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甜味蛋白质基因工程与分子改性研究进展

生物工程学报 2024年

作者：卢尚阳常诗瑜王语晴刘波齐鲁工业大学(山东省科学院)食品科学与工程学院中国农业科学院烟草研究所

甜味蛋白质由于具有高甜味、低热量、安全无毒等特点，因此在食品与饮料等领域有较强的应用价值。到目前为止，已从天然植物中获得8种天然甜味蛋白。本文对这8种甜味蛋白的甜味性质及其甜味产生的分子机制进行了介绍，并重点阐述了莫内... 详细信息

甜味蛋白质由于具有高甜味、低热量、安全无毒等特点，因此在食品与饮料等领域有较强的应用价值。到目前为止，已从天然植物中获得8种天然甜味蛋白。本文对这8种甜味蛋白的甜味性质及其甜味产生的分子机制进行了介绍，并重点阐述了莫内林（monellin）、植物甜蛋白（brazzein）和索马甜（thaumatin）这3种代表性甜味蛋白的基因工程、异源表达与分子改性进展，对其在不同宿主内的表达产率及甜味性质进行了总结分析，并对甜味蛋白质的研究、应用和产业化发展进行了展望。

关键词：甜味蛋白质基因工程异源表达分子改性结构甜味受体

HPV16病毒编码circE7促进宫颈癌细胞增殖迁移、抑制铁死亡的机制研究

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HPV16病毒编码circE7促进宫颈癌细胞增殖迁移、抑制铁死亡的机制...

作者：王语晴武汉大学

学位级别：硕士

背景与目的:宫颈癌（cervical cancer,CC）是危害女性健康的恶性肿瘤,其发病率和死亡率在世界上仍处于较高的水平。高危型人乳头瘤病毒（HPV）的感染是宫颈癌主要诱因,同时细胞产生的非编码RNA,包括微小RNA（micro RNAs,miRNAs）、环状... 详细信息

