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应用含标记基因K562细胞制备的小鼠白血病模型

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第19期14卷 3550-3553页

作者：王存邦白海葸瑞钱震张茜解放军兰州军区总医院全军血液病中心甘肃省兰州市730050

背景：文献报道应用NOD/SCID及SCID小鼠可以建立移植性人白血病小鼠模型,但由于小鼠存在免疫缺陷,使得在自体干细胞移植及移植后相关过继免疫治疗方面的研究受到限制和影响。目的：探索用SPF级Balb/c小鼠和转染GFP及NeoR基因的K562细胞... 详细信息

背景：文献报道应用NOD/SCID及SCID小鼠可以建立移植性人白血病小鼠模型,但由于小鼠存在免疫缺陷,使得在自体干细胞移植及移植后相关过继免疫治疗方面的研究受到限制和影响。目的：探索用SPF级Balb/c小鼠和转染GFP及NeoR基因的K562细胞株制备白血病模型的方法。方法：实验分为5组,A、B组和C、D组分别经X射线照射2Gy和3Gy,24h后取对数生长期的K562（GFP＋/Neo＋）细胞,A、C组尾静脉注射2×106个/只;B、D组尾静脉注射5×106个/只;E组为正常对照组。观察小鼠生存时间,进行骨髓细胞及外周血白细胞分类,采用流式细胞仪测定GFP阳性细胞及PCR方法测定Neo基因。结果与结论：实验各组在接种5~7d时发病,分别于30,23,24,17d内全部死亡;生存天均显著短于正常对照组（P〈0.01）。体质量均较正常对照组显著下降（P〈0.05）。小鼠的白血病发病率为100%,无自发缓解。随接种细胞数量的增加和照射剂量的增加,小鼠的存活时间缩短,且外周血及骨髓中白血病细胞所占比例增加。流式细胞仪测定及PCR方法也证实了GFP＋细胞和NeoR基因在肝、脾中的存在。结果证实Balb/c小鼠经照射后从尾静脉注射K562细胞株可以制备获得白血病小鼠模型。

关键词：绿色荧光蛋白基因 K562细胞新霉素磷酸转移酶基因白血病小鼠模型 Balb/c小鼠

骨髓间充质干细胞及其培养上清对外周血T淋巴细胞的免疫调节作用研究

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中国实用内科杂志 2007年第S1期27卷 142-143页

作者：白海司志刚王存邦薛智文路继红杨小亮吴涛王茜兰州军区兰州总医院全军血液病中心兰州730050

目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)及其培养上清体外对外周血 T 淋巴细胞的免疫调节作用。方法从骨髓中分离培养 MSC,反复贴壁以纯化 MSC,尼龙棉柱法纯化外周血中 T 淋巴细胞;观察MSC及其培养上清对 PHA 刺激下 T ... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)及其培养上清体外对外周血 T 淋巴细胞的免疫调节作用。方法从骨髓中分离培养 MSC,反复贴壁以纯化 MSC,尼龙棉柱法纯化外周血中 T 淋巴细胞;观察MSC及其培养上清对 PHA 刺激下 T 淋巴细胞增殖影响,酶联免疫吸附试验(ELASA)法检测不同培养条件下 IFN-γ。

关键词：培养上清骨髓间充质干细胞淋巴细胞增殖外周血免疫调节作用分离培养培养条件纯化酶联免疫吸附试验作用研究

骨髓间充质干细胞体外分离培养及其生物学特性的初步研究

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中国综合临床 2007年第8期23卷 705-707页

作者：吴涛白海王存邦路继红欧剑锋王茜兰州军区兰州总医院全军血液病中心兰州730050

目的建立成人骨髓间充质干细胞(MSCs)体外培养和扩增的方法,探讨其生物学特性,建立稳定的MSCs体外培养扩增体系。方法取正常成人骨髓5 ml,用Percoll分离液(密度1.073 g/ml)经密度梯度离心法分离得到单个核细胞,以2×10~5个细胞/cm^2的... 详细信息

