素(N、P、K、Mg、Na)的含量特征,初次探索了宣木瓜果实生长发育规律、果实生长发育期间(4月-7月)矿质元素(N、P、K、Mg)、粗蛋白、总糖、还原糖、果胶含量的积累规律、齐墩果酸含量特征、果实发育期间齐墩果酸含量的动态变化。研究的主要结果表明:1.不同宣木瓜品种果实的纵径呈现不同的变化特点,罗汉脐纵径没有很明显的增长高峰期,长香品种呈现很明显的S型曲线。不同宣木瓜品种果实横径的生长发育趋势基本一致,均呈现“S”型增长动态曲线。2.罗汉脐、小苹果、长香、野生四个宣木瓜品种鲜果重量增长曲线均为“单S”型曲线,由于品种特性的差异,不同宣木瓜品种鲜果重的变化规律也有所差异。3.不同宣木瓜品种果实生长发育过程中含水量的变化均表现出一致性,即生长初期(4月15日至4月30日)含水量较高,随着的果实生长,含水量急剧下降。含水量下降变化的拐点均为4月底。4.罗汉脐、小苹果、长香、野生四个宣木瓜品种叶片中N、P、K、Mg、Na含量排序依次为:野生>罗汉脐>长香>小苹果,野生>罗汉脐>小苹果>长香,野生>小苹果>罗汉脐>长香,罗汉脐>小苹果>野生>长香,长香>野生>小苹果>罗汉脐。野生品种全氮、全磷、全钾含量最大,分别为23.3 g/kg、5.19 g/kg、6.88 g/kg,长香品种全磷、全钾、全镁含量最小,分别为3.09 g/kg、4.23 g/kg、1.53 g/kg。5.不同宣木瓜品种果实中N、P、K、Mg、Na含量排序分别为:野生>罗汉脐>小苹果>长香,野生>小苹果>罗汉脐>长香,小苹果>野生>罗汉脐>长香,罗汉脐>野生=长香>小苹果,罗汉脐>小苹果>野生>长香。氮含量的差异最大(最大差值为7.2),其次为磷(2.61),镁(0.04)和钠(0.18)含量的差异较小。6.果实发育期间,不同品种宣木瓜果实内N、P、K、Mg含量的变化趋势基本一致,即幼果期含量最高,随着果实生长各矿质元素含量均表现出递减。N和P含量递减趋势基本一致,K、Mg含量变化与N、P略有不同。叶片中氮含量呈现出一致的逐渐下降趋势,磷含量在4月中旬至四月底期间出现急剧下降,钾含量一直比较稳定,仅5月中旬出现明显的小高峰,随后回落继续维持相对稳定的趋势。叶片中镁含量的变化趋势基本一致,即4月中旬至5月中旬稳中上升,5月中旬以后下降,长香和野生品种的快速下降时期相比罗汉脐和小苹果推迟半个月,同时发现,镁含量的上升拐点为6月中旬。7.罗汉脐、小苹果、长香、野生4个宣木瓜品种果实的粗蛋白、总糖、还原糖、果胶含量存在一定差异。其中以总糖和还原糖含量的差异较大,最大差值分别为4.55和2.01,果胶含量的差异最小,最大差值仅为0.4。四个供试样品种中,野生宣木瓜粗蛋白和果胶含量最高,总糖和还原糖含量最低。随着宣木瓜果实的生长发育,四个宣木瓜品种果实内的粗蛋白质含量均逐渐减少,还原糖含量总体上表现出由高到底逐渐递减的变化趋势,果胶表现为逐渐积累的变化趋势,并在5月中旬达到最大值,同时发现,果实发育后期变化相对舒缓。8.罗汉脐、小苹果、长香、野生4个宣木瓜品种果实中的齐墩果酸含量存在很大差异,其中,野生宣木瓜果实中的含量最高为15.24 mg/g,小苹果含量最低为8.89 mg/g。四个品种宣木瓜果实中齐墩果酸含量由高到低依次为:野生>长香>罗汉脐>小苹果。果实发育期间,四个宣木瓜品种齐墩果酸含量的变化曲线均出现两个高峰,分别在4-5月间和6月中旬以后。

关键词：宣木瓜果实生长发育规律矿质养分内含物齐墩果酸

中学思想政治课加强法治教育研究 ——以预防和减少中学生违法犯罪为视角

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中学思想政治课加强法治教育研究 ——以预防和减少中学生违法犯...