背景与目的:宫颈癌（cervical cancer,CC）是危害女性健康的恶性肿瘤,其发病率和死亡率在世界上仍处于较高的水平。高危型人乳头瘤病毒（HPV）的感染是宫颈癌主要诱因,同时细胞产生的非编码RNA,包括微小RNA（micro RNAs,miRNAs）、环状RNA（circular RNA,circRNA）等分子,也可以通过表观调控在宫颈癌的进程中发挥作用。HPV16 circE7是由HPV16型病毒编码的circRNA,circE7可通过N6-甲基腺苷（m6A）修饰,定位于细胞质,但其在宫颈癌细胞中的作用机制目前仍不清楚。本课题将主要研究宫颈癌细胞中HPV16病毒编码circE7的表达情况,以及circE7通过miR-214-3p对宫颈癌细胞增殖及凋亡的作用和潜在机制,同时探讨circE7、miR-214-3p与其靶基因GPx4对宫颈癌细胞铁死亡的作用以及调控机制。方法:1.培养HPV阴性的C33A细胞以及HPV16阳性的宫颈癌细胞Caski,采用实时荧光定量PCR法检测这两种细胞系中HPV16 E7、HPV16 circE7以及miR-214-3p的表达水平。2.为了探究HPV16 circE7及miR-214-3p基因对两种细胞系增殖迁移以及凋亡的影响,在Caski细胞中分别转染针对HPV16 circE7的si RNA、miR-214-3p mimics以及mimics NC,在C33A细胞中转染表达HPV16 circE7的质粒及pc DNA3.1（+）空载体后,采用CCK8法检测细胞增殖的改变、细胞划痕实验和Transwell迁移侵袭实验检测HPV16 circE7及miR-214-3p对细胞迁移以及侵袭的影响,细胞周期以及细胞凋亡由流式细胞仪法进行检测。3.使用star Base v3.0 miRNA靶基因预测软件预测分析miR-214-3p的靶基因,采用实时荧光定量PCR法以及双荧光素酶报告实验,验证miR-214-3p对靶基因的结合位点及潜在的抑制作用。4.在HPV16阳性Caski细胞中,在干预miR-214-3p及其靶基因后,检测GSH、GPx、MDA、ROS、线粒体膜电位水平,以及细胞铁死亡的改变情况;同时在Caski细胞中分别转染针对HPV16 circE7的si RNA、miR-214-3p mimics以及mimics NC,在C33A细胞中转染表达HPV16 circE7的质粒及pc DNA3.1（+）空载体后采用如上实验检测细胞铁死亡的相关指标及改变情况。结果:1.实时荧光定量结果显示:与HPV阴性C33A细胞相比,HPV16阳性Caski细胞中HPV16 E7、HPV16 circE7呈显著高表达水平（p＜0.01）,miR-214-3p呈显著低表达水平（p＜0.01）。***8法、细胞划痕实验、Transwell迁移侵袭实验、细胞周期以及细胞凋亡实验结果显示,在HPV16阳性Caski细胞中敲低HPV16 circE7及过表达miR-214-3p后,细胞的增殖、迁移和侵袭水平受到抑制（p＜0.05）,细胞周期显示S期显著降低（p＜0.05）,细胞的凋亡水平明显上升（p＜0.05）,在HPV阴性C33A细胞过表达HPV16 circE7后,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著上调（p＜0.01）,细胞周期显示S期上升（p＜0.05）,细胞凋亡水平下降（p＜0.05）。3.使用starbase v3.0 miRNA靶基因预测软件预测miR-214-3p的靶基因,分析筛选后得到miR-214-3p与GPx4有多个结合位点,采用实时荧光定量PCR法和双荧光素酶报告实验进行验证,在分别转染miR-214-3p mimics和mimics NC后,q PCR结果显示过表达miR-214-3p后GPx4核酸水平减少（p＜0.01）,双荧光素酶报告结果显示带有MUT-GPx4 3’UTR片段的荧光信号显著下降（p＜0.05）,证明miR-214-3p与GPx4存在结合位点。4.用GPx4的直接抑制剂RSL3抑制GPx4,在Caski细胞中分别转染针对HPV16 circE7的si RNA、miR-214-3p mimics以及mimics NC后,采取GSH、GPx、MDA、ROS以及线粒体膜电位实验,结果显示,细胞GSH、GPx表达水平降低（p＜0.05）,MDA以及ROS水平上升（p＜0.05）,线粒体膜电位红色荧光/绿色荧光值下降。在C33A细胞中转染表达HPV16 circE7的质粒及pc DNA3.1（+）空载体后,采取GSH、GPx、MDA、ROS以及线粒体膜电位实验,结果显示,细胞GSH、GPx表达水平提高（p＜0.05）,MDA以及ROS水平下降（p＜0.05）,线粒体膜电位红色荧光/绿

关键词：宫颈癌人乳头瘤病毒环状RNA 环状RNA-E7 铁死亡

基于网络药理学探讨丹参注射液对高脂血症模型小鼠的降脂作用及其机制研究

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基于网络药理学探讨丹参注射液对高脂血症模型小鼠的降脂作用及其...

作者：王语晴黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

目的:1.观察丹参注射液对高脂乳剂诱导的高脂血症小鼠血脂的影响。2.运用网络药理学筛选出丹参注射液治疗高脂血症的作用靶点及机制。3.基于PPARγ信号通路中关键蛋白的表达情况,对网络药理学的预测结果进行初步验证,探讨丹参注射液改... 详细信息

