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作者：武虹波北京中医药大学

学位级别：硕士

研究目的卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)是指因卵巢储备功能下降而导致的妇女40岁之前闭经,并伴有低雌激素和高促性腺激素的疾病。卵巢早衰的病因非常复杂,遗传、自身免疫性疾病、医源性损伤、放疗和化疗对性腺的破坏等,都可... 详细信息

研究目的卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)是指因卵巢储备功能下降而导致的妇女40岁之前闭经,并伴有低雌激素和高促性腺激素的疾病。卵巢早衰的病因非常复杂,遗传、自身免疫性疾病、医源性损伤、放疗和化疗对性腺的破坏等,都可能是引起卵巢功能衰竭的原因。近几年对卵巢早衰的治疗,临床上多用激素替代治疗、卵巢移植技术、免疫疗法、基因疗法、心理疗法等方法。但由于卵巢早衰病因比较复杂,其具体发病机制还不明确而导致治疗效果并不尽如人意。卵巢早衰严重影响了患者的精神健康和生活质量。如何减缓卵巢功能衰退的速度,改善甚至恢复卵巢的初始功能,提高患者生活质量,满足患者生育要求,是目前医学领域中探讨的热点和难点。顺铂(cisplatin,CDDP)是一种用来治疗多种肿瘤的化疗药物。有研究表明,顺铂的使用对卵巢功能有着直接的不良作用,可诱导卵巢颗粒细胞的凋亡,最终形成卵巢早衰。近年来关于癌症化疗药物导致卵巢雌激素分泌水平下降,甚至形成卵巢早衰的报道日益增多。西医对卵巢早衰多采取激素替代疗法,但副作用明显,所以中医药在治疗卵巢早衰中越来越凸显出其独特的优势。现代药理研究表明,四物合剂即四物汤中成药,在生物体内参与多项重要生命活动,表现出抗贫血、保护心血管功能、增强免疫力、抗氧化、抗衰老等多方面的药理效应,特别是对多个靶器官表现出抗突变和抗药物毒性的作用。四物合剂药理作用靶点和途径的揭示将为其临床应用提供重要的实验依据。人类细胞色素蛋白P450芳香化酶是E2(Estradiol,雌二醇)合成的关键限速酶,Cyp19a1是芳香化酶的编码基因,它在E2的分泌中起到了非常重要的作用。相关研究表明雌二醇的合成和分泌与TGFβ-Smads信号转导通路有关,而Smad2/3蛋白则是该信号转导通路的关键信号传导分子。本研究拟通过顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞建立顺铂损伤型卵巢早衰模型,基于TGFβ3通路检测四物合剂药理血清对卵巢颗粒细胞增殖、E2分泌水平、Cyp19a1基因及其调控蛋白Smad2/3表达的影响,探究四物合剂药理血清对顺铂损伤卵巢颗粒细胞芳香化酶活性和表达的干预机制。研究方法***法观察四物合剂药理血清对顺铂损伤颗粒细胞增殖的影响;2.放射免疫法测定四物合剂药理血清对顺铂损伤颗粒细胞E2分泌水平的影响,以反映四物合剂对Cyp19a1活性的影响;3.蛋白印迹法检测四物合剂药理血清对顺铂损伤颗粒细胞Cyp19a1及其调控蛋白Smad2/3、Psma2/3表达水平的影响;4.免疫组化法检测四物合剂药理血清对顺铂损伤颗粒细胞Cyp19a1及其调控蛋白Smad2/3、Psmad2/3的影响;同时加入TGFβ3分别测定四物合剂作用下Cyp19a1、Smad2/3、Psmad2/3蛋白表达水平的变化;5.加入TGFβ-Smad通路阻断剂SB431542,通过放免法测定E2水平,免疫组化法测定Cyp19a1、Smad2/3、Psmad2/3 表达水平的变化。研究结果1.四物合剂药理血清对顺铂损伤卵巢颗粒细胞增殖的影响:与生理对照组相比,顺铂损伤后细胞增殖能力减弱;阳性组,四物合剂各剂量药理血清组作用后,颗粒细胞增殖能力增强,四物合剂组中以大剂量组作用最为显著。2.四物合剂药理血清对顺铂损伤卵巢颗粒细胞E2分泌的影响:顺铂损伤颗粒细胞后,E2分泌水平下降;模型组相比,四物合剂各剂量药理血清组中E2分泌水平升高,以大剂量组作用最为显著。3.四物合剂药理血清对顺铂损伤卵巢颗粒细胞Cyp19a1基因及其调控蛋白Smad2/3、Psma2/3表达的影响:蛋白印迹结果显示,顺铂作用后,模型组Cyp19a1、Smad2/3、Psmad2/3相对表达量均较生理对照组降低;在四物合剂药理血清组作用后,三者表达量均较模型组提升明显,其中以四物合剂大剂量组效果较为显著。4.加入TGFβ3后四物合剂药理血清对顺铂损伤卵巢颗粒细胞Cyp19a1及其调控蛋白Smad2/3、Psamd2/3 表达的影响:免疫组化结果显示:顺铂可以抑制Cyp19a1、Smad2/3、Psmad2/3蛋白的表达,四物合剂药理血清作用后,三者的表达量均较模型组上升。在四物合剂药理血清的干预过程中,加TGFβ3各药理血清组与不加TGFβ3对应组相比,Cyp19a1、Smad2/3、Psamd2/3表达水平均有所升高。5.加入TGFβ-Smad通路阻断剂SB431542后四物合剂药理血清对顺铂损伤卵巢颗粒细胞E2分泌水平,Cyp19a1、Smad2/3、Psmad2/3表达水平的影响:(1)放免法结果显示:在四物合剂药理血清的干预过程中,加入通路阻断剂SB431542后,E2分泌水平较无阻断剂组显著降低。(2)免疫组化法结果显示:在四物合剂药理血清的干预过程中,加阻断剂SB431542各组与对应不加

