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两种新型酶联免疫吸附法检测赭曲霉毒素A和金黄色葡萄球菌肠毒素A

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两种新型酶联免疫吸附法检测赭曲霉毒素A和金黄色葡萄球菌肠毒素A

作者：熊汉鹏南昌大学

学位级别：硕士

赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)和金黄色葡萄球菌肠毒素A(Staphylococcal Enterotoxin A,SEA)是两种最常见的生物毒素。酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assays,ELISA)因具有操作简单、成本低廉、特异性好及高通量等优势,是快速筛查检测OTA和SEA最常用的方法之一。然而,基于辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)催化氧化四甲基联苯胺(TMB)作为信号输出的ELISA方法存在比色信号色度变化单一,信号强度偏弱等缺陷,导致检测灵敏度偏低,且无法实现现场裸眼检测;其次,构建检测真菌毒素的ELISA方法,在合成竞争抗原的过程中需要利用有毒的真菌毒素以及大量的有机试剂,易对环境和相关从业人员身体健康造成威胁。基于AuNPs聚集、生长的pELISA方法具有更高的检测灵敏度,且检测结果适合于裸眼判读,但同时存在信号输出体系稳定性差的缺陷。通过ssDNA数量来调控AuNPs生长形貌作为pELISA的输出信号,克服了常规pELISA方法信号输出体系稳定性差的缺陷。但DNA的构型是如何调控AuNPs形貌,进而影响pELISA信号输出的灵敏度,到目前为止未见详细报道。为此,本研究设计了6种不同DNA序列,详细探讨了DNA构型对pELISA检测灵敏度的影响,最后发现以具有发夹结构的ssDNA调控AuNPs的生长,pELISA检测灵敏度最高。在此基础上,进一步以p3区域融合表达了OTA模拟表位肽、p8区域大量修饰生物素的双功能M13噬菌体(Biotin-M13)为竞争抗原以及过氧化氢酶(CAT)的“集装箱”,构建了一种对环境友好,可裸眼高灵敏检测OTA的pELISA新方法。在该检测体系中,Biotin-M13通过结合大量的CAT放大酶催化效果,CAT通过水解HO来调控芬顿反应产羟自由基,进而调控ssDNA数量,而ssDNA数量又可进一步调控AuNPs生长过程中的形貌变化。在最佳优化条件下,该方法裸眼定性检测OTA的检测限为20 pg/mL,仪器定量检测OTA的线性范围为1～200 pg/mL,线性方程可表述为y=17.063 ln(x)+118.56(R=0.9907),检测OTA的最低检测限为1.58 pg/mL,灵敏度较常规HRP-ELISA提高97倍。玉米样本加标回收实验显示批内、批间的回收率介于85%～110%之间,变异系数小于15%,表明本实验构建的pELISA方法具有较好的准确性以及精密度。其次,利用巯基丙酸修饰的CdTe量子点(MPA-QDs)对HO和p H极度敏感的特点,构建了一种检测乳制品中SEA的超灵敏荧光酶联免疫吸附(FELISA)方法。该方法以MPA-QDs为荧光信号输出材料,以葡萄糖氧化酶(GOx)为酶标记物,当检测体系存在SEA时,GOx催化氧化葡萄糖产酸和HO,MPA-QDs的荧光发生猝灭。在最优条件下,该方法检测脱脂液态奶以及全脂液态奶中SEA的最低检测限为6.65 pg/mL和3.4 pg/mL,检测乳粉中SEA的检测限为0.29 ng/g,该灵敏度较常规HRP-ELISA高678倍。牛奶加标回收实验结果显示,本研究构建的FELISA方法批内和批间的加标回收率分别为在92.65%～109.73%和86.35%～101.75%之间,变异系数均小于15%,表明该pELISA方法具有较高的准确性以及精密度;进一步将检测结果与传统HRP-ELISA方法比较,结果表明两种方法检测结果具有高度一致性。但本研究构建的pELISA方法具有更高的检测灵敏度,因此可用于溶液中痕量SEA检测,同时也可用于复杂食品基质中SEA的检测。

