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问号钩端螺旋体在体外诱导细胞凋亡及相关信号通路的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第7期28卷 602-605页

作者：金丹丹汤仁仙潘建平严杰浙江大学医学院病原生物学系杭州310058 徐州医学院病原生物学教研室

目的了解问号钩端螺旋体诱导不同宿主细胞凋亡的作用及相关胞内信号传导通路。方法建立问号钩体黄疸出血群赖型赖株小鼠单核-巨噬样细胞J774A．1、人脐静脉内皮细胞EVC304和人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549感染模型。采用FITC-Annexin V／PI荧... 详细信息

目的了解问号钩端螺旋体诱导不同宿主细胞凋亡的作用及相关胞内信号传导通路。方法建立问号钩体黄疸出血群赖型赖株小鼠单核-巨噬样细胞J774A．1、人脐静脉内皮细胞EVC304和人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549感染模型。采用FITC-Annexin V／PI荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡或坏死情况。分别采用荧光比色法和Western blot检测感染的J774A．1细胞caspase-3，-8，-9活性和凋亡相关蛋白FADD（Fas-associated death domain）表达水平。结果问号钩体赖株感染1-6h后，36．70％-63．70％的J774A．1细胞可出现明显的早期凋亡，感染12h时转变为晚期凋亡或坏死为主（53．68％）。78．52％问号钩体赖株感染的A549细胞仅出现晚期凋亡或坏死。问号钩体赖株感染的EVC304细胞无细胞凋亡或坏死现象。感染的J774A．1细胞caspase-3和-8最大活性分别为（1453．41±36．07）和（1402．15±59．09）FU，是未感染细胞的16．38和29．99倍。感染的J774A．1细胞caspase-9虽略有升高为（89．42±5．08）FU，但明显低于easpase-3和-8（P〈0．001）。随着感染时间的延长，感染的J774A．1细胞FADD蛋白表达量逐步增加。结论问号钩体诱导宿主细胞凋亡的效应可因细胞种类不同而有明显差异，FADD→caspase-8→caspase-3是介导问号钩体感染J774A．1细胞凋亡的主要信号通路。

关键词：问号钩端螺旋体/感染细胞凋亡 Caspase/信号传导通路

补体C5b-9复合物诱导大鼠肾系膜细胞iNOS mRNA表达的实验研究

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中国免疫学杂志 2000年第5期16卷 238-240页

作者：王迎伟何球藻秦慧莲高丰光汤仁仙徐州医学院免疫教研室徐州221002 上海医科大学免疫教研室上海200032

观察人血清补体C5b 9复合物对大鼠肾小球系膜细胞 (MC)表达诱生性一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA的影响。方法 :首先提取人血清补体C5b 9复合物 ,然后用人C5b 9复合物刺激培养的大鼠MC ,检测MC在受C5b 9复合物刺激后3、6、2 4和 48h时iNOSmRN... 详细信息

观察人血清补体C5b 9复合物对大鼠肾小球系膜细胞 (MC)表达诱生性一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA的影响。方法 :首先提取人血清补体C5b 9复合物 ,然后用人C5b 9复合物刺激培养的大鼠MC ,检测MC在受C5b 9复合物刺激后3、6、2 4和 48h时iNOSmRNA的表达情况。同时检测其培养上清液中一氧化氮 (NO)代谢产物———硝酸根 (NO3- )和亚硝酸根(NO2- )含量的变化。结果 :用人C5b 9复合物刺激培养大鼠的肾MC能使其表达iNOSmRNA ,培养上清液中NO3- NO2- 含量也明显升高。人C5b 9复合物对MC的刺激作用能部分被相应的抗人C5b 9复合物抗体和RNA合成抑制剂———放线菌素D所抑制。结论 :人补体C5b 9复合物具有刺激大鼠肾MC合成NO的作用。

关键词：补体C5b-9复合物肾小球系膜细胞 iNOS mRNA

含IL-24基因重组慢病毒表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的抑制作用

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江苏医药 2010年第19期36卷 2300-2302页

作者：周峰张海清史震孙伟汤仁仙郑葵阳徐州医学院病原生物学与免疫学教研室 221004 徐州医学院肿瘤生物治疗重点实验室

目的探讨白细胞介素(IL)24基因表达目的蛋白IL-24的方法,检测IL-24对肝癌细胞生长的影响。方法自经5μg/ml植物血凝素(PHA)刺激的正常人单个核细胞(PBMCs)中提取总RNA,RT-PCR扩增出IL-24cDNA,插入到pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen中构建成慢病... 详细信息