作者：张伟伟聊城大学

学位级别：硕士

智利诗人加夫列拉·米斯特拉尔(Gabriela Mistral)写过一首诗:“许多需要的东西我们可以等待,但是儿童不能等待。他们的骨骼正在形成,血液正在成长,对儿童,我们不能说明天,他的名字是今天。”同样,对于中学生违法犯罪问题,我们也不能等... 详细信息

智利诗人加夫列拉·米斯特拉尔(Gabriela Mistral)写过一首诗:“许多需要的东西我们可以等待,但是儿童不能等待。他们的骨骼正在形成,血液正在成长,对儿童,我们不能说明天,他的名字是今天。”同样,对于中学生违法犯罪问题,我们也不能等待,否则会付出沉重代价。加强对中学生的法治教育、提高中学生的法治意识、预防中学生违法犯罪迫在眉睫,关乎民族的前途和命运。中学思想政治课是对中学生进行法治教育的主阵地,具有其他途径无可比拟的独特价值。但在现实生活中,中学思想政治课法治教育的功能并没有得到很好的发挥,仍然存在很多不足。这些制约因素包括以下几个方面:第一,中学学校对中学思想政治课进行法治教育的功能认识不足;第二,中学思想政治课教材中的法治教育内容不能满足实际需求;第三,中学思想政治课授课老师的法律素养参差不齐、教学方式单一;第四,中学思想政治课法治教育效果考评体系落后等。这些问题都需要我们去勇敢面对、奋力解决。如何加强中学思想政治课的法治教育功能?如何切实增强法治教育效果,提高中学生法治观念,减少中学生违法犯罪?本文主要通过宏观策略和具体路径两个方面,对中学思想政治课加强法治教育的方法、途径进行阐述,宏观策略主要包括学校要充分认识中学思想政治课进行法治教育的作用,创造良好的法治教育环境;自上而下修订中学思想政治课教材,调整法治教育内容;完善中学思想政治课教师的培训机制,提高教师的综合素养;完善对中学思想政治课法治教育的考评体系等;具体路径主要是指中学思想政治课教师将法治教育融入每一个教学环节,从备课、讲授、课堂小结、课后作业、反馈等环节入手,对整个法治教育教学过程实行全面有效的控制。通过上述努力,以期达到提高中学生法治意识,预防和减少违法犯罪的目的。

关键词：中学思想政治课法治教育中学生违法犯罪

慢性铁超载加重小鼠腹主动脉粥样硬化病变的研究

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慢性铁超载加重小鼠腹主动脉粥样硬化病变的研究

作者：徐伟伟吉林大学

学位级别：硕士

背景:心血管疾病是目前影响人类健康最重大的慢性疾病,据统计,全球近50%的人死于心血管疾病及其严重并发症,我国心血管疾病患者人数已超过2.9亿,心血管疾病已超越癌症成为影响人类健康的第一大死因。年龄、高血压、高血脂、糖尿病、吸... 详细信息