目的建立成人骨髓间充质干细胞(MSCs)体外培养和扩增的方法,探讨其生物学特性,建立稳定的MSCs体外培养扩增体系。方法取正常成人骨髓5 ml,用Percoll分离液(密度1.073 g/ml)经密度梯度离心法分离得到单个核细胞,以2×10~5个细胞/cm^2的密度接种于含10%新生牛血清的LG-DMEM培养液。经培养、扩增后,应用倒置相差显微镜观察其形态,MTT法测定生长曲线,流式细胞仪行细胞表面抗原及细胞周期的检测,并在透射电镜下观察其超微结构。结果培养扩增获取的成人骨髓MSCs形态均一,为梭形或纺锤形的成纤维细胞样外观,生长曲线示其增殖能力强。流式细胞仪检测显示有90%以上的细胞处于G0/G1期,表面标记物中CD44表达阳性,而造血细胞表面标志CD3、CD4、CD7、CD13、CD14、CD15、CD19、CD22、CD33、CD34、CD45和与移植排斥发生密切相关的HLA-DR表达阴性。超微结构显示细胞内有丰富的粗面内质网,细胞器发达。结论所建立的分离和培养方法可获取骨髓粘附细胞中一组独特的细胞群,具有MSCs的生物学特性,可作为组织工程中的种子细胞。

关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养流式细胞术组织工程

人骨髓间充质干细胞对异体外周血T淋巴细胞的抑制作用及机制

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第四军医大学学报 2008年第17期29卷 1573-1575页

作者：白海司志刚王存邦薛智文吴涛杨小亮兰州军区兰州总医院血液科全军血液病中心甘肃兰州730050

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)体外对异体外周血T淋巴细胞的抑制作用及机制.方法:从骨髓中分离培养MSCs,反复贴壁进行纯化;用尼龙棉柱法纯化异体外周血T淋巴细胞;观察MSCs对植物血凝素(PHA)刺激下T淋巴细胞增殖的影响,用ELISA方法检... 详细信息

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)体外对异体外周血T淋巴细胞的抑制作用及机制.方法:从骨髓中分离培养MSCs,反复贴壁进行纯化;用尼龙棉柱法纯化异体外周血T淋巴细胞;观察MSCs对植物血凝素(PHA)刺激下T淋巴细胞增殖的影响,用ELISA方法检测IFN-γ,IL-4水平变化.结果:MSCs对PHA诱导的T淋巴细胞增殖有抑制作用,并呈剂量依赖性;同时MSCs亦可抑制T淋巴细胞的IFN-γ分泌,但可促进IL-4的分泌.结论:MSCs对异体外周血T淋巴细胞的增殖有抑制作用,其作用可能与其影响T淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-4有关.

关键词：骨髓间充质干细胞 T淋巴细胞免疫调节干扰素γ 白细胞介素4

序贯放化疗后自体外周血干细胞移植治疗鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤

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中国实验血液学杂志 2013年第6期21卷 1477-1481页

作者：王存邦白海葸瑞潘耀柱徐淑芬张茜陈燕周进茂兰州军区兰州总医院血液科全军血液病中心甘肃兰州730050

本研究探讨序贯放化疗后自体外周血干细胞移植治疗鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤的疗效。2000年1月至2009年12月在我院治疗的65例经病理形态学及免疫组织化学检查确诊的鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤患者,经交替应用CHOP方案、VDLP方案和MEOP方案各... 详细信息

本研究探讨序贯放化疗后自体外周血干细胞移植治疗鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤的疗效。2000年1月至2009年12月在我院治疗的65例经病理形态学及免疫组织化学检查确诊的鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤患者,经交替应用CHOP方案、VDLP方案和MEOP方案各2疗程化疗后,均应用直线加速器进行原发部位的三维适形放射治疗,随后分为临床观察组(34例)和移植组(31例);移植组患者经化疗联合重组人粒细胞集落刺激因子(rhGCSF)方法动员自体外周血干细胞,应用TBI联合VEMAC方案实施预处理后,进行自体外周血干细胞移植;随访观察时间为3-5年。结果表明:序贯放化疗的主要不良反应为骨髓抑制及轻度局部黏膜损伤,移植组全部患者均获得造血重建,移植后4-6 d中性粒细胞均降至0,中性粒细胞≥0.5×109/L的中位时间为14(11-17)d,白细胞≥4.0×108/L的中位时间为17(16-20)d,血小板≥50×108/L的中位时间为25(23-28)d,移植后16-21 d时骨髓呈恢复期骨髓象,无特殊并发症出现;放化疗结束时,观察组总有效率91.2%,移植组总有效率90.3%,两组比较无统计学意义(P>0.05);随访1年时,观察组总有效率76.5%,移植组总有效率96.8%,两组比较具有统计学意义(P<0.05);随访3年时,观察组无病存活率占全组患者的61.3%,移植组无病存活率占全组患者的87.1%,两组比较具有统计学意义(P<0.05);随访5年时,观察组无病存活患者占该组随访5年患者的43.5%,移植组无病存活患者占该组随访5年患者的81.5%,两组比较具有统计学意义(P<0.05)。结论:序贯放化疗后自体外周血干细胞移植治疗鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤可取得满意疗效。

