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绿色包装材料魔芋葡甘聚糖可降解膜的制备研究

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食品工业科技 2006年第11期27卷 148-151,176页

作者：邓红涂追陕西师范大学食品工程系陕西西安710062

以魔芋精粉为主要原料,利用魔芋葡甘聚糖溶胶在适当条件下的成膜性制备可降解绿色包装膜材料。通过单因素实验和正交实验,探讨了精粉浓度、增塑剂和补强剂的添加量、干燥温度、pH等因素对膜的制备及膜性能的影响,确定了膜制备的最佳工... 详细信息

以魔芋精粉为主要原料,利用魔芋葡甘聚糖溶胶在适当条件下的成膜性制备可降解绿色包装膜材料。通过单因素实验和正交实验,探讨了精粉浓度、增塑剂和补强剂的添加量、干燥温度、pH等因素对膜的制备及膜性能的影响,确定了膜制备的最佳工艺条件：即精粉浓度1％(g/mL),增塑剂6％,补强剂6％,干燥温度60℃,pH9～10。

关键词：魔芋精粉葡甘聚糖制备可降解包装膜

橙色红曲菌（AS3.4384）SOD基因的克隆与功能分析

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橙色红曲菌（AS3.4384）SOD基因的克隆与功能分析

作者：涂追南昌大学

学位级别：硕士

红曲菌是我国重要的微生物资源，能够产生多种具有生物活性的代谢产物，具有很高的商业价值。但是由于红曲菌产桔霉素问题的存在，对红曲的安全性提出了怀疑。实验室前期研究克隆得到了八条可能与桔霉素产毒相关的EST序列。经生物信息... 详细信息

红曲菌是我国重要的微生物资源，能够产生多种具有生物活性的代谢产物，具有很高的商业价值。但是由于红曲菌产桔霉素问题的存在，对红曲的安全性提出了怀疑。实验室前期研究克隆得到了八条可能与桔霉素产毒相关的EST序列。经生物信息学分析，发现其中一个基因P5编码的蛋白与Mn-SOD高度同源。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是一类广泛存在于生物体内的金属酶，能够催化超氧阴离子发生歧化反应，具有抗衰老、抗辐射、抗炎等多种生物活性。目前已广泛的应用于医药、食品、化妆品等领域。本研究利用分子生物学技术和方法，初步研究了该基因的功能，主要研究内容如下： 1．通过PCR技术从橙色红曲菌AS3.4384的Fosmid基因组文库中筛选到含有SOD基因的克隆子QE，利用限制性内切酶Sal I将其完全酶切后亚克隆至pUC18质粒Sal I位点，筛选到含有SOD基因及侧翼序列的克隆子pUC18-Q5E4，测序后确定该克隆子为反向插入，含有SOD基因上游907bp及下游356bp序列。 2．成功构建了插入型SOD基因打靶载体pUC18-Q5E4-hph，该载体同源序列长度约为1.8kb。 3．将该基因编码框序列插入毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K，构建重组表达质粒pPIC9K-SOD，经Sal I酶切线性化后，转化至毕赤酵母GS115(HisMut)。将经过PCR鉴定整合目的基因且表型为HisMut的重组菌株进行摇瓶诱导表达。以1％甲醇诱导48h后，重组酵母发酵液上清具有SOD酶活性，初步证实该基因编码SOD。

关键词：红曲菌超氧化物岐化酶(SOD) 基因表达基因敲除同源重组

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检测黄曲霉毒素生物合成相关基因芯片的研制

食品科学 2009年第19期30卷 185-189页

作者：胡娜许杨涂追江西科技师范学院生命科学学院江西南昌330013 南昌大学中德联合研究院江西南昌330047

研究比较成熟的可用于分析黄曲霉毒素生物合成相关基因的芯片分析技术。芯片点阵后依次通过温浴2h,650mJ/cm2紫外交联30s、80℃烘烤2h、预杂交45min、清洗、干燥等步骤,最后与待测样品在42℃杂交16h,可获得低背景高质量的芯片。本实验... 详细信息