目的探讨白细胞介素(IL)24基因表达目的蛋白IL-24的方法,检测IL-24对肝癌细胞生长的影响。方法自经5μg/ml植物血凝素(PHA)刺激的正常人单个核细胞(PBMCs)中提取总RNA,RT-PCR扩增出IL-24cDNA,插入到pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen中构建成慢病毒转移载体pHAGE-IL-24,转染HEK293T细胞。荧光显微镜观察293T细胞中绿色荧光蛋白(GFP)表达;梯度稀释法测定病毒滴度,感染HEK293T细胞48h后进行RT-PCR和Westernblot检测IL-24的基因和蛋白表达;MTT法检测细胞的增殖。结果限制性内切酶检测和基因测序证实成功构建了携带IL-24基因的慢病毒表达载体,滴度为5×106TU/ml。以MOI为5.0的重组慢病毒感染靶细胞HepG248h后,能够检测到外源基因IL-24的蛋白表达。IL-24能够抑制肝癌细胞的生长。结论成功构建了含IL-24基因的慢病毒表达载体,获得的病毒能够有效感染HepG2细胞,并在其中大量表达目的蛋白;IL-24能够抑制肝癌细胞的生长。

关键词：慢病毒载体白细胞介素24 肝癌

普乐可复防治大鼠抗肾小球基底膜肾炎的实验研究

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中国病理生理杂志 2003年第12期19卷 1631-1634,I001页

作者：汤仁仙王迎伟黄瑞高丰光刘晓梅徐州医学院微生物学与免疫学教研室江苏徐州221002 南京医科大学微生物学与免疫学教研室江苏南京210007 苏州大学基础医学院微生物学教研室江苏苏州215007

目的 :观察普乐可复 (FK5 0 6 )防治大鼠抗肾小球基底膜 (GBM)肾炎的疗效。方法 :复制大鼠抗GBM肾炎模型。实验分 3组 :肾炎 +FK5 0 6组、肾炎对照组及正常对照组。大鼠一次性尾静脉注射抗GBM抗血清后 6h内皮下注射FK5 0 6注射液 (0 5m... 详细信息

目的 :观察普乐可复 (FK5 0 6 )防治大鼠抗肾小球基底膜 (GBM)肾炎的疗效。方法 :复制大鼠抗GBM肾炎模型。实验分 3组 :肾炎 +FK5 0 6组、肾炎对照组及正常对照组。大鼠一次性尾静脉注射抗GBM抗血清后 6h内皮下注射FK5 0 6注射液 (0 5mg·kg-1·d-1) ,至第 2 1d。对照组则给予等量的生理盐水。定期于第 4d、第 14d和第2 1d ,检测大鼠尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平 ,观察肾组织病理学改变 ,以及检测T淋巴细胞转化功能。结果 :肾炎对照组大鼠注射抗血清后于第 4d即出现异常蛋白尿 ,血清肌酐和尿素氮亦持续上升 ;肾小球内可见细胞数增加和新月体形成 ,肾小管内大量蛋白管型 ,GBM呈不规则增厚 ,足突大片融合 ;T淋巴细胞转化功能异常。而肾炎 +FK5 0 6组大鼠上述病变均明显较轻。结论 :FK5 0 6能够明显改善大鼠抗GBM肾炎的肾功能。

关键词：普乐可复抗肾小球基底膜肾炎大鼠

库普弗细胞在小鼠日本血吸虫肝病发展过程中的表型变化

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2017年第3期35卷 224-229页

作者：孙悦郑葵阳何兴雷南行颜超汤仁仙徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室江苏省免疫与代谢重点实验室徐州221004 第二军医大学热带传染病学教研室上海200433

目的研究库普弗细胞(Kupffer cell)在小鼠日本血吸虫(Schistosoma japonicum)肝病发展过程中的表型变化。方法将20只6周龄的BALB/c雄性小鼠经腹部皮肤感染16条日本血吸虫尾蚴,在感染后0、21、32、42、52 d分别处死小鼠,取肝脏组织,HE染... 详细信息