背景:心血管疾病是目前影响人类健康最重大的慢性疾病,据统计,全球近50%的人死于心血管疾病及其严重并发症,我国心血管疾病患者人数已超过2.9亿,心血管疾病已超越癌症成为影响人类健康的第一大死因。年龄、高血压、高血脂、糖尿病、吸烟被认为是AS形成的传统的5大危险因素,然在因冠心病死亡的患者中,约半数的人不能归咎于传统的危险因素,这提示更多发病机制的存在。20世纪80年代Sullivan首次提出铁与心血管疾病的关系,30多年来关于铁超载与心血管疾病的关系的研究从未间断,目前铁超载与动脉粥样硬化关系仍然饱受争议,但是大量实验和流行病学证据支持铁过量与动脉粥样硬化病变程度呈正相关。铁作为催化剂,通过Fenton及Haber–Weiss反应产生大量活性氧,体内活性氧过过表达可造成生物大分子氧化损伤以细胞内的氧化还原环境的改变,从而影响氧化还原敏感的细胞信号转导途径和转录因子,最终导致动脉粥样硬化产生。目的及意义:实验通过建立铁超载模型,测定铁超载时沙鼠体内ROS表达及腹主动脉粥样硬化病变情况,评估铁超载致氧化应激表达与动脉粥样硬化的关系,为临床上预防和治疗动脉粥样硬化提供新的视角。方法:选取健康不同月龄雌雄性长爪沙鼠30只(6月龄10只、30月龄20只),按照月龄不同平均分为3组:低龄对照组—6月龄沙鼠10只;高龄对照组—30月龄沙鼠10只;实验组,也称铁负荷组(高龄+铁负荷10w)—30月龄沙鼠10只。实验组沙鼠规律给予皮下注射右旋糖酐铁10周,剂量为100mg/kg,频率为5天/次。沙鼠称重,全麻下腹主动脉取血,处死大鼠后取心脏及腹主动脉组织(长约3-5cm),称取心脏重量,全血经高速离心后取上清液,所有样本均需超低温保存(-80℃)。实验中测定了血清铁含量、总铁结合力的值,并通过心肌普鲁士蓝染色证实铁在沙鼠组织中的沉积,铁超载模型的建立;通过测定了组织中MDA含量、SOD活性及沙鼠腹主动脉血管超氧阴离子水平,验证铁超载时氧化应激表达;通过沙鼠腹主动脉组织油红“O”脂肪染色及钙盐沉积测定,评估不同组沙鼠腹主动脉粥样硬化病变程度。结果:1、实验组沙鼠的SI及TIBC较高龄对照组分别升高了358%、110%,较低龄对照组分别升高了374%、126%,P0.05,差别无统计学意义。2、三组沙鼠心肌组织中MDA及SOD测定结果示:高龄对照组与低龄对照组比较MDA含量升高了28.06%,SOD活性下降了17.44%,而实验组与高龄对照组比较,MDA含量升高了90.45%,SOD活性下降了41.25%,P<0.05,差异均有统计学意义3、沙鼠心肌组织Prussian染色显示慢性铁超载组沙鼠心肌细胞质中可见大量被染成深蓝色的铁沉积颗粒,而对照组无明显铁沉积颗粒。分析结果显示:实验组沙鼠心肌细胞间质中铁沉积面积与对照组比增加了4100%,P<0.01,差异有统计学意义。4、氧化荧光探针HE可测定沙鼠腹主动脉氧化应激表达情况,结果表现为不同强度的红色荧光,荧光强度与超氧阴离子O2–表达呈正相关。结果显示:高龄组沙鼠动脉红色荧光的积分光密度较低龄组增强,说明高龄组沙鼠动脉组织中超氧阴离子O2–表达水平增加;而铁负荷组动脉组荧光积分光密度最强,超氧阴离子O2–表达水平最高。两组差异明显,有统计学意义(P<0.05)。5、三组沙鼠腹主动脉经“油红0染色”后动脉壁染色结果显示如下,结果显示低龄组被染色组织面积小、颜色浅,不明显;高龄组较低龄组染色面积增大,颜色加深;而铁负荷组被染色面积最大,颜色最深。利用Image-pro plus 6.0软件进行分析及经统计分析后显示不同组沙鼠被深染组织阳性面积率差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。6、Von Koss钙盐染色结果示三组沙鼠动脉管壁均有不同程度被染成棕黑色的钙盐沉积颗粒,高龄组钙盐沉积较低龄组增加,而实验组较高龄组钙沉积更明显。分析结果显示:高龄对照组钙含量较低龄对照组增加了71.7%,而实验组与高龄对照组比较钙盐沉积含量增加了105%,差异显著,有统计学意义(P<0.01)。结论:1、铁负荷增加时,过量的铁可在沙鼠组织内大量铁沉积。2、铁超载时,过量的铁使沙鼠体内氧化应激增加,ROS表达增加。3、年龄是动脉粥样硬化斑块形成的危险因素,而铁负荷增加能使小鼠腹主动脉粥样硬化病变程度进一步加重。4、慢性铁超载致动脉粥样硬化病变程度加重机制可能与铁超载致氧化应激表达增加密切相关。

关键词：铁超载腹主动脉氧化应激动脉粥样硬化

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《鬼谷子》研究

《鬼谷子》研究

作者：梁伟伟山东师范大学

学位级别：硕士

《鬼谷子》是一部关于谋略思维的理论著作,该书行文风格简要精练,排比丰富且讲究押韵,古往今来的学者们对《鬼谷子》真伪及鬼谷子真实身份的界定等相关问题众说纷纭。本文通过考证诸史文献,推断鬼谷子应当为春秋战国时人,他隐居鬼谷山,... 详细信息