研究比较成熟的可用于分析黄曲霉毒素生物合成相关基因的芯片分析技术。芯片点阵后依次通过温浴2h,650mJ/cm2紫外交联30s、80℃烘烤2h、预杂交45min、清洗、干燥等步骤,最后与待测样品在42℃杂交16h,可获得低背景高质量的芯片。本实验所用探针来源于寄生曲霉,而待测样品选择了黄曲霉菌株,芯片扫描结果显示荧光信号稳定,与反转录PCR扩增结果一致,并且无背景干扰。证明探针设计合理,实验方法可靠。初步建立了用芯片检测与黄曲霉毒素生物合成相关基因的技术平台。

关键词：寄生曲霉黄曲霉黄曲霉毒素基因芯片

米曲霉3.951菌株与RIB40菌株高产原生质体的制备及再生条件的研究

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食品与发酵工业 2012年第4期38卷 57-61页

作者：刘雪许杨李燕萍涂追雷达南昌大学食品科学与技术国家重点实验室中德联合研究院

针对2株米曲霉进行原生质体制备条件的研究,比较了制备材料、菌龄、渗透压稳定剂、复合酶配比、酶解时间以及酶解温度对米曲霉原生质体形成和再生的影响。结果表明,2株米曲霉原生质体制备的最适宜条件稍有差异,其中米曲霉3.951菌株原生... 详细信息

针对2株米曲霉进行原生质体制备条件的研究,比较了制备材料、菌龄、渗透压稳定剂、复合酶配比、酶解时间以及酶解温度对米曲霉原生质体形成和再生的影响。结果表明,2株米曲霉原生质体制备的最适宜条件稍有差异,其中米曲霉3.951菌株原生质体制备和再生的适宜条件是:以菌丝为制备材料,菌龄为14 h,渗透压稳定剂为0.8 mol/L NaCl,复合酶配比为1.0%纤维素酶、1.0%裂解酶、0.l%蜗牛酶,酶解时间为3 h,酶解温度为35℃;米曲霉RIB40的适宜条件是:以菌丝制备材料,菌龄为12 h,渗透要稳定剂为0.8 mol/L NaCl,复合酶配比是为1.0%纤维素酶、1.0%裂解酶、0.l%蜗牛酶,酶解时间为3 h,酶解温度是35℃。在优化条件下米曲霉3.951菌株释放的原生质体达6.43×107个/g,再生率可达23.5%,米曲霉RIB40释放的原生质体可达4.24×107个/g,再生率达22.41%。

关键词：米曲霉原生质体制备再生

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两种水生动物抗菌肽的原核表达及活性分析

中国生物工程杂志 2011年第2期31卷 56-61页

作者：舒梅许杨徐熙涂追南昌大学食品科学与技术国家重点实验室南昌大学中德联合研究院南昌330047

将两种水生动物分泌的抗菌肽基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,构建了pGEX-Y18和pGEX-CEC1两个融合蛋白表达载体,转化至*** Rosetta中进行表达,表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在。融合蛋白经复性、酶切处理获得抗菌肽Y18和CEC1。... 详细信息

将两种水生动物分泌的抗菌肽基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,构建了pGEX-Y18和pGEX-CEC1两个融合蛋白表达载体,转化至*** Rosetta中进行表达,表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在。融合蛋白经复性、酶切处理获得抗菌肽Y18和CEC1。抑菌实验结果表明:融合蛋白GST-Y18和GST-CEC1、抗菌肽Y18和CEC1都能有效地抑制*** DH5α、***、***和***的生长。

关键词：抗菌肽融合蛋白包涵体抑菌活性

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催化光度法测定三聚氰胺脱氨酶活性

食品科学 2011年第18期32卷 234-238页

作者：季艳伟许杨黄志兵涂追南昌大学食品科学与技术国家重点实验室中德联合研究院江西南昌330047

建立一种测定三聚氰胺脱氨酶活性的催化光度法。利用Berthelot显色反应,通过测定单位时间内释放出的氨气量推算三聚氰胺脱氨酶的活性,并通过单因素试验和L9(34)正交试验优化测定条件。结果表明:最佳显色条件为水杨酸显色液加入量1.2mL... 详细信息

