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酸环境对人髓核间充质干细胞生物学活性的影响

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酸环境对人髓核间充质干细胞生物学活性的影响

作者：王汉邦安徽医科大学

学位级别：硕士

目的观察不同程度酸性条件对成人髓核间充质干细胞(NPMSCs)生物学活性的作用,发掘椎间盘的可能退变机制。方法筛选6例脊柱侧凸需矫形手术患者,留取手术过程中摘除的6个PfirrmannⅠ级或Ⅱ级腰椎椎间盘,用胶原酶消化髓核组织,分离细胞,体... 详细信息

目的观察不同程度酸性条件对成人髓核间充质干细胞(NPMSCs)生物学活性的作用,发掘椎间盘的可能退变机制。方法筛选6例脊柱侧凸需矫形手术患者,留取手术过程中摘除的6个PfirrmannⅠ级或Ⅱ级腰椎椎间盘,用胶原酶消化髓核组织,分离细胞,体外培养,观察细胞形态。选择培养的P2代细胞,运用流式细胞仪检测间充质干细胞等表面抗原标志物;使用分化诱导培养液诱导成骨、成软骨、成脂细胞,2周后分别染色液对诱导的细胞染色,观察细胞三系分化能力。参照国际干细胞治疗协会(ISCT)给出的间充质干细胞(MSCs)的判定准则,综合鉴定分离的细胞。使用不同pH值的培养基培养P2代细胞后,用CCK-8法检测不同培养时间的细胞增殖能力,用流式细胞仪检测不同pH培养基作用的细胞凋亡率,使用实时荧光定量(RT-PCR)检测P2代细胞“干性”基因及酸离子通道家族蛋白基因表达情况。结果分离的P0代细胞均贴培养瓶底壁生长。分离培养P2代细胞表面抗原检测示高表达CD90、CD105、CD73,三者表达比例分别达96%、95%、94%以上,却低表达CD45、CD34、HLA-DR(均低于4%)。通过使用特殊染色剂染色结果表明实验中分离得到的细胞均可向骨、脂肪及软骨细胞方向分化。参照ISCT制定MSCs的判定准则,认为这种细胞是NPMSCs。CCK-8检测结果示分离得到的细胞在不同pH培养液培养后1、3天不同组细胞吸光度差异无统计学意义(P>0.05);5天后各组细胞吸光度差异有统计学意义(P<0.05),且吸光度随pH值降低而减小。凋亡率比较结果示pH值7.4组的细胞凋亡率最小,各组有统计学差异(P<0.05)。RT-PCR检测示pH7.4组“干性”基因及酸离子通道蛋白基因最高,高于其余各组(P<0.05),基因表达量随着培养液pH值减小而降低。结论不同层次的pH酸环境条件下培养成人NPMSCs3天增殖能力未见显著变化,作用5天后可以看出低pH环境明显抑制NPMSCs的增殖能力以及基因表达,加快细胞凋亡,而且这种作用随着pH降低越明显。

关键词：椎间盘退变髓核间充质干细胞酸环境生物学活性

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中国脊柱脊髓杂志 2015年第10期25卷 912-919页

作者：王汉邦陶晖申才良李海太安徽医科大学第一附属医院脊柱外科合肥市230032

目的:观察酸环境对体外培养的成人髓核间充质干细胞(NPMSCs)生物学特征的影响,探讨椎间盘退变的可能机制。方法:用胶原酶消化法从6例脊柱侧凸矫形患者手术摘除的6个腰椎间盘(Pfirrmann椎间盘退变分级为Ⅰ级或Ⅱ级)髓核组织中分离细胞,... 详细信息