目的研究库普弗细胞(Kupffer cell)在小鼠日本血吸虫(Schistosoma japonicum)肝病发展过程中的表型变化。方法将20只6周龄的BALB/c雄性小鼠经腹部皮肤感染16条日本血吸虫尾蚴,在感染后0、21、32、42、52 d分别处死小鼠,取肝脏组织,HE染色和Masson三色染色观察肝脏病理变化,实时定量PCR(q PCR)检测肝脏Th1型细胞因子γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、α肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Th2型细胞因子白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、IL-13、IL-10)以及库普弗细胞的M1型巨噬细胞分化标志物诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthetase,i NOS)、白细胞分化抗原16(cluster of differentiation 16,CD16)、IL-6和M2型巨噬细胞分化标志物精氨酸酶-1(arginase 1,Arg-1)、CD206、IL-10的表达。体外培养库普弗细胞系,分别给予0、5、25、50 ng/ml IFN-γ或IL-4刺激12 h,或者给予25 ng/ml IFN-γ或IL-4分别刺激0、12、24、36 h后,q PCR检测库普弗细胞M1型、M2型巨噬细胞分化标志物。结果HE染色和Masson三色染色结果显示,小鼠感染后32 d肝组织中开始有虫卵沉积,42 d有明显的肉芽肿和纤维化病变。q PCR结果显示,与感染后0 d相比,IFN-γ在32 d表达水平最高,相对表达量为29.243±3.245,52 d时迅速下降,为8.923±3.002。IL-4在42 d最高,为25.521±4.957。IL-13在52 d最高,为50.793±9.631(均P<0.05)。i NOS在42 d表达水平上升,相对表达量为2.950±0.321,在52 d下降,为1.783±0.319。Arg-1在52 d最高,为2.003±0.152(均P<0.05)。0、5、25、50 ng/ml IFN-γ刺激库普弗细胞12 h后,i NOS、IL-6和CD16的相对表达量分别为54.690~68.577、1.887~2.427、2.417~2.787(均P<0.05)。25 ng/ml IFN-γ刺激0、12、24、36 h后,i NOS、IL-6和CD16的相对表达量分别为34.810~109.210、10.327~15.143、1.887~3.317(均P<0.05),而Arg-1与对照组相比无明显变化。0、5、25、50 ng/ml IL-4刺激库普弗细胞12 h后,Arg-1、IL-10和CD206的相对表达量分别为9.153~24.253、1.923~3.687和37.770~72.133(均P<0.05);25 ng/ml IL-4刺激0、12、24、36 h后Arg-1、IL-10和CD206的相对表达量分别为3.563~12.613、1.637~2.673和19.732~71.943(均P<0.05),而i NOS无明显变化。结论在日本血吸虫感染早期,库普弗细胞以M1型为主;而在感染中晚期,库普弗细胞以M2型为主,表明库普弗细胞转变与肝脏免疫微环境密切相关。

关键词：血吸虫病肉芽肿纤维化库普弗细胞

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构建留学生医学免疫学教学质量管理体系

考试周刊 2015年第83期 175-176页

作者：秦苏萍汤仁仙徐州医学院病原生物学与免疫学教研室

留学生教育是高等医学院校教育的重要组成部分。留学生教育面临诸多难题,如语言沟通障碍、教育背景的差异、自我学习能力和学习纪律等。医学免疫学是医学教育的必修课程,是基础医学与临床医学的桥梁,但其具有理论性强、内容抽象更新快... 详细信息

留学生教育是高等医学院校教育的重要组成部分。留学生教育面临诸多难题,如语言沟通障碍、教育背景的差异、自我学习能力和学习纪律等。医学免疫学是医学教育的必修课程,是基础医学与临床医学的桥梁,但其具有理论性强、内容抽象更新快等特点,使得留学生学习起来非常吃力。我们参照国内外的教学模式,培养高质量的师资力量,建立严格的教学质量监控体系,以提高医学免疫学教学质量。

关键词：医学免疫学留学生教学方法

甘西鼠尾草总酚酸提取物抗嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞氧化应激损伤

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第二军医大学学报 2016年第3期37卷 322-329页

作者：刘翔任红旗杨阳戴德淑柳云李向阳颜超华慧刘瀛戴春尹忠诚汤仁仙解放军97医院徐州医学院附属淮海医院肾内科徐州221004 南京军区南京总医院国家肾脏疾病临床医学研究中心全军肾脏病研究所南京210016 解放军97医院徐州医学院附属淮海医院药剂科徐州221004 徐州医学院感染与免疫实验室徐州221004 徐州医学院附属医院肾内科徐州221000

目的研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)在体内和体外对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病大鼠足细胞以及PAN诱导小鼠足细胞氧化应激损伤的作用。方法 (1)建立PAN肾病大鼠动物模型,给予SPE和他克莫司干预,分别在第5、10、15、21天留取肾组织标本,... 详细信息