关键词： NK T细胞淋巴瘤序贯放化疗自体外周血干细胞移植

金属材料热处理变形的影响因素和控制策略浅述

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中文科技期刊数据库（全文版）工程技术 2021年第10期 122-123,126页

作者：王存邦华东冶金地质勘查局超硬材料研究所安徽马鞍山243000

在金属材料的加工和热处理过程中,容易产生变形问题,导致材料的浪费和质量问题,而原有的材料处理方式,已经不能适应于现代建筑和工业发展的要求,在热处理过程中导致材料性质的变化,都会影响其质量。要对影响热处理因素以及变形原因,进... 详细信息

在金属材料的加工和热处理过程中,容易产生变形问题,导致材料的浪费和质量问题,而原有的材料处理方式,已经不能适应于现代建筑和工业发展的要求,在热处理过程中导致材料性质的变化,都会影响其质量。要对影响热处理因素以及变形原因,进行详细分析和研究,改进工艺和操作方法,同时采取预防和控制措施,减少变形问题的产生,从而提高金属材料的质量,本文将分析金属材料热处理变形的影响因素以及控制措施和原则。

关键词：金属材料热处理变形因素控制措施研究

自体外周血造血干细胞移植后过继免疫治疗B细胞性恶性淋巴瘤的临床疗效分析

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中国实验血液学杂志 2016年第6期24卷 1748-1753页

作者：王存邦潘耀柱葸瑞徐淑芬张茜陈燕周进茂吴涛白海兰州军区兰州总医院血液科全军血液病中心甘肃兰州730050

目的:探讨自体外周血造血干细胞移植(auto-PBHSCT)后过继免疫治疗B细胞性恶性淋巴瘤(ML)的临床疗效。方法:以2000年1月至2009年12月在auto-PBHSCT后给予过继免疫治疗的110例ML患者为过继免疫治疗组(简称治疗组),以1995年1月至1999年12月... 详细信息

目的:探讨自体外周血造血干细胞移植(auto-PBHSCT)后过继免疫治疗B细胞性恶性淋巴瘤(ML)的临床疗效。方法:以2000年1月至2009年12月在auto-PBHSCT后给予过继免疫治疗的110例ML患者为过继免疫治疗组(简称治疗组),以1995年1月至1999年12月在auto-PBHSCT后未予以过继免疫治疗的74例ML患者为对照组,分析比较2组间的疗效。治疗组110例ML患者中霍奇金淋巴瘤(HL)32例,非霍奇金淋巴瘤(NHL)78例。对照组74例ML患者中HL 22例,NHL 52例。所有患者序贯化疗6个疗程后进行auto-PBHSCT。造血恢复后过继免疫治疗组每月给予重组人白细胞介素2 100万U/日×10 d为1疗程的过继免疫治疗,共6个疗程。对照组未给予过继免疫治疗。随访时间以5年为限。结果:两组中各有1例患者在移植后3月、2月时因肝功衰竭和脑出血死亡,其他患者均获得造血重建。疗效比较显示,过继免疫治疗组1、3、5年的无病生存率(DFS)为97.3%、93.6%、87.3%,对照组为91.9%、73.0%、64.9%。3、5年的DFS两组间有统计学差异(P<0.01)。过继免疫治疗组Ⅰ/Ⅱ期与Ⅲ/Ⅳ期患者1、3、5年的DFS为100%、100%、91.7%和96.5%、91.9%、86.0%,而对照组为100%、93.3%、86.7%和89.8%、67.8%、59.3%。两组间Ⅲ/Ⅳ期患者3、5年的DFS有统计学差异(P<0.01)。HL患者疗效比较显示,两组中HL患者1、3、5年的DFS分别为100%、93.8%、84.4%和100%、72.7%、59.1%,3、5年的DFS统计学差异显著(P<0.05)。两组Ⅰ/Ⅱ期HL患者1、3、5年的DFS为100%、100%、88.9%和100%、100%、80.0%,Ⅲ/Ⅳ期HL患者1、3、5年的DFS分别为100%、91.3%、82.6%和94.1%%、64.7%、52.9%,Ⅲ/Ⅳ期HL患者3、5年的DFS有统计学差异(P<0.05)。NHL患者疗效比较显示,两组中NHL患者1、3、5年的DFS分别为96.2%、93.6%、88.5%和90.4%、73.1%、65.4%,3、5的DFS有统计学差异(P<0.01)。两组Ⅰ/Ⅱ期NHL患者1、3、5年的DFS分别为100%、100%、93.3%和100%、90.0%、90.0%,Ⅲ/Ⅳ期NHL患者1、3、5年的DFS分别为95.2%、92.1%、87.3%和88.1%、69.0%、59.5%,Ⅲ/Ⅳ期NHL患者3、5年的DFS有统计学差异(P<0.05)。结论:自体外周血造血干细胞移植后过继免疫治疗B细胞性恶性淋巴瘤疗效令人满意,尤其Ⅲ、Ⅳ期患者获益明显。