目的:观察酸环境对体外培养的成人髓核间充质干细胞(NPMSCs)生物学特征的影响,探讨椎间盘退变的可能机制。方法:用胶原酶消化法从6例脊柱侧凸矫形患者手术摘除的6个腰椎间盘(Pfirrmann椎间盘退变分级为Ⅰ级或Ⅱ级)髓核组织中分离细胞,体外培养,传代并观察细胞形态。取P2代细胞,利用流式细胞仪对分离得到的细胞表型CD34、CD45、CD73、CD90、CD105和人类白细胞抗原(HLA)-DR表达情况进行检测;用成骨、成软骨、成脂培养液诱导培养细胞,2周后分别用茜素红、甲苯胺蓝、油红O对细胞进行染色,观察其成脂、成骨、成软骨能力。按照国际干细胞治疗协会(ISCT)有关间充质干细胞(MSCs)的判定标准,对分离得到的细胞进行综合评估鉴定。在37℃、21%O2、5%CO2的细胞培养箱中用不同p H值(6.2、6.5、6.8、7.1、7.4)的DMEM10%血清培养液培养P2代细胞,1、3、5、7、9、11、13d后利用细胞增殖试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖活力(OD值),培养3d时借助流式细胞仪检测细胞凋亡率,不同p H值培养基培养28d时采用实时荧光定量(RT-PCR)检测P2代细胞"干性维持"基因Oct4、Nanog、Jag1、Notch1及酸离子通道家族蛋白基因ASIC1、ASIC2、ASIC3、ASIC4的m RNA表达情况。结果:P0代细胞均贴壁生长。P2代细胞免疫表型鉴定显示MSCs表面分子标记CD90、CD105、CD73表达比例分别高达96%、95%、94%以上,低表达CD45、CD34、HLA-DR(均低于4%)。茜素红染色、油红O染色及甲苯胺蓝染色分别证实分离的细胞均可向骨、脂肪及软骨细胞三系诱导分化。按照ISCT有关MSCs的判定标准,分离得到的细胞即NPMSCs。细胞代谢活性测定示P2代细胞在培养后1、3d各组间细胞OD值差异无统计学意义(P>0.05);5d、7d、9d、11d、13d各组间细胞OD值差异有统计学意义(P<0.05),且p H值越低细胞的OD值越小。p H值7.4组的细胞凋亡率均小于其余各组,各组间有统计学差异(P<0.05)。p H值7.4组"干性维持"基因Oct4、Nanog、Jag1、Notch1及酸离子通道家族蛋白基因ASIC1、ASIC2、ASIC3、ASIC4的m RNA均明显高于p H值7.1、6.8、6.5、6.2组(P<0.05)。随着培养液p H值降低,细胞的凋亡率升高,细胞干性维持基因及酸通道家族蛋白基因的m RNA表达降低。结论:低p H值的酸环境培养1、3d对成人NPMSCs增殖无明显影响,培养5d后明显抑制NPMSCs的增殖和基因表达,促进细胞凋亡,且随着p H降低作用越明显。

关键词：椎间盘退变髓核间充质干细胞酸环境生物学活性

BMP-4对大鼠骨髓间充质干细胞与神经干细胞共培养转归影响的实验研究

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安徽医科大学学报 2016年第2期51卷 205-209页

作者：李海太申才良宋旆文刘晓颖杨昆杜宁王汉邦安徽医科大学第一附属医院脊柱外科合肥230022 安徽医科大学生物科学学院生物学系合肥230032

目的探讨骨形态发生蛋白-4(BMP-4)对经过骨髓间充质干细胞(BMSCs)共同培养后的大鼠神经干细胞(NSCs)的存活和分化的影响。方法建立BMSCs与NSCs共培养模型,在共同培养体系中加入BMP-4,采用流式细胞仪检测NSCs的存活率,同时利用细胞免疫... 详细信息

目的探讨骨形态发生蛋白-4(BMP-4)对经过骨髓间充质干细胞(BMSCs)共同培养后的大鼠神经干细胞(NSCs)的存活和分化的影响。方法建立BMSCs与NSCs共培养模型,在共同培养体系中加入BMP-4,采用流式细胞仪检测NSCs的存活率,同时利用细胞免疫荧光和Western blot法鉴定NSCs的分化情况,通过比较NSCs的存活率和分化率,进而分析BMP-4对共培养后NSCs的存活及分化的影响。结果共培养体系加入BMP-4后,大鼠NSCs的细胞存活率低于对照组(P<0.05),BMP-4促进了NSCs向星形胶质细胞分化而阻碍其向少突胶质细胞分化,而分化后的神经星形胶质细胞的特异性表达蛋白神经胶质细胞酸性纤维蛋白(GFAP)的表达率高于对照组(P<0.05),少突胶质细胞特异性蛋白髓鞘碱性蛋白(MBP)表达率低于对照组(P<0.05)。结论 BMP-4阻碍了MSCs促进NSCs有效分化的效应。

关键词：共培养骨形态发生蛋白骨髓间充质干细胞分化神经干细胞存活

脊柱内镜下经椎板间隙扩大入路治疗腰椎间盘突出症

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中国微创外科杂志 2021年第5期21卷 410-414页

作者：范海涛曹乐朱亚坤王汉邦郭子明孙凯安徽医科大学附属阜阳医院骨科阜阳230000

目的探讨脊柱内镜下经椎板间隙扩大入路治疗腰椎间盘突出症的临床效果。方法2017年7月~2019年6月我科采用脊柱内镜下经椎板间隙扩大入路手术治疗75例腰椎间盘突出症,取俯卧位,通道置入黄韧带及骨性椎板外缘,根据需要减压的部位向外上或... 详细信息