关键词：卵巢颗粒细胞顺铂四物合剂 E2 Cyp19a1 TGFβ3 Smad2/3

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中药植物雌激素的药理作用研究进展

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江苏中医药 2017年第4期49卷 82-85页

作者：陈梦赵丕文赵笛武虹波北京中医药大学中医学院北京100029

源自中药的植物雌激素是天然的杂环多酚类化合物,能够与雌激素核受体或膜受体结合发挥作用,被称为选择性雌激素受体调节剂。植物雌激素的药理作用体现在治疗骨质疏松、心血管疾病、恶性肿瘤及对抗艾滋病毒等方面。高水平、大规模地深入... 详细信息

源自中药的植物雌激素是天然的杂环多酚类化合物,能够与雌激素核受体或膜受体结合发挥作用,被称为选择性雌激素受体调节剂。植物雌激素的药理作用体现在治疗骨质疏松、心血管疾病、恶性肿瘤及对抗艾滋病毒等方面。高水平、大规模地深入研究植物雌激素的作用机制应当成为未来重要的研究方向,以期为新药研发提供理论依据。

关键词：植物雌激素骨质疏松心血管疾病肿瘤艾滋病综述

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GPER介导中药活性成分植物雌激素样药效作用机制研究进展

GPER介导中药活性成分植物雌激素样药效作用机制研究进展

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中国中西医结合学会第四届实验医学专业委员会第十三次学术研讨会

作者：赵笛武虹波杨蕾卢迪赵丕文北京中医药大学基础医学院

中药在妇科疾病,包括妇科肿瘤、心血管疾病、炎症反应等治疗中表现出疗效确凿、副作用小的特点,这与其所含有的植物雌激素成分密切相关。中药植物雌激素是中药含有的一类结构与功效与内源性雌激素相似的天然杂环多酚类化合物,其效应在... 详细信息

中药在妇科疾病,包括妇科肿瘤、心血管疾病、炎症反应等治疗中表现出疗效确凿、副作用小的特点,这与其所含有的植物雌激素成分密切相关。中药植物雌激素是中药含有的一类结构与功效与内源性雌激素相似的天然杂环多酚类化合物,其效应在基础和临床研究中引起了人们的极大关注。在经典核雌激素受体介导功能的基础上,G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)是近年来发现的一种新型膜雌激素受体,在雌激素或植物雌激素发挥作用过程中也具有重要的介导作用。本文拟对GPER的结构与定位、植物雌激素类中药活性成分及其由GPER介导的药效作用途径进行综述,为中药植物雌激素类活性成分的实验研究及临床应用提供参考和思路。

关键词：植物雌激素中药活性成分 GPER 雌激素受体

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四物合剂干预顺铂作用卵巢颗粒细胞E_2分泌水平的实验研究

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环球中医药 2017年第4期10卷 447-451页

作者：武虹波赵丕文孙丽萍蔡欣悦赵笛杨蕾卢迪北京中医药大学生命科学学院硕士研究生100029

目的探讨四物合剂对顺铂损伤后颗粒细胞分泌E2水平的影响。方法取10只22~24天SD雌性大鼠卵巢颗粒细胞培养,另取48只22~24天SD雌鼠随机分为生理对照组、模型组、阳性组、四物合剂大、中、小剂量组,每组8只,以生理盐水(生理对照组与模型组... 详细信息

