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大口黑鲈弹状病毒qPCR检测方法的建立与临床应用

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病毒学报 2024年第5期40卷 1033-1046页

作者：陈雪兰蔺凌云杨娜王亿文姚嘉赟沈锦玉潘晓艺浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室湖州313001 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

大口黑鲈弹状病毒病是引起大口黑鲈幼苗暴发性死亡最严重的疾病,为满足大口黑鲈幼苗弹状病毒(Micropterus salmoides rhabdovirus,MSRV)的快速检测,建立大口黑鲈弹状病毒SYBR Green qPCR检测方法。根据大口黑鲈弹状病毒核蛋白基因的保... 详细信息

大口黑鲈弹状病毒病是引起大口黑鲈幼苗暴发性死亡最严重的疾病,为满足大口黑鲈幼苗弹状病毒(Micropterus salmoides rhabdovirus,MSRV)的快速检测,建立大口黑鲈弹状病毒SYBR Green qPCR检测方法。根据大口黑鲈弹状病毒核蛋白基因的保守序列设计qPCR引物,对反应体系进行优化,制作标准曲线,并进行灵敏度、重复性和特异性测试,建立染料法qPCR检测方法,并在临床标本和人工感染鱼组织样品中进行应用。结果表明,构建的标准曲线,模板量与Ct值之间具有良好的线性关系,相关系数R2为0.9994,检测灵敏度达到4.5拷贝/μL,除MSRV、鳜弹状病毒(Sinipercachuatsirhabdovirus,SCRV)、杂交鳢弹状病毒(Hybridsnakeheadrhabdovirus,HSHRV)和斑鳢弹状病毒(Channamaculatarhabdovirus,CMRV)外,对其他7种病毒大口黑鲈蛙虹彩病毒(Largemouth bass ranavirus,LMBV)、传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)、神经坏死病毒(Nervous necrosis virus,NNV),传染性造血器官坏死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)、鲤春病毒血症病毒(Spring viraemia of carp virus,SVCV)、草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)和黄颡鱼小RNA病毒(Yellow catfish picornavirus,YCPrV)都无扩增荧光信号;在对45份临床样品的检测中,建立的qPCR检出阳性率比套式PCR高11.11%;对人工感染MSRV的不同规格(1 g/ind、3 g/ind、8 g/ind)大口黑鲈各组织检测结果显示,脾脏中病毒载量最高,并且大规格鱼苗(8 g/ind)组织中病毒载量要低于小规格鱼苗(1 g/ind、3 g/ind),表明小规格鱼苗更易感。以上结果表明,建立的大口黑鲈弹状病毒SYBR Green qPCR检测方法是一种适合临床样品检测的特异性强、灵敏度高、稳定性好的MSRV定量方法。该方法的建立为MSRV疾病检疫提供了可靠的技术手段。

关键词：大口黑鲈弹状病毒 qPCR 病毒检测

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松萝提取物通过调节HMGB1-RAGE炎症通路治疗类风湿关节炎的机制研究

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辽宁中医杂志 2024年第7期51卷 169-172页

作者：仇维彬安阳张军刘灿徐晖陆道敏潘晓艺贵州中医药大学贵州贵阳550002 贵州中医药大学第二附属医院贵州贵阳550001

目的探讨松萝提取物通过调节(high mobility group protein,HMGB1-RAGE)信号通路治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的机制。方法54只CIA大鼠随机平均分为空白组,模型组,羟氯喹组,松萝提取物高、中、低剂量组,除空白组外,其余各... 详细信息