目的探讨脊柱内镜下经椎板间隙扩大入路治疗腰椎间盘突出症的临床效果。方法2017年7月~2019年6月我科采用脊柱内镜下经椎板间隙扩大入路手术治疗75例腰椎间盘突出症,取俯卧位,通道置入黄韧带及骨性椎板外缘,根据需要减压的部位向外上或者外下适度切除椎板扩大骨性椎管,切除部分黄韧带,推进舌瓣通道至靶部位,完成减压。比较术前后腰、腿痛视觉模拟评分(Visual Analogue Scale,VAS)和Oswestry功能障碍指数(Oswestry Disability Index,ODI),术后6个月改良MacNab标准评价手术效果。结果75例均顺利完成手术,平均手术时间48 min(20~75 min),切口均一期愈合。术后各随访时间点下肢疼痛VAS评分均有显著性差异(P<0.01)。术前、后腰痛VAS评分差异有显著性(P<0.01),术后ODI改善明显(P<0.01)。术后6个月改良MacNab标准:优65例,良9例,可1例,优良率98.7%(74/75)。结论脊柱内镜下经椎板间隙扩大入路治疗腰椎间盘突出症不破坏脊柱单元的稳定性,更加符合外科医生的视觉及操作习惯,可获得良好的临床效果。

关键词：椎间盘突出症椎板间入路椎间孔镜

髓内固定与股骨头置换治疗合并冠状位骨折的老年股骨转子间骨折的临床比较

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中国骨与关节杂志 2023年第12期12卷 929-936页

作者：仇汪宝史保庆王汉邦梁伟安徽医科大学附属阜阳医院创伤中心阜阳236000

目的比较髓内固定和股骨头置换治疗合并冠状位骨折的老年股骨转子间骨折的临床效果。方法回顾分析我院2017年7月至2022年2月收治的符合研究标准的50例患者的临床资料,根据不同手术方式分为髓内固定组(n=27)和股骨头置换组(n=23),髓内固... 详细信息

目的比较髓内固定和股骨头置换治疗合并冠状位骨折的老年股骨转子间骨折的临床效果。方法回顾分析我院2017年7月至2022年2月收治的符合研究标准的50例患者的临床资料,根据不同手术方式分为髓内固定组(n=27)和股骨头置换组(n=23),髓内固定组采用股骨近端髓内钉(proximal femoral nail,PFN)/防旋股骨近端髓内钉(proximal femoral nail antirotation,PFNA)/联合加压交锁髓内钉系统(TriGen InterTAN hip fracture nailing system,InterTAN)内固定,股骨头置换组采用骨水泥型人工股骨头置换术;两组病例在年龄、性别、体质量指数(body mass index,BMI)、术前视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)、住院至手术时间、术前血红蛋白及血清白蛋白等一般资料比较差异无统计学意义,资料具有可比性;统计两组病例的手术操作时间、术中失血量、住院时间、VAS评分、术后血红蛋白水平及血清白蛋白水平、术前与术后血红蛋白及血清白蛋白变化值,以及术后1个月、3个月、6个月Harris评分,并发症等进行比较。所有患者随访时间6~24个月。结果两组病例在手术操作时间、术后血红蛋白水平及血清白蛋白水平、术前与术后血红蛋白及血清白蛋白变化值、住院时间等方面比较差异无统计学意义(P>0.05);两组术中失血量比较,髓内固定组(250.90±70.11)ml,股骨头置换组(314.80±61.49)ml,差异有统计学意义(P=0.001);两组病例术后VAS评分差异无统计学意义,但组内比较VAS评分,髓内固定组术前(7.10±1.10),术后(4.90±0.97),差异有统计学意义(P=0.000);股骨头置换组术前(7.20±1.06),术后(4.40±0.97),差异有统计学意义(P=0.000),两种手术均能有效缓解疼痛;两组病例术后Harris评分在术后1个月比较,髓内固定组(37.40±5.17),股骨头置换组(46.10±7.38),差异有统计学意义(P=0.000);术后3个月比较,髓内固定组(57.10±8.17),股骨头置换组(64.70±6.13),差异有统计学意义(P=0.000),股骨头置换功能改善优于髓内固定,术后6个月两组之间差异无统计学意义;但两种手术方式均能明显改善患者功能。两组手术术后并发症发生率比较,髓内固定组共4例(14.8%),股骨头置换组共3例(13%),差异无统计学意义(χ2=0.029,P=0.857)。结论合并存在冠状位骨折的转子间骨折行PFN/PFNA/InterTAN髓内固定和股骨头置换均能获得良好效果;冠状位骨折的存在可增加手术难度;股骨头置换早期功能恢复优于髓内固定,但随着时间的推移,髓内固定亦能获得较好的功能。

关键词：股骨骨折骨折固定术髓内内固定器关节成形术置换髋

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鸭瘟病毒河南株gI基因的克隆与测序

广东农业科学 2012年第3期39卷 139-140,153页

作者：王岩杨明凡崔保安阴晓霞邓永欢闫艺克王汉邦郑州牧业工程高等专科学校动物医学系河南郑州450011 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