目的探讨四物合剂对顺铂损伤后颗粒细胞分泌E2水平的影响。方法取10只22~24天SD雌性大鼠卵巢颗粒细胞培养,另取48只22~24天SD雌鼠随机分为生理对照组、模型组、阳性组、四物合剂大、中、小剂量组,每组8只,以生理盐水(生理对照组与模型组,0.5 mL/天),戊酸雌二醇片阳性组(0.4 mg/kg·d),四物合剂大剂量组(13.5 mL/kg·d)、中剂量组(6.75 mL/kg·d)、小剂量组(3.38 mL/kg·d)分别灌胃3天后取药理血清。颗粒细胞用含20%药理血清的细胞培养液分别培养24小时后检测指标。MTT法观察药理血清对顺铂损伤后原代颗粒细胞增殖的影响;放射免疫法观测四物合剂药理血清对顺铂作用颗粒细胞E_2分泌的干预效果;免疫组化法检测四物合剂药理血清对顺铂作用颗粒细胞CYP19a1基因表达和Smad2/3激活的干预效果。结果 MTT法检测结果表明:与模型组相比,阳性组、四物合剂各剂量组细胞吸光度均增强,四物合剂大剂量数值最高(P<0.01);放免法检测结果表明,四物合剂药理血清对E2的分泌有促进作用,且大剂量效果最明显(P<0.05);免疫组化法结果表明,四物合剂药理血清可以提高CYP19a1基因、Smad2/3蛋白、Psmad2/3蛋白的表达,其中大剂量作用明显(P<0.01)。结论四物合剂药理血清对顺铂作用后的颗粒细胞E_2的分泌水平有改善作用,但可能还不能起到完全修复的作用,还需进一步的实验观察。

关键词：卵巢颗粒细胞顺铂四物合剂雌二醇

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丹参酮ⅡA抗乳腺癌T47D细胞增殖效应及其分子机制的研究

丹参酮ⅡA抗乳腺癌T47D细胞增殖效应及其分子机制的研究

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中国中西医结合学会第四届实验医学专业委员会第十三次学术研讨会

作者：臧金凤陈梦武虹波赵笛徐道立杨颖牛建昭赵丕文北京中医药大学基础医学院

目的研究丹参酮ⅡA对乳腺癌T47D细胞增殖的影响及其可能的分子作用机制。方法正常T47D细胞和应用GPER SiRNA转染构建GPER基因沉默的T47D细胞,分别采用MTT法和流式细胞技术测定不同剂量丹参酮ⅡA对T47D细胞增殖速率和增殖周期分布的影响... 详细信息

目的研究丹参酮ⅡA对乳腺癌T47D细胞增殖的影响及其可能的分子作用机制。方法正常T47D细胞和应用GPER SiRNA转染构建GPER基因沉默的T47D细胞,分别采用MTT法和流式细胞技术测定不同剂量丹参酮ⅡA对T47D细胞增殖速率和增殖周期分布的影响。采用Western blot方法测定丹参酮ⅡA对T47D细胞中的G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、细胞周期蛋白(Cyclin)D表达情况的影响。结果 1×10mol/L雌二醇能够明显促进乳腺癌鳞癌T47D细胞增殖,加入ER受体拮抗剂ICI182 780促增殖作用受到明显抑制。而5×10 mol/L、1×10mol/L、5×10mol/L和1×10mol/L丹参酮ⅡA能够显著抑制乳腺癌鳞癌T47D细胞增殖,该抑制作用可被ER拮抗剂ICI182 780增强。丹参酮ⅡA作用于GPER基因沉默的T47D细胞,该细胞表现出更为明显的生长抑制效应。Western blot检测结果显示5×10mol/L、1×10mol/L、5×10mol/L和1×10 mol/L丹参酮ⅡA可使T47D细胞中GPER、p-ERK、Cyclin D蛋白表达水平显著降低。结论丹参酮ⅡA具有抑制乳腺癌鳞癌T47D细胞增殖的作用,且该抑制效应是通过靶细胞雌激素受体途径实现的;并通过降低GPER、pERK、cyclinD表达量发挥抗增殖作用。

关键词：丹参酮ⅡA 乳腺癌T47D细胞雌激素受体细胞增殖 GPER、磷酸化细胞外信号调节激酶细胞周期蛋白D 基因沉默

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羟基红花黄色素A对雌激素效应相关蛋白表达的影响

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湖南中医药大学学报 2017年第11期37卷 1218-1221页