目的探讨松萝提取物通过调节(high mobility group protein,HMGB1-RAGE)信号通路治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的机制。方法54只CIA大鼠随机平均分为空白组,模型组,羟氯喹组,松萝提取物高、中、低剂量组,除空白组外,其余各组CIA大鼠均采用免疫诱导法建立RA模型,从造模第14 d后进行灌胃干预,连续用药14天后取血清及滑膜组织。ELISA检测(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、(interleukin-1,IL-1β)、(interleukin-6,IL-6)、(interleukin-17,IL-17)、(interleukin-23,IL-23)浓度水平,Rt-PCR检测HMGB1、RAGE mRNA的表达,Western blot法检测HMGB1、RAGE的蛋白活性。结果模型组检测指标明显高于空白组。经过14天的干预治疗后,羟氯喹组、松萝提取物高、中、低剂量检测指标均有不同程度降低,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论松萝提取物可抑制HMGB1、RAGE、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、IL-23在CIA大鼠中的表达。提示松萝提取物可能有望通过调节HMGB1-RAGE信号通路治疗类风湿关节炎。

关键词：松萝提取物类风湿关节炎 HMGB1-RAGE信号通路

大口黑鲈鰤鱼诺卡氏菌传代弱毒株特性及免疫效果评价

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水生生物学报 2024年第7期48卷 1120-1129页

作者：杨娜黄雷蔺凌云姚嘉赟陈静刘忆瀚陈雪兰王亿文沈锦玉潘晓艺浙江海洋大学水产学院舟山316022 浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室湖州市渔业环境与水产品质量安全重点实验室湖州313001

为探究鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)强毒株LY20810 F1与其传代弱毒株LY20810 F110的特性差异,比较了两个菌株的生物学特征、毒力基因序列、致病力及引起大口黑鲈免疫反应的差异,并评价了弱毒株LY20810 F110对大口黑鲈的免疫保护效... 详细信息

为探究鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)强毒株LY20810 F1与其传代弱毒株LY20810 F110的特性差异,比较了两个菌株的生物学特征、毒力基因序列、致病力及引起大口黑鲈免疫反应的差异,并评价了弱毒株LY20810 F110对大口黑鲈的免疫保护效果。结果表明,通过BHI培养基连续传代培养110代次后,菌株LY20810 F110的菌落、菌体形态发生显著变化,其生长速度较原始毒株LY20810 F1快1倍以上。通过比较两株菌的10个毒力基因序列,发现菌株LY20810 F110的SodC和ESAT6基因发生了单位点突变。致病力测试结果显示,强毒株LY20810 F1以0.1 mL 1×10^(7) cfu/mL攻毒剂量感染大口黑鲈,30d内鱼累积死亡率为100%,而传代弱毒株LY20810 F110在相同剂量下未造成鱼死亡。强毒株LY20810 F1攻毒3d后引起脾脏、头肾中IL-1β、IL-10、TNF-α、IFN-γ等炎症细胞因子显著上调,表明细菌感染引起炎症风暴。传代弱毒株LY20810 F110在感染中后期(14d和28d)诱导包括IgM、CD4-α、CD8-α、MHCI-α等8种免疫因子的上调。免疫效果评价结果显示,弱毒株LY20810 F110的注射、浸泡免疫(1×10^(8) cfu/mL)对大口黑鲈的相对保护率分别为75.0%和66.7%,有效降低了鰤鱼诺卡氏菌入侵造成大口黑鲈脾脏和头肾的病理损伤。以上结果表明,鰤鱼诺卡氏菌传代弱毒株LY20810 F110是安全有效的弱毒疫苗候选株,将为诺卡氏菌减毒疫苗的研制提供科学依据。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌传代培养减毒疫苗免疫保护大口黑鲈

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快速检测十足目虹彩病毒1 RPA-LFD方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2024年第5期46卷 505-510页

作者：袁雪梅陈静黄雷蔺凌云潘晓艺彭先启焦锦彪姚嘉赟浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省鱼类健康与营养重点实验室/湖州市渔业环境与水产品质量安全重点实验室浙江湖州313001

为建立一种高效、快速、简便的十足目虹彩病毒1(DIV1)检测方法,本研究以DIV1 ATPase基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,采用方阵法优化反应温度和时间,结果显示,重组酶聚合酶扩增技术(RPA)最优反应温度为37℃,时间为15 min,结果观察... 详细信息