关键词：等离子共振ELISA 荧光ELISA ssDNA 金生长 MPA-QDs 双功能噬菌体

非小细胞肺癌中14-3-3蛋白σ亚型mRNA的表达

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肿瘤防治研究 2010年第3期37卷 346-347页

作者：熊国江熊伟川熊汉鹏杨军平江西中医学院附属医院胸外科南昌330006

0 引言肺癌是当今世界最常见的恶性肿瘤之一,肺癌中80%为非小细胞肺癌(non small cell lung canc-er,NSCLC),各期NSCLC的5年生存率仅16.9%~([1]).近年来,随着细胞周期分子调控机制研究的深入,细胞周期与肿瘤的关系已成为研究热点之一.

关键词： 14—3—3蛋白信使核糖核酸非小细胞肺癌

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长期排菌肺结核的外科治疗

中国防痨杂志 2001年第1期23卷 35-37页

作者：熊汉鹏谢和祥王武明江西省肺科医院胸外科南昌330006

目的　探讨肺结核化疗时代胸外科手术治疗长期排菌病例的重要性 ,手术适应征及手术时机的选择。方法　对内科治疗一年以上仍排菌的 6 3例肺结核空洞或结核性毁损肺采用不同术式切除不可逆病灶或附加胸廓成型术。结果　 59例痰菌阴转 ,... 详细信息

目的　探讨肺结核化疗时代胸外科手术治疗长期排菌病例的重要性 ,手术适应征及手术时机的选择。方法　对内科治疗一年以上仍排菌的 6 3例肺结核空洞或结核性毁损肺采用不同术式切除不可逆病灶或附加胸廓成型术。结果　 59例痰菌阴转 ,阴转率达 93.7% ,4例术后出现并发症 ,无手术死亡。结论　肺外科手术是治疗长期排菌合并空洞及毁损肺患者有效的方法。

关键词：肺结核外科手术长期排菌

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胸膜纤维板完整剥脱术治疗慢性脓胸

山东医药 2004年第33期44卷 31-32页

作者：王武明付洪帆熊汉鹏冯剑雄凌东进江西省胸科医院江西南昌330006

慢性脓胸多需手术治疗,传统纤维板剥脱术是切开脓腔,吸尽脓液及坏死组织后,再作纤维板剥除[1].2002年8月至2004年5月,我们采用不切开脓腔而将胸膜纤维板完整剥脱的方法治疗慢性脓胸20例,效果满意.现报告如下.

关键词：胸膜纤维板完整剥脱术慢性脓胸胸廓活动肺功能胸壁功能

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中西医结合治疗肺癌的现状

江西中医学院学报 2011年第1期23卷 94-97页

作者：朱政熊汉鹏江西中医学院 2008级研究生南昌330006 江西省中医院胸外科南昌330006

根据近年肺癌治疗的相关文献报道,本文对肺癌的中医治疗、西医治疗及中西医结合治疗分别进行了阐述,并客观地反映出中西医结合治疗的美好前景。

关键词：中西医结合肺癌

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电视纵隔镜在胸部疑难疾病中的临床应用

中国内镜杂志 2009年第6期15卷 619-621页

作者：熊汉鹏熊国江谢琰刘小雄江西中医学院附属医院胸外科江西南昌330006

目的探讨电视纵隔镜检查术在胸部疑难疾病并纵隔淋巴结肿大患者的临床应用价值。方法对2005年10月～2008年3月在该院胸外科住院的39例胸部疑难疾病并纵隔淋巴结肿大患者行电视纵隔镜检查并进行活检获取病理以明确诊断。结果手术经过顺利... 详细信息

目的探讨电视纵隔镜检查术在胸部疑难疾病并纵隔淋巴结肿大患者的临床应用价值。方法对2005年10月～2008年3月在该院胸外科住院的39例胸部疑难疾病并纵隔淋巴结肿大患者行电视纵隔镜检查并进行活检获取病理以明确诊断。结果手术经过顺利,无严重并发症及围手术期死亡。39例患者均获明确病理诊断,其中,肺腺癌12例,肺鳞癌8例,肺小细胞癌6例,恶性淋巴瘤6例,纵隔淋巴结结核4例,结节病2例,纵隔慢性淋巴结炎1例。结论电视纵隔镜手术创伤小,安全,取材可靠,可作为胸部疑难疾病并纵隔淋巴结肿大的患者的有效诊断方法。