目的:1.观察丹参注射液对高脂乳剂诱导的高脂血症小鼠血脂的影响。2.运用网络药理学筛选出丹参注射液治疗高脂血症的作用靶点及机制。3.基于PPARγ信号通路中关键蛋白的表达情况,对网络药理学的预测结果进行初步验证,探讨丹参注射液改善高脂血症的作用机制。方法:1.高脂乳剂灌胃法复制高脂血症小鼠模型,并将造模成功的小鼠随机分配为模型组、非诺贝特组（26 mg/kg）、丹参注射液高剂量组（5 m L/kg）、丹参注射液低剂量组（2.5 m L/kg）,另设空白组进行实验研究。模型组及各给药组采用高脂乳剂灌胃法继续造模,各组小鼠上午生理盐水或高脂乳剂灌胃,下午腹腔注射生理盐水或相应药物,连续21 d。每天记录小鼠进食量,每周测量小鼠体重,于末次给药2 h后眼底静脉丛取血,检测各组血脂指标、氧化指标;分离肝脏,称重,计算肝系数;HE染色观察肝组织病理形态学变化。2.基于上述实验研究进行网络药理学分析。通过文献调研获取丹参注射液的有效化学成分,使用Swiss Target Prediction和Pharmmapper数据库,获得丹参注射液有效成分作用靶点。通过检索Drug Bank、OMIM、Dis Ge NET、Gene Cards、Therapeutic Target Database五个疾病靶点数据库收集高脂血症的疾病靶点。运用Venny平台将疾病靶点与成分靶点取交集,得到丹参注射液治疗高脂血症的潜在治疗靶点。将得到的交集靶点导入STRING网络平台中构建蛋白质相互作用网络（PPI）,获得的结果导入Cytoscape 3.8.2,运用Cyto Hubba插件筛选核心基因（hub gene）,采用最大集团中心性（MCC）的拓扑算法进行可视化分析,以确定丹参注射液的核心降脂靶点。运用DAVID平台进行基因本体论（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析,并通过基迪奥生物信息云平台（Omic Share）对结果可视化。3.根据网络药理学结果进行实验验证,以上述实验动物血清及肝脏作为研究对象。应用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清中HMG-Co A、LCAT、LPL及肝组织中HL、CYP7A1、PPARγ含量。采用Western Blot（WB）法检测小鼠肝组织中PPARγ、LXRα、ABCA1、CYP7A1蛋白表达情况。结果:1.丹参注射液对高脂血症模型小鼠的降脂作用研究:与空白组比较,模型组小鼠血清中TG、CHO、LDL-C与肝组织中MDA含量显著升高（P＜0.05或P＜0.01）,肝组织中的SOD、GSH-Px含量显著降低（P＜0.05）;与模型组比较,各给药组CHO、LDL-C含量均显著降低,非诺贝特组TG含量显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。非诺贝特组和丹参注射液低剂量组SOD、GSH-Px含量显著升高（P＜0.05）,MDA含量显著降低（P＜0.05）。肝组织病理学结果表明,各给药组具有改善肝组织脂质积聚的作用。2.丹参注射液治疗高脂血症的网络药理学研究:丹参注射液治疗高脂血症的潜在靶点有108个,其中RXRα、PPARγ、RXRγ、RARα、TNF等10个靶蛋白可能为治疗疾病的关键靶点。经GO、KEGG分析,其降脂机制可能与糖脂代谢、炎症反应等信号通路有关。3.丹参注射液对高脂血症模型小鼠脂降脂机制的研究:与空白组相比,模型组小鼠血清中HMG-Co A含量显著升高（P＜0.05）,CAT、LPL及肝组织中PPARγ、HL、CYP7A1含量均显著降低,肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1、CYP7A1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05或P＜0.01）;与模型组相比,非诺贝特组LCAT、LPL、PPARγ、HL、CYP7A1含量显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。丹参注射液组能够显著升高CYP7A1、LCAT及PPARγ含量,且高剂量组可以显著降低HMG-Co A含量（P＜0.05）。各给药组PPARγ、CYP7A1蛋白表达显著增加,丹参注射液高剂量组LXRα、ABCA1蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。WB结果提示,丹参注射液可以上调PPARγ、LXRα、ABCA1、CYP7A1的蛋白表达水平（P＜0.05）。结论:1.丹参注射液能够有效改善高脂乳剂诱导的高脂血症模型小鼠血脂水平,降低氧化应激水平,改善肝细胞损伤。2.网络药理学研究表明,丹参注射液通过多组分、多靶点、多途径发挥降脂作用,其机制可能与糖脂代谢、炎症反应等信号通路有关。3.丹参注射液可能通过激活PPARγ-LXRα-CYP7A1/ABCA1信号通路,减少胆固醇的合成,促进胆固醇的转运、代谢,发挥降脂作用。