为建立一种高效、快速、简便的十足目虹彩病毒1(DIV1)检测方法,本研究以DIV1 ATPase基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,采用方阵法优化反应温度和时间,结果显示,重组酶聚合酶扩增技术(RPA)最优反应温度为37℃,时间为15 min,结果观察时间为5 min,检测过程总时长为20 min,初步建立了DIV1的重组酶聚合酶扩增技术结合侧向流试纸条方法(RPA-LFD)。提取其他7种常见虾类病原基因组与DIV1基因组,采用该方法检测,分析其特异性;构建重组质粒标准品p UC57-DIV1,10倍倍比稀释后采用该方法检测,分析其灵敏性;以3种不同浓度的重组质粒标准品为模板进行批间、批内重复性试验。结果显示,该方法能特异性检测DIV1,与虾类其他常见易感病原均无交叉反应;其对重组质粒标准品的检测限为1×10^(1)拷贝/μL;批内和批间重复性试验的检测结果均一致,重复性好。利用该方法与已发表的荧光定量PCR(qPCR)同时检测15份感染DIV1的罗氏沼虾样品及40份临床样品,结果显示,该方法的阳性检测率为69.09%(38/55),阴性率为30.91%(17/55),与q PCR检测结果一致,二者的阳性符合率、阴性符合率、总符合率均为100%。综上所述,本研究建立的RPA-LFD方法检测DIV1具有快速、简便、灵敏度高且特异性强的特点,且不需要精密昂贵的仪器设备,为基层实验室及现场检测提供了可行技术手段。

关键词：重组酶聚合酶扩增侧向流试纸条技术十足目虹彩病毒I

基于网络药理学和实验验证探讨松萝治疗类风湿性关节炎的作用机制

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深圳中西医结合杂志 2024年第1期34卷 1-6,I0002,I0003,F0003页

作者：谢良山安阳徐晖潘晓艺文红赵青青贵州中医药大学贵州贵阳550002 贵州中医药大学第二附属医院贵州贵阳550001

目的:通过网络药理学和实验验证探讨松萝在治疗类风湿性关节炎(RA)中的潜在机制。方法:通过查阅文献和利用药物靶点预测网站检索松萝的化学成分和作用靶点,再利用疾病数据库检索RA的相关靶点,将两者取交集,运用Venny软件构建松萝和RA靶... 详细信息

目的:通过网络药理学和实验验证探讨松萝在治疗类风湿性关节炎(RA)中的潜在机制。方法:通过查阅文献和利用药物靶点预测网站检索松萝的化学成分和作用靶点,再利用疾病数据库检索RA的相关靶点,将两者取交集,运用Venny软件构建松萝和RA靶点的韦恩图,并取得共同靶点,构建中药–活性成分–靶点网络图、蛋白质相互作用(PPI)网络,并使用DAVID数据库进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,取KEGG富集分析的前20条信号通路。最后通过实验验证,建立RA成纤维样滑膜细胞(RAFLS)模型,使用松萝干预RAFLS以验证其疗效和作用机制。结果:通过数据库筛选出松萝的主要活性成分11种、靶点308个,RA靶点513个,共同靶点49个。其中松萝的主要活性成分是松萝酸、芹菜素、扁枝衣酸乙酯、黑茶渍素、地弗地衣酸等。松萝治疗RA的核心靶点包括:肿瘤坏死因子(TNF)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、MMP2、白细胞介素–2(IL–2)、丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、转化生长因子β1(TGFβ1)、髓过氧化物酶(MPO)、MMP1等。GO富集分析确定了312个与RA发生相关条目,KEGG富集分析确定了88条通路,其中排在首位的是TNF信号通路。实验验证显示,与空白组相比,溶剂对照组中TNF–α、MMP分泌显著升高,MAPK的蛋白表达显著上调,差异有统计学意义(P<0.05);与溶剂对照组相比,松萝低、中、高剂量组及羟氯喹组均能不同程度促进细胞凋亡,降低TNF–α、MMP的分泌,且松萝中、高剂量组及羟氯喹组的MAPK蛋白表达显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:松萝具有多成分、多靶点、多通路的特性,其作用机制可能是通过参与细胞的凋亡、增殖和炎症反应等过程来完成。松萝可通过抑制炎症细胞的生成与释放,一定程度上降低关节的破坏,以达到治疗RA的目的。