关键词：淋巴瘤 B细胞性恶性淋巴瘤自体外周血造血干细胞移植过继免疫治疗

细胞因子对小鼠造血干细胞基因转移效率影响的实验研究

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中华血液学杂志 1998年第6期19卷 321-322页

作者：王存邦达万明钱其军冀孟菊魏亚明兰州军区总医院血液科上海东方肝胆外科医院

细胞因子对小鼠造血干细胞基因转移效率影响的实验研究王存邦达万明钱其军冀孟菊魏亚明我们观察了造血干细胞因子（ＳＣＦ）、白细胞介素（ＩＬ）３、ＩＬ６不同组合方式对小鼠造血干细胞基因转移效率的影响，以期发现能有效地提高... 详细信息

细胞因子对小鼠造血干细胞基因转移效率影响的实验研究王存邦达万明钱其军冀孟菊魏亚明我们观察了造血干细胞因子（ＳＣＦ）、白细胞介素（ＩＬ）３、ＩＬ６不同组合方式对小鼠造血干细胞基因转移效率的影响，以期发现能有效地提高基因转移效率的细胞因子或其组合。材...

关键词：细胞因子造血干细胞基因转移效率

骨髓间充质干细胞分泌基质细胞衍生因子1对异体T淋巴细胞和白血病细胞HL-60增殖的影响

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第51期12卷 10059-10062页

作者：林梅白海王存邦杨小亮赵强兰州大学临床医学院甘肃省兰州市730000

背景:骨髓间充质干细胞持续分泌的基质细胞衍生因子1与其受体CXCR4的相互作用,不仅在细胞的炎症反应、造血干细胞的迁移与归巢等生物学过程中发挥作用,还在肿瘤的发生、转移、复发、免疫耐受及血管新生过程中扮演重要角色。目的:探讨骨... 详细信息

背景:骨髓间充质干细胞持续分泌的基质细胞衍生因子1与其受体CXCR4的相互作用,不仅在细胞的炎症反应、造血干细胞的迁移与归巢等生物学过程中发挥作用,还在肿瘤的发生、转移、复发、免疫耐受及血管新生过程中扮演重要角色。目的:探讨骨髓间充质干细胞分泌的基质细胞衍生因子1对T淋巴细胞及白血病细胞HL-60增殖的影响。设计:细胞学体外对照观察。材料:骨髓标本来自本院血液科异基因骨髓移植供者及骨髓象正常的非白血病患者,T淋巴细胞来源于健康志愿者,急性髓性白血病细胞株HL-60为本实验室液氮冷冻保存,CXCR4单克隆抗体12G5为eBioscience公司产品。方法:应用Ficoll密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞,传至第3代后收集培养5d的细胞上清,离心去沉淀后备用。应用尼龙棉柱法分离异体外周血T淋巴细胞,调整细胞密度为2×109L-1备用。T淋巴细胞与骨髓间充质干细胞的共培养实验设立3组:T淋巴细胞组、T淋巴细胞+细胞上清组、T淋巴细胞+细胞上清+单抗组。HL-60细胞与骨髓间充质干细胞的共培养实验设立3组:HL-60细胞组、HL-60细胞+细胞上清组、HL-60细胞+细胞上清+单抗组。主要观察指标:MTT法检测T淋巴细胞及HL-60细胞在应用单克隆抗体12G5前后的增殖情况。结果:与T淋巴细胞组比较,T淋巴细胞+细胞上清组、T淋巴细胞+细胞上清+单抗组的吸光度值均明显降低(P0.05)。与HL-60细胞组比较,HL-60细胞+细胞上清组吸光度值明显升高(P<0.05);与HL-60细胞+细胞上清组比较,HL-60细胞+细胞上清+单抗组的吸光度值明显降低(P<0.05)。结论:加入单克隆抗体12G5阻断基质细胞衍生因子1的生物学效应后,不影响骨髓间充质干细胞上清液抑制T淋巴细胞增殖的效果,但可以抑制白血病细胞HL-60的增殖。

关键词：骨髓间充质干细胞 T淋巴细胞基质细胞衍生因子1 HL-60