参考GenBank中鸭瘟病毒gI基因序列设计并合成引物,以鸭瘟病毒河南分离株DNA为模板进行PCR扩增,将扩增片段克隆至PGEM-T载体上,得到含gI基因重组质粒。经酶切鉴定,并对重组阳性质粒进行序列测定。结果表明,获得的片段含鸭瘟病毒gI基因,全... 详细信息

参考GenBank中鸭瘟病毒gI基因序列设计并合成引物,以鸭瘟病毒河南分离株DNA为模板进行PCR扩增,将扩增片段克隆至PGEM-T载体上,得到含gI基因重组质粒。经酶切鉴定,并对重组阳性质粒进行序列测定。结果表明,获得的片段含鸭瘟病毒gI基因,全长1 089 bp,与已报道的其他疱疹病毒gI基因具有较高的同源性,编码432个氨基酸,蛋白分子质量为39.7ku、等电点(PI)为6.06。

关键词：鸭瘟病毒 gI基因克隆测序

甲型血友病性关节炎患者多关节置换术的安全性评估及临床效果观察

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中国骨与关节杂志 2023年第10期12卷 728-731页

作者：仇汪宝史保庆王汉邦梁伟安徽医科大学附属阜阳医院阜阳236000

目的报告3例行多关节置换术的A型血友病性关节炎患者。方法2017年7月至2018年10月,我院经治3例甲型血友病性关节炎行多关节置换术患者。对手术前后血红蛋白含量的测定、KSS评分、Harris评分及术后并发症等方面进行数据统计以及进行相关... 详细信息

目的报告3例行多关节置换术的A型血友病性关节炎患者。方法2017年7月至2018年10月,我院经治3例甲型血友病性关节炎行多关节置换术患者。对手术前后血红蛋白含量的测定、KSS评分、Harris评分及术后并发症等方面进行数据统计以及进行相关影像学比较。结果1例行双膝关节置换术,2例行双膝关节置换术+单侧全髋关节置换术。患者血红蛋白含量术后1周内趋于持续降低趋势,术后1周开始逐渐恢复;KSS评分由术前(28.12±3.54)分提高至末次随访(73.5±5.54)分,Harris评分由术前(35.0±2.83)分提高至末次随访(84.0±1.41)分;1例单侧膝关节术后出现关节腔出血,未出现感染、血肿、假体松动等并发症。结论甲型血友病性关节炎患者在进行有效凝血因子替代治疗控制出血后行多关节置换术具有可靠的安全性及良好的临床效果。

关键词：血友病A 关节炎关节成形术,置换手术后并发症膝关节髋关节

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浅谈我县农发行如何支持农业产业化发展

农业发展与金融 1997年第12期 24-24页

作者：王汉邦农发行宁波市象山县支行

我县位于宁波市南端,是一个三面环海半岛,海域面积宽,海岸线长,有着较丰富的海洋资源,丘陵面积占陆地面积39.4%,耕地面积24万亩,人口52.8万,粮食能自给。从八十年代对外开放以来,经过十几年的发展,农村产业结构发生根本的变化,乡镇工业... 详细信息

我县位于宁波市南端,是一个三面环海半岛,海域面积宽,海岸线长,有着较丰富的海洋资源,丘陵面积占陆地面积39.4%,耕地面积24万亩,人口52.8万,粮食能自给。从八十年代对外开放以来,经过十几年的发展,农村产业结构发生根本的变化,乡镇工业成为经济的主体,人均国民生产总值已超过了1万元。农业产业化的概念虽是近年提出来的,但我县于八十年代后期就建立起一些种养加、产供销、贸工农一条龙生产体系,逐步形成了农业产业化的雏型。九十年代以市场为导向,以农业资源为依托,因地制宜调整农业产业结构,建起了一批"二高一优"

关键词：农业产业化发展农发行八十年代九十年代农村产业结构宁波市沿海开放地区海洋资源海岸线农业资源

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谈“艺术真实”在革命历史题材创作中的运用

美术 2024年第7期 42-45页

作者：王汉英中国美协国家重大题材美术创作艺委会中央美院国家主题性美术创作研究中心

本文分析了艺术真实在革命历史题材绘画中的重要性,阐述了其在绘画创作中的独立价值。结合革命主题历史画《告别瑞金》和《红军夜渡于都河》的创作体会,从历史真实与艺术真实、象征性表现手法与艺术真实、艺术真实与想象空间三个方面,... 详细信息

本文分析了艺术真实在革命历史题材绘画中的重要性,阐述了其在绘画创作中的独立价值。结合革命主题历史画《告别瑞金》和《红军夜渡于都河》的创作体会,从历史真实与艺术真实、象征性表现手法与艺术真实、艺术真实与想象空间三个方面,探讨艺术真实的表现手法在革命历史题材创作中的具体运用。

关键词：艺术真实历史真实革命历史画精神内涵象征性