关键词：丹参注射液高脂血症网络药理学胆固醇代谢 PPARγ信号通路

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哺乳动物精浆胞外囊泡及各组分的功能

中国生物化学与分子生物学报 2018年第2期34卷 162-169页

作者：王语晴高丰鑫张小宁南昌大学生命科学研究院南昌330031 南昌大学玛丽女王学院南昌330031 江西省生殖生理与病理重点实验室南昌330031

精浆胞外囊泡是一种存在于精浆的膜性囊泡,按分泌器官分为附睾小体和前列腺小体。囊泡可与精子细胞膜发生融合,通过传递内容物或介导信号通路进而调节精子功能。它含有多种活性物质,其中蛋白质组分可影响精子活力以及顶体反应,并有清除... 详细信息

精浆胞外囊泡是一种存在于精浆的膜性囊泡,按分泌器官分为附睾小体和前列腺小体。囊泡可与精子细胞膜发生融合,通过传递内容物或介导信号通路进而调节精子功能。它含有多种活性物质,其中蛋白质组分可影响精子活力以及顶体反应,并有清除损伤精子和促进细胞粘附的作用;脂质组分具有调节靶细胞质膜稳定性的作用;核酸组分主要参与免疫反应、跨代遗传及男性不育;离子则是多种酶的辅助因子,在调节酶活性和精浆微环境中发挥重要作用。不同组分对精子功能的影响不尽相同,本文将对此方面的研究进展进行详尽的综述,以期为该领域相关研究人员提供一定的参考。

关键词：精浆胞外囊泡附睾小体前列腺小体胞外囊泡内含物精子功能

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企业并购存在的金融风险及防范措施

河北金融 2013年第10期 14-16,19页

作者：王语晴东北财经大学萨里国际学院辽宁大连116000

兼并和收购(并购)是一种重要的资本运作模式。然而,并购案例的成功率很低。企业并购的筹备阶段、运营阶段或整合阶段,都伴随着各种金融风险。本文根据并购交易的过程将并购中产生的风险归为以下三类:估值风险、融资风险和支付风险,通过... 详细信息

兼并和收购(并购)是一种重要的资本运作模式。然而,并购案例的成功率很低。企业并购的筹备阶段、运营阶段或整合阶段,都伴随着各种金融风险。本文根据并购交易的过程将并购中产生的风险归为以下三类:估值风险、融资风险和支付风险,通过分析并购过程中不同金融风险产生的原因,为收购企业找到一些风险控制措施,以避免金融风险的产生。

关键词：兼并和收购金融风险控制措施

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乒乓发球机器人,我的专属智能乒乓球陪练

科学大众（小诺贝尔） 2019年第7期 62-65页

作者：王语晴江苏省南京市凤凰花园城小学二(7)班

一、设计缘由乒乓球是一项很有意思的运动,它不需要多大的场地,只要有个简易的球桌,大家就能玩得很开心。我家有一张的迷你乒乓球桌,平时只要天气好,一有时间,我就会将其搬到小区广场上和爸爸或者同学们玩乒乓球。不过,有时大人和同学... 详细信息

一、设计缘由乒乓球是一项很有意思的运动,它不需要多大的场地,只要有个简易的球桌,大家就能玩得很开心。我家有一张的迷你乒乓球桌,平时只要天气好,一有时间,我就会将其搬到小区广场上和爸爸或者同学们玩乒乓球。不过,有时大人和同学们都忙,我一个人就没法玩了。偶然的机会,我看到了乒乓球发球机这类的产品。这类产品可以将大量的乒乓球按照不同方向角度,连续不断地发射出来,感觉挺有意思的,可以用来陪同练习兵兵球。但是,乒乓发球机通常要数千元,最便宜、简陋的也要接近千元。