目的研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)在体内和体外对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病大鼠足细胞以及PAN诱导小鼠足细胞氧化应激损伤的作用。方法 (1)建立PAN肾病大鼠动物模型,给予SPE和他克莫司干预,分别在第5、10、15、21天留取肾组织标本,WT1染色计数足细胞数目,免疫荧光观察8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)荧光强度。(2)体外采用PAN致足细胞损伤模型,PAN作用小鼠足细胞24h,分别加入含SPE、丹酚酸B(SalB)、迷迭香酸(RA)及他克莫司的培养基培养6、12、24、48h,观察足细胞骨架相关蛋白F-actin的表达,流式细胞仪分析细胞内活性氧(ROS)荧光强度。结果 (1)肾小球WT1细胞计数结果显示,PAN组第5天时足细胞数已开始下降,第15天达(14.4±0.7)个/肾小球切面,较正常组(37.2±1.5)个/肾小球切面减少(P0.05)。第5天时PAN组大鼠肾组织8-OHdG荧光强度较正常组增强,第10天上升至高峰,而后开始减弱,第15天时仍高于正常组;给予药物干预后,大鼠肾组织的8-OHdG荧光强度降低,其中阳性对照组与SPE高剂量组8-OHdG荧光强度较为接近。(2)体外研究发现,PAN作用24h后,F-actin几乎完全解聚,少数细胞尚有残存的被切断的丝状结构,给予SPE、SalB、RA及他克莫司治疗后,PAN诱导的足细胞损伤明显减弱,细胞内重新出现极性分布的微丝。与正常组相比,PAN作用小鼠足细胞24h后ROS荧光强度增加(P0.05),24hSalB降低足细胞内ROS荧光强度效果优于RA,且与药物剂量呈正相关。结论本研究从体内及体外证实,SPE对PAN所致足细胞氧化应激损伤具有保护作用。

关键词：嘌呤霉素氨基核苷足细胞甘西鼠尾草总酚酸提取物丹酚酸B 迷迭香酸 8-羟基脱氧鸟苷活性氧

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本科医学免疫学教学的几点体会

继续医学教育 2008年第5期22卷 29-31页

作者：汤仁仙孙伟李小翠徐州医学院病原生物学教研室 221004

医学免疫学是高等医学院校的重要基础课程和必修课程之一,对于初学者来说,普遍感到困难,难以理解和掌握。为了有效地提高本科医学免疫学理论教学质量,我们在教学中采用多种教学方法和教学手段,激发了学生的学习兴趣,调动了学生的学习积... 详细信息

医学免疫学是高等医学院校的重要基础课程和必修课程之一,对于初学者来说,普遍感到困难,难以理解和掌握。为了有效地提高本科医学免疫学理论教学质量,我们在教学中采用多种教学方法和教学手段,激发了学生的学习兴趣,调动了学生的学习积极性,从而有效地提高教学质量。

关键词：医学免疫学教学方法教学体会

下调过氧化还原蛋白酶2对人胃癌MGC803细胞侵袭、迁移、增殖能力的影响

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肿瘤研究与临床 2017年第12期29卷 793-798页

作者：吴文倩徐浩汤仁仙郑葵阳刘念礼徐州医科大学研究生学院 221000 徐州医科大学感染与免疫学实验室 221000 徐州医科大学肿瘤生物防治研究所 221000

目的利用RNA干扰技术,观察下调过氧化还原蛋白酶2（PRDX2）基因对人胃癌MGC803细胞侵袭、迁移、增殖能力的影响.方法将胃癌MGC803细胞分为3组：空白对照组、阴性对照组、PRDX2 siRNA干扰组,Transwell小室试验检测转染后的胃癌MGC803... 详细信息

目的利用RNA干扰技术,观察下调过氧化还原蛋白酶2（PRDX2）基因对人胃癌MGC803细胞侵袭、迁移、增殖能力的影响.方法将胃癌MGC803细胞分为3组：空白对照组、阴性对照组、PRDX2 siRNA干扰组,Transwell小室试验检测转染后的胃癌MGC803细胞侵袭能力的变化;划痕实验检测转染后的胃癌MGC803细胞迁移能力的变化;蛋白印迹法检测基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9表达量的变化;CCK-8法检测转染后MGC803细胞增殖能力的变化.结果转染PRDX2 siRNA后,与空白对照组和阴性对照组比较,PRDX2 siRNA干扰组MGC803细胞PRDX2蛋白表达下降（0.345±0.006、0.721±0.013和0.720±0.014,P〈0.05）;MMP-2、MMP-9表达量减少（0.067±0.012、0.391±0.015、0.371±0.016和0.073±0.013、0.341±0.028、0.346±0.024）,三组比较差异均有统计学意义（均P〈0.05）;细胞侵袭、迁移、增殖能力受到抑制（均P〈0.05）.结论 PRDX2在胃癌组织中高表达,PRDX2表达下调能够抑制胃癌MGC803细胞的侵袭、迁移、增殖.

关键词：胃肿瘤肿瘤侵润细胞运动细胞增殖过氧化还原蛋白酶2