关键词：电视纵隔镜胸部疾病纵隔淋巴结肿大诊断

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肺癌的中西医结合治疗进展

江西中医药 2011年第10期42卷 74-77页

作者：尚龙华熊汉鹏江西中医学院 2009级硕士研究生南昌330006 江西省中医院胸外科南昌330006

肺癌是原发于各级支气管上皮的恶性肿瘤.一般而言,肺癌按病理组织可分为小细胞未分化癌（约占20%）.）和非小细胞未分化癌（约占80%）.）,两者的生物学行为相差颇大,如小细胞肺癌恶性程度高,很快就会发生扩散转移;非小细胞肺癌的生长较... 详细信息

肺癌是原发于各级支气管上皮的恶性肿瘤.一般而言,肺癌按病理组织可分为小细胞未分化癌（约占20%）.）和非小细胞未分化癌（约占80%）.）,两者的生物学行为相差颇大,如小细胞肺癌恶性程度高,很快就会发生扩散转移;非小细胞肺癌的生长较缓,转移也较慢.非小细胞未分化癌可再分为鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌3种.肺癌病死率居所有癌症之首,且发病率有逐年增高的趋势.据世界卫生组织调查报道,2002年全世界有肺癌新病例大约135万,死亡118万,居恶性肿瘤第一位.其年龄标准化病死率高达男性31.2/10万、女性10.3/10万.发病年龄多在40岁以上,50-60岁为高发期,男女之比约为2.5：1[1].早期肺癌多采用手术治疗,是获得治愈和远期疗效的可靠手段,但能够根治者不足1/3,故总体疗效有限.放疗和化疗对部分患者近期有效,但毒副反应大,复发转移率高,肝、脑、肾上腺、骨、肾等是最常见的转移部位.肺癌的总体疗效差,预后不良,5年生存率仅15%-17%[2].

关键词：肺癌中西医结合疗法综述

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电视纵隔镜检查在肺癌术前分期中的应用价值

江西医药 2015年第1期50卷 29-31页

作者：熊国江熊汉鹏江西中医药大学附属医院胸外科南昌330006

目的探讨电视纵隔镜检查在肺癌合并纵隔淋巴结肿大肿瘤患者术前分期中的临床应用价值。方法回顾性分析行电视纵隔镜检查术的60例患者,术前均高度怀疑肺癌合并有纵隔淋巴结肿大,收集检查术术前诊断和术后病理结果资料进行分析。结果 60... 详细信息

目的探讨电视纵隔镜检查在肺癌合并纵隔淋巴结肿大肿瘤患者术前分期中的临床应用价值。方法回顾性分析行电视纵隔镜检查术的60例患者,术前均高度怀疑肺癌合并有纵隔淋巴结肿大,收集检查术术前诊断和术后病理结果资料进行分析。结果 60例患者经电视纵隔镜检查术后病理结果:恶性52例,慢性淋巴结炎性改变8例,此8例行肺部手术治疗后,病理证实为肺癌,鳞癌4例、腺癌3例、腺鳞癌1例,其中1例腺癌患者伴纵隔淋巴结转移。结论对于肺癌合并纵隔淋巴结肿大的分期,电视纵隔镜检查术以其术后病理敏感性和特异性较高的特点,可成为临床上安全、有效且可直接获得病理标本的检查手段。

关键词：电视纵隔镜肺癌纵隔淋巴结肿大诊断

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参芪扶正注射液治疗肿瘤患者的研究进展

中国民康医学 2015年第16期27卷 73-74,82页

作者：肖永焕熊汉鹏江西中医药大学附属医院胸外科江西南昌330006

近年来应用中药制剂联合放疗、化疗治疗恶性肿瘤已经成为时下热点,参芪扶正注射液在临床被广泛应用于肿瘤的辅助治疗中,本文就此进行综述。

关键词：参芪扶正注射液肿瘤