甜味蛋白monellin高甜度、强热稳定性突变体的分子构建及性质研究

作     者：刘毅 卢尚阳 王语晴 刘波 Liu Yi;Lu Shangyang;Wang Yuqing;Liu Bo

作者机构：齐鲁工业大学(山东省科学院)食品科学与工程学院济南250353 

出 版 物：《中国食品学报》 (Journal of Chinese Institute Of Food Science and Technology)

年 卷 期：2024年第24卷第8期

页      面：53-61页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31970935) 山东省自然科学基金项目(ZR2020KC035) 

主　　题：甜味蛋白 monellin 二级结构 基因突变 甜味阈值 热稳定性 

摘      要：本文采用PCR技术对单链monellin(MNEI)进行定向突变,将构建好的重组质粒pET15b-MNEI双位点突变体转化到大肠杆菌BL21-codonPlus(DE3)-RIL中进行异源蛋白质的重组表达。通过镍柱亲和层析和分子筛收集纯化后的目的蛋白,使用蒸馏水在截留分子质量为3.5 ku的透析袋中进行蛋白透析,将透析得到的目的蛋白采用双盲法感官品评测定甜味阈值,蛋白突变体的二级结构和热稳定性采用圆二色谱仪测定。结果表明:成功构建了该蛋白3个双位点突变体E2M/E50N、E2Q/E50N及E2A/E50N,其中突变体E2Q/E50N成功表达与纯化。与野生型MNEI对照相比,测得的突变体E2Q/E50N的甜味阈值为0.64μg/mL,甜度提升近1倍;Tm值为78℃,热稳定性提高4℃。以上研究结果可为甜味蛋白monellin在食品、饮料和医药行业的生产与应用提供技术参考。