《鬼谷子》是一部关于谋略思维的理论著作,该书行文风格简要精练,排比丰富且讲究押韵,古往今来的学者们对《鬼谷子》真伪及鬼谷子真实身份的界定等相关问题众说纷纭。本文通过考证诸史文献,推断鬼谷子应当为春秋战国时人,他隐居鬼谷山,即今天的河南省淇县云梦山,所著《鬼谷子》一书应为他教徒授课的教材,多从理论的角度对游说人君的方法措施进行归纳和总结,也因为此,鬼谷子历来被人们认为是纵横家的创始人。然考证《鬼谷子》思想内容,既与推崇仁义礼智的儒家思想相符,又渗透着道家的阴阳生物和崇阴贵柔思想,此外还广含杂取了阴阳家、法家、兵家、纵横家等诸子百家学说,堪称一部“通众家之意”的理论著作,因而应界定为杂家类著作。对于《鬼谷子》的评价,历来也是褒贬不一,的确,《鬼谷子》存在某些思想上的弊端,例如该书往往过于强调目的性,有时甚至主张为达目的不择手段,这便常常为后世的正统学者所诟病,被视为“蛇鼠之智”。然而,我们也不可因此而抹杀该书的价值所在,《鬼谷子》一书折射出的先秦诸子百家思想,有助于我们更全面地了解春秋战国文化史,书中不仅涉及了寓意深刻的谋略思想,更蕴含着丰富而深邃的哲学理论,即使对我们今天的工作生活也颇有借鉴意义。此外,《鬼谷子》一书对言语交流的认识为广义修辞学的研究提供了丰富资料,也为我们研究先秦文学的语言特色提供了可贵的文献史料。本文旨在前人研究的基础上,以文献史料为主要依据,客观科学地考证鬼谷子其人及其著作《鬼谷子》之真伪等相关问题,并重新阐释《鬼谷子》思想研究及历代评介中一些悬而未决的问题。全文内容大致可分为三个部分:第一部分:鬼谷子其人及其著作《鬼谷子》考关于鬼谷子是否有其人、他真实身份的界定和其隐居地究竟系何处等问题,历来都是众说纷纭,本部分主要对鬼谷子本人的相关问题和其著作《鬼谷子》的真伪、著作时代、苏秦作书说等相关问题进行了考证研究。笔者认为,鬼谷子在历史上是确有其人的,他生活于春秋战国时期,是纵横家代表人物苏秦、张仪的老师。《鬼谷子》内篇为鬼谷子所著,而外篇的三篇并非一个完整的整体。《本经阴符七术》与上中卷保持一致,仍然押韵,且用韵特点相差不大,而《持枢》、《中经》则概不用韵,很明显与《本经阴符七术》并非一作者。且从语言学史的用韵角度上考虑,《持枢》、《中经》两篇的著作时间肯定要晚于《本经阴符七术》,为后世人所伪托。第二部分:《鬼谷子》的思想内容本部分主要概述了《鬼谷子》的内容主旨,并通过深入的思想分析来阐释《鬼谷子》一书的思想内涵。鬼谷子主张“世无常贵,事无常师”,其著作兼取百家思想,广含儒家、道家、阴阳家、兵家、纵横家等诸子百家学说,笔者大胆对历来人们所认为的“纵横家独存之子书”给予了反驳,提出《鬼谷子》应归类于先秦时期的杂家著作。第三部分:《鬼谷子》的评介关于《鬼谷子》一书的优劣问题,历来也是褒贬不一。该部分综述了明清以前对《鬼谷子》的历代评价,并分析了各种评价产生的原因及时代背景。在承认《鬼谷子》的确存在某些思想弊端的同时,本部分从历史价值、文献史料价值、社会价值等几方面概述了《鬼谷子》的价值所在,肯定了《鬼谷子》的地位及作用。

关键词：鬼谷子《鬼谷子》杂家价值

犬瘟热病毒H蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立

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犬瘟热病毒H蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立

作者：孙伟伟西藏大学

学位级别：硕士

犬瘟热(canine distemper,CD)是由犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)感染引起的消化道、呼吸道、神经系统异常以及机体免疫抑制的传染性疾病。近年来,我国CD呈现出新的流行特点:毒株变异快、感染谱不断扩大、混合感染现象普遍,由... 详细信息