关键词：发射系统偏航系统灰度传感器电机转速

对货物贸易外汇管理制度改革效果的分析与思考

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河北金融 2013年第11期 56-57页

作者：牛珊珊王语晴河北经贸大学河北石家庄050000 东北财经大学萨里国际学院辽宁大连116001

货物贸易外汇管理制度改革于2012年8月在全国推广落实,新政策实施以来总体上取得了较好的效果,大幅促进了贸易便利化,同时提高了外汇局监管效率,本文对改革一年来的社会效益和管理效益进行了综合分析,并在此基础上分析了目前货物贸易外... 详细信息

货物贸易外汇管理制度改革于2012年8月在全国推广落实,新政策实施以来总体上取得了较好的效果,大幅促进了贸易便利化,同时提高了外汇局监管效率,本文对改革一年来的社会效益和管理效益进行了综合分析,并在此基础上分析了目前货物贸易外汇管理存在的问题,并提出相关政策建议。

关键词：货物贸易外汇管理改革

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甲状腺功能异常与高尿酸血症的关系

山西医药杂志 2016年第1期45卷 73-75页

作者：吴立王语晴太原市人民医院内分泌科 030001 南昌大学临床医学系

近年来,随着人们生活水平的不断提高,糖尿病、高血压病、冠心病的发病率不断上升,甲状腺疾病的发病率也有所增长。这些疾病给患者带来严重危害。有研究显示,高血压、糖尿病、冠心病患者的尿酸浓度水平高于健康人,但对于甲状腺疾病患者... 详细信息

近年来,随着人们生活水平的不断提高,糖尿病、高血压病、冠心病的发病率不断上升,甲状腺疾病的发病率也有所增长。这些疾病给患者带来严重危害。有研究显示,高血压、糖尿病、冠心病患者的尿酸浓度水平高于健康人,但对于甲状腺疾病患者的尿酸浓度水平的研究较少,本文旨在探讨分析甲状腺疾病与尿酸的关系,具体报告如下。

关键词：甲状腺疾病高尿酸血症尿酸浓度碘摄入量升高组尿酸排泄嘌呤代谢尿酸盐纤维变性诊断标准

自噬调控阿尔茨海默病作用机制及中医药从“痰”论治研究进展

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辽宁中医药大学学报 2024年第3期26卷 32-37页

作者：王语晴刘欣欣姜玲王杨侯志涛宋晓晨胡新颖陈晶黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨150040

脑内蛋白质的合成与降解处于动态平衡之中。自噬-溶酶体途径(autophagy-lysosome pathway,ALP)是细胞内主要的降解途径,能够通过及时降解错误折叠、聚集和损伤的蛋白质来维持细胞稳态。ALP降解功能的异常可导致机体内β-淀粉样蛋白(amyl... 详细信息

脑内蛋白质的合成与降解处于动态平衡之中。自噬-溶酶体途径(autophagy-lysosome pathway,ALP)是细胞内主要的降解途径,能够通过及时降解错误折叠、聚集和损伤的蛋白质来维持细胞稳态。ALP降解功能的异常可导致机体内β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)和磷酸化Tau蛋白的沉积,出现记忆、学习等多认知域的损伤,这种病理改变与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发病机制密切相关。中医学认为“肾精亏虚,痰浊蒙窍”是AD发生的核心病机,“痰浊”是疾病发生、发展的病理基础。现代医学研究发现“痰浊”与Aβ的生成与清除失衡以及Tau蛋白过度磷酸化有关,“化痰开窍”与降解异常蛋白聚集有着不谋而合之处。文章梳理近年国内外文献,对自噬与AD特征性神经病理改变的相互作用、自噬相关信号通路对AD的调控机制以及中医从“痰浊”论治的相关性研究作以综述,旨在从调控自噬的角度为临床改善AD提供新的研究方向和治疗靶点。

关键词：阿尔茨海默病自噬 Tau蛋白 β-淀粉样蛋白研究进展

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