关键词：类风湿关节炎松萝网络药理学

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我国罗氏沼虾产业发展现状与对策研究

中国渔业经济 2024年第2期42卷 88-94页

作者：张海琪郭建林高强高令梅潘晓艺浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省水产遗传育种重点实验室浙江湖州313001

作为优质蛋白的主要来源,水产品是国民“菜篮子”的重要组成部分。由于生长快、营养好,罗氏沼虾从1976年被我国引进后迅速得到推广,在品种培育、育苗技术、养殖模式、饲料生产、病害防治和加工市场等全产业链环节均得到了较大发展。文... 详细信息

作为优质蛋白的主要来源,水产品是国民“菜篮子”的重要组成部分。由于生长快、营养好,罗氏沼虾从1976年被我国引进后迅速得到推广,在品种培育、育苗技术、养殖模式、饲料生产、病害防治和加工市场等全产业链环节均得到了较大发展。文章从养殖规模、品种与养殖模式、营养饲料、病害、市场与加工市场等方面对罗氏沼虾产业进行系统分析,立足当前罗氏沼虾产业发展过程中存在的种质资源多样性水平相对较低、优质种苗供应不足、绿色防控与健康营养技术研究缺乏等短板,提出了加强种质收集和种业培育、加快良种良法配套研究、加大病害防控研究、增强要素保障等,以期为相关养殖主体和政府部门提供参考,推动罗氏沼虾产业高质量发展。

关键词：罗氏沼虾产业种质资源养殖模式

罗氏沼虾诺达病毒TAS-ELISA检测法的建立及应用研究

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2006年第4期32卷 377-382页

作者：钱冬刘问潘晓艺曹铮于涟浙江大学生物医学工程与仪器科学学院浙江杭州310028 浙江省淡水水产研究所浙江湖州313001 浙江大学动物预防医学研究所浙江杭州310029

罗氏沼虾肌肉白浊病(Whitish muscle diseases ofMacrobrachium rosenbergii)是近年来流行于罗氏沼虾苗种阶段的严重疾病,该病病原已确定为罗氏沼虾诺达病毒(Macrobrachium rosenbergiiNodavirus,MrNV).作者在病毒超离提纯的基础上,制备了罗氏沼虾诺达病毒兔抗血清,并应用抗罗氏沼虾诺达病毒单克隆抗体2B5,建立了三抗体夹心酶联免疫检测方法(TAS-ELISA).TAS-ELISA最适反应条件为:兔抗体以1μg/mL包板,小鼠单抗2B5的工作浓度为1∶50000,该法检测MrNV的灵敏度达0.98 ng,对WSSV、TSV及其他细菌感染死亡的罗氏沼虾苗没有非特异性反应.通过对2000—2002年病虾及疑似病虾的病毒检测,表明TAS-ELISA法比间接ELISA法和核酸电泳法有更高的阳性检出率和符合率;此外还摸索了降低孵育温度和缩短孵育时间对病毒检测的影响,表明各步孵育温度和时间分别为25℃和20 min对于白浊症状的病苗检测无明显影响,使得本法更加适合于生产实践.

关键词：罗氏沼虾肌肉白浊痛罗氏沼虾诺达病毒 TAS-ELISA 应用

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考虑城市轨道交通接驳的共享单车调度优化

考虑城市轨道交通接驳的共享单车调度优化

作者：潘晓艺中南大学

学位级别：硕士

灵活便捷、低碳环保的共享单车,可以提供点到点的服务,被认为是解决“第一公里”和“最后一公里”问题的有效途径。然而,在日常运营中,共享单车系统中存在供需不平衡、单车故障等问题,影响了出行者的出行效率。在考虑城市轨道交通接驳... 详细信息