作者：陈梦赵丕文孙丽萍武虹波赵笛北京中医药大学中医学院北京100029

目的探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)对雌激素效应相关蛋白表达的影响。方法培养雌激素受体阳性细胞T47D和特异性雌激素受体(estrogen receptor,ER)阴性细胞SK-BR-3,将1×10^(-7)mol/L^(-1)×10^(-9)mol/L三种梯度浓度的HSYA作用于两种细胞,通过蛋白质免疫印迹法检测雌激素受体ERα及ERβ、细胞外调解蛋白激酶1/2(ERK1/2)及p-ERK1/2、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、抑癌基因P27等蛋白的表达情况。结果与空白对照组相比,在T47D细胞中,高浓度的HSYA促进了ERα、ERβ、ERK1/2、p-ERK1/2、PR的表达,抑制了P27的表达(P0.05)。结论 HSYA在细胞内影响雌激素效应相关蛋白的表达情况不同,可能是通过调节ER表达及激活ERK信号通路而发挥雌激素样作用。

关键词：羟基红花黄色素A Western Blot T47D细胞 SK-BR-3细胞

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二仙汤对顺铂所致大鼠卵巢早衰模型中卵巢颗粒细胞增殖及周期的影响

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环球中医药 2017年第2期10卷 131-136页

作者：赵笛赵丕文武虹波蔡欣悦孙丽萍陶仕英牛建昭卢迪齐明月北京中医药大学基础医学院硕士研究生100029

目的观察二仙汤对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞增殖及细胞周期的影响。方法以不同剂量的二仙汤药理血清作用于体外培养的顺铂损伤卵巢颗粒细胞,并以正常药理血清为空白对照,戊酸雌二醇药理血清为阳性对照,同时对比加入PI3K/AKT通路的抑制剂... 详细信息

目的观察二仙汤对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞增殖及细胞周期的影响。方法以不同剂量的二仙汤药理血清作用于体外培养的顺铂损伤卵巢颗粒细胞,并以正常药理血清为空白对照,戊酸雌二醇药理血清为阳性对照,同时对比加入PI3K/AKT通路的抑制剂LY294002后各组的变化。MTT法检测各组药理血清作用于卵巢颗粒细胞24小时、48小时和72小时的增殖情况。流式细胞术检测各组中细胞周期各时相的变化。结果 (1)二仙汤对顺铂损伤后的卵巢颗粒细胞具有增殖促进作用(P<0.05);且对于顺铂损伤后并给予LY294002抑制剂的颗粒细胞也具有增殖改善作用(P<0.05)。(2)二仙汤各剂量组及戊酸雌二醇组均能使处于S期的顺铂损伤颗粒细胞比例显著增多,G_0/G_1期细胞相对比例减少(P<0.01),且增殖指数升高(P<0.01)。结论二仙汤对卵巢颗粒细胞增殖有显著促进作用,其作用机制可能是激活或增强AKT信号通路,抑制细胞凋亡,从而促进细胞增殖;另一方面,也可能是通过促进颗粒细胞从G_0期向S期转化,增加S期细胞比率来实现的。

关键词：二仙汤卵巢早衰卵巢颗粒细胞细胞增殖细胞周期

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罐疗适宜病症详探

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针灸临床杂志 2013年第7期29卷 66-70页

作者：余楠楠武虹波刘佩东陈泽林郭义天津中医药大学天津300193 天津中医药大学针灸标准化研究所天津300193

目的:总结罐疗的适宜病症,以指导临床更好地应用该疗法。方法:采用回顾性期刊文献系列研究,检索中国知网(CNKI)中国期刊全文数据库、维普(VIP)中文科技期刊全文数据库、万方数据库、中国生物医学文献数据库4个数据库的罐疗临床研究文献... 详细信息

目的:总结罐疗的适宜病症,以指导临床更好地应用该疗法。方法:采用回顾性期刊文献系列研究,检索中国知网(CNKI)中国期刊全文数据库、维普(VIP)中文科技期刊全文数据库、万方数据库、中国生物医学文献数据库4个数据库的罐疗临床研究文献,统计罐疗治疗疾病的文献频次、病例总数,按照世界卫生组织关于疾病和有关健康问题的国际统计分类(ICD10)对疾病进行分类,并运用循证医学的原则和方法对文献进行分析。结果:检出有效文献3 987篇,共计病例409 679例,共涉及20大类系统,456个病种。结论:罐疗的适宜病症广,值得推广,特别是对第三横突综合征、肌筋膜炎、肩关节周围炎、颈椎病、双侧膝骨性关节炎、腰痛、神经根性颈椎病、面神经麻痹、感冒、支气管哮喘、带状疱疹、痤疮、咳嗽、落枕有明显的治疗优势。

关键词：拔罐罐疗适宜病症疾病谱针灸

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