犬瘟热(canine distemper,CD)是由犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)感染引起的消化道、呼吸道、神经系统异常以及机体免疫抑制的传染性疾病。近年来,我国CD呈现出新的流行特点:毒株变异快、感染谱不断扩大、混合感染现象普遍,由其引发的免疫抑制致使疫苗免疫失败时有发生,对养犬业和毛皮动物养殖造成的直接及间接经济损失巨大,寻求防控该病已成为亟待解决的重大科学与生产实际问题。为此,本研究旨在了解江苏部分地区犬瘟热流行情况,分析病毒H蛋白的遗传变异规律,丰富了CDV流行毒株资源库;同时,扩充已建立的CDV单克隆抗体杂交瘤细胞株库,从中筛选具有广谱中和活性单克隆抗体;基于重组H蛋白和单克隆抗体建立CDV抗原与抗体竞争ELISA检测方法,用于CD病原学和血清学检测,为CDV的感染监测提供技术支撑。主要研究内容包括:本研究收集了60份2017-2019年江苏部分地区疑似犬瘟热病料,采用RT-PCR法鉴定了22份病料样品为CDV核酸阳性,进一步通过扩增完整H基因、核酸测序、BLAST比对、同源性比对、遗传进化分析和N-糖基化位点统计分析显示,其中18份America-1型毒株与疫苗株(Ondetstepoort株)高度同源;其余4份属Asia-1型毒株(分别命名为YZ-4、NJ-13、NJ-21、YZ-27),与疫苗株氨基酸同源性在90.1%-91.2%之间,毒株间同源性为97.2%-99.8%,与国内流行Asia-1型毒株同源性较高(99.7%-100%);4株Asia-1型毒株在H蛋白584-586位点均具有潜在的N-糖基化修饰,具有Asia-1型强毒株的分子特征;另外,YZ-4株、NJ-21株和YZ-27株H蛋白SLAM受体结合区域未发生改变(519R/530G/549Y),而NJ-13株的受体结合区域突变为519R/530G/549H,提示该毒株与宿主结合能力可能发生改变。本研究扩充了CDV单克隆抗体杂交瘤细胞株库,基于重组H蛋白的间接ELISA法筛选获得7株稳定分泌抗H蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(分别命名为3B1、3B5、3C5、3D5、5A6、4G12和7B2),由此产生的抗体亚类均鉴定为Ig G1κ。间接免疫荧光试验显示上述单克隆抗体均能与CDV发生反应,不与犬细小病毒、犬冠状病毒以及犬流感病毒反应,具有良好特异性;病毒中和试验测定其培养上清的抗体中和效价为2-2,诱生BALB/c小鼠腹水的抗体中和效价为10-10,其中3B5、5A6、4G12、7B2之间的叠加系数均在50%以上,表明这4株单克隆抗体识别不同抗原表位;连续传代检测显示在第20代仍具有高效分泌抗体的能力,表明其稳定性良好;另外,3B5、5A6、4G12和7B2除能中和Ondetstepoort疫苗株(America-1型)外,还能中和当前流行的Asia-1型CDV毒株,其中3B5抗Ondetstepoort株和YZ-4株的中和效价分别为2和2,具有较好的广谱中和活性。本研究以HRP酶标的3B5单克隆抗体和重组H蛋白为基础建立了CDV抗体竞争ELISA检测方法,采用方阵滴定法CDV抗体竞争ELISA检测方法的最佳包被抗原(重组H蛋白)浓度为4μg/m L,H-RP酶标3B5抗体最佳稀释浓度为1:3 200,待检血清最佳稀释浓度为1:8,血清样本抑制率(PI)≥45%判定为阳性,与国外商品化的犬瘟热抗体试剂盒相比,检测结果符合率为97%,具有良好的特异性和敏感性。本研究以HRP酶标的重组H蛋白和3B5单克隆抗体为基础建立了CDV抗原竞争ELISA检测方法,采用方阵滴定法确定CDV抗原竞争ELISA检测方法的最佳包被抗体(3B5)浓度为2μg/m L、HRP酶标重组H蛋白最佳稀释浓度为1:1 600,经反应条件优化,该方法最低病毒检测量为10TCID/m L,特异性和重复稳定性良好,与RT-PCR法检测临床样品的符合率达100%。综上,本研究对江苏部分地区开展了CDV分子流行病学调查,分析流行毒株的遗传变异规律,及时总结其流行病学态势和分子变异情况;同时,扩充了CDV毒株资源库和CDV单克隆抗体杂交瘤细胞株库,筛选了具有广谱中和活性的抗H蛋白单克隆抗体;以此建立了CDV抗原和抗体竞争ELISA检测方法,完善CD病原学和血清学检测方法和评价CDV感染水平,为科学防控CD提供技术支撑。

关键词：犬瘟热病毒 Asia-1型毒株 H蛋白单克隆抗体竞争ELISA