建立一种测定三聚氰胺脱氨酶活性的催化光度法。利用Berthelot显色反应,通过测定单位时间内释放出的氨气量推算三聚氰胺脱氨酶的活性,并通过单因素试验和L9(34)正交试验优化测定条件。结果表明:最佳显色条件为水杨酸显色液加入量1.2mL、次氯酸钠溶液加入量0.3mL、显色反应时间40min、测定波长650nm;最佳酶促反应条件为三聚氰胺底物加入量0.2mL、粗酶液加入量60μL、酶促作用时间30min;在上述条件下,测得酶比活力为132.41U/L,批内批间变异系数范围分别为0.81%～1.19%和1.27%～1.69%。催化光度法对三聚氰胺脱氨酶酶活的测定,具有操作快速简便、灵敏度高、重复性好的优点。

关键词：三聚氰胺脱氨酶酶活性测定分光光度法

黄曲霉和寄生曲霉pksA基因部分序列的同源性分析

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江西农业大学学报 2007年第1期29卷 134-137页

作者：胡娜许杨涂追南昌大学中德联合研究院教育部食品科学重点实验室江西南昌330047

比较寄生曲霉和黄曲霉pksA基因部分序列同源性。方法:采用RT-PCR从寄生曲霉AS3.4407和黄曲霉菌AS3.4409中克隆得到pksA基因部分序列,经克隆后测序。结果:通过比对分析发现该两株菌pksA基因同源性可达98.0%。

关键词：寄生曲霉黄曲霉 pksA基因同源性

抗AFB_1单域重链抗体文库淘选方法的研究

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食品与生物技术学报 2011年第6期30卷 950-955页

作者：刘夏许杨涂追何庆华食品科学与技术国家重点实验室南昌大学江西南昌330047 南昌大学中德联合研究院江西南昌330047

比较两种从噬菌体展示文库中淘选抗黄曲霉毒素B1单域重链抗体的方法,并为淘选针对小分子物质的单域重链抗体提供参考。采用固相淘选技术,以黄曲霉毒素B1人工抗原为靶分子,淘选天然单域重链抗体库,分别采用Gly-HCl法和AFB1竞争法洗脱结... 详细信息

比较两种从噬菌体展示文库中淘选抗黄曲霉毒素B1单域重链抗体的方法,并为淘选针对小分子物质的单域重链抗体提供参考。采用固相淘选技术,以黄曲霉毒素B1人工抗原为靶分子,淘选天然单域重链抗体库,分别采用Gly-HCl法和AFB1竞争法洗脱结合噬菌体,对洗脱物进行滴度测定,以回收率和富集度为指标,对两种洗脱方法进行比较。采用phage-ELISA法鉴定噬菌体克隆,并对阳性克隆进行交叉反应分析以及序列测定。滴度测定结果显示,Gly-HCl法回收率比竞争法高5～10倍。分别随机挑取20个单克隆进行phage-ELISA鉴定,其中,Gly-HCl洗脱法未获得阳性克隆,AFB1竞争洗脱法得到8个阳性克隆。序列测定结果显示,这8个克隆均编码单域重链抗体。

关键词：黄曲霉毒素B1 单域重链抗体噬菌体展示天然文库

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三聚氰胺脱氨酶基因克隆表达及活性测定

食品与生物技术学报 2011年第2期30卷 234-238页

作者：涂追许杨季艳伟陶勇食品科学与技术国家重点实验室南昌大学江西南昌330047 南昌大学中德联合研究院江西南昌330047

从载体pUC57-MDA中获得经过大肠杆菌密码子偏好性优化的三聚氰胺脱氨酶编码基因,将该基因连接至表达载体6HisT-pRSET中,构建了重组表达质粒6HisT-pRSET-MDA,将其转化大肠杆菌BL21(DE3),得到重组工程菌BL-MDA并进行诱导表达,利用SDS-PAG... 详细信息

从载体pUC57-MDA中获得经过大肠杆菌密码子偏好性优化的三聚氰胺脱氨酶编码基因,将该基因连接至表达载体6HisT-pRSET中,构建了重组表达质粒6HisT-pRSET-MDA,将其转化大肠杆菌BL21(DE3),得到重组工程菌BL-MDA并进行诱导表达,利用SDS-PAGE对表达产物进行分析并测定酶活性。SDS-PAGE电泳分析结果显示,表达上清液在53 000处有明显的蛋白质条带,与理论相对分子质量的吻合,其脱氨酶活性达5.61 U。

关键词：三聚氰胺脱氨酶大肠杆菌重组蛋白