灵活便捷、低碳环保的共享单车,可以提供点到点的服务,被认为是解决“第一公里”和“最后一公里”问题的有效途径。然而,在日常运营中,共享单车系统中存在供需不平衡、单车故障等问题,影响了出行者的出行效率。在考虑城市轨道交通接驳模式下,本研究对共享单车调度问题进行深入研究,合理分配轨道交通接驳区域之间的单车资源,以缓解城市内大部分共享单车供需不平衡问题,便利居民出行。首先,基于深圳市的真实数据,对共享单车调度需求进行分析。分别探究了共享单车对轨道交通客流量的影响、高峰期调度需求的生成机理,结合共享单车接驳出行特性选择接驳需求预测方法,并根据不同时期调度特点提出相应的调度量确定方法,为静态调度、动态调度奠定基础。其次,对夜间停运期静态调度问题进行建模,同时考虑故障单车回收与碳排放成本。在布谷鸟搜索算法中引入拓展的2-opt、随机移除与插入法,对模型进行求解,获得成本尽可能小的调度方案,并通过案例分析验证算法的可靠性和有效性。通过静态调度优化方法,满足白天居民的接驳出行需求,并期望对轨道交通客流增加起到一定的促进作用。最后,在考虑动态调度需求的情况下,对日间高峰期动态调度问题进行研究。在静态模型的基础上,建立多时段调度优化模型,并采用定期更新策略,根据单车借还量的变化调整调度方案,实现对需求的动态响应。采用分段优化的方式求解动态调度问题,提出不同于静态调度的车辆分配方法,并从调度分区、模型对比两个方面验证方法可行、有效。本研究形成了一套完整的调度优化方法,有助于共享单车运营商制定有效的调度方案,能够为共享单车与城市轨道交通接驳系统优化提供一定的参考。图30幅,表24个,参考文献110篇

关键词：共享单车调度优化碳排放成本城市轨道交通接驳布谷鸟搜索算法

VEGF模拟肽修饰的PEEK植入体的体外生物性能研究

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VEGF模拟肽修饰的PEEK植入体的体外生物性能研究

作者：潘晓艺西南医科大学

学位级别：硕士

目的:探究于聚醚醚酮(PEEK)植入体的表面修饰血管内皮生长因子(VEGF)模拟肽(QK),以提高PEEK的亲水性,及其对HUVECs的粘附、增殖及功能活性的可行性,以期找到一种高效、稳定的材料修饰方法来改良PEEK的生物学活性,为3D打印PEEK植入体更... 详细信息

目的:探究于聚醚醚酮(PEEK)植入体的表面修饰血管内皮生长因子(VEGF)模拟肽(QK),以提高PEEK的亲水性,及其对HUVECs的粘附、增殖及功能活性的可行性,以期找到一种高效、稳定的材料修饰方法来改良PEEK的生物学活性,为3D打印PEEK植入体更好的应用于临床骨修复奠定基础。方法:实验一,PEEK材料的表面修饰及表征检测:PEEK片用弱碱性的多巴胺溶液浸泡24h后,即在材料表面沉积形成聚多巴胺(PDA)层,利用PDA的超强粘附作用将血管内皮生长因子(VEGF)模拟肽(QK)接枝到PEEK材料表面,按材料处理方式的不同将实验分为三组:无修饰的PEEK组、仅有PDA涂层的PEEK-PDA组、修饰QK的PEEK-PDA-QK组;各组样本材料的接触角用接触角测量仪测定,以分析材料的亲水性;用X线光电子能谱(XPS)分析PEEK材料表面主要的化学元素,来验证QK是否成功修饰在材料的表面。实验二,体外细胞实验:三组材料分别与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)共培养,分别在细胞培养的一定阶段,通过检测乳酸脱氢酶活性、CCK-8检测细胞增殖、测定细胞培养上清中一氧化氮(NO)含量和鬼笔环肽染色细胞骨架等实验,分析各组材料对HUVECs的毒性、粘附、增殖和功能活性。应用SPSS19.0软件对计量资料进行单因素方差分析,P<0.05表示结果的差异具有统计学意义。结果:实验一:三组材料的接触角从小到大依次为PEEK-PDA-QK组

关键词：聚醚醚酮聚多巴胺 QK 人脐静脉内皮细胞增殖功能活性细胞骨架一氧化氮