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活性氧（ROS）对小鼠胚胎胚细胞数及分裂指数的影响

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活性氧（ROS）对小鼠胚胎胚细胞数及分裂指数的影响

作者：柳海星延边大学

学位级别：硕士

为了弄清哺乳动物早期胚胎体外发育阻滞的机制，人们不断地从胚胎内部以及外界环境中寻找原因。目前已经发现，损伤的细胞中含有较多的各类氧化物，包括过氧化氢以及其它自由基(例如过氧化物阴离子和氢氧根离子);在因细胞分裂阻断以及... 详细信息

为了弄清哺乳动物早期胚胎体外发育阻滞的机制，人们不断地从胚胎内部以及外界环境中寻找原因。目前已经发现，损伤的细胞中含有较多的各类氧化物，包括过氧化氢以及其它自由基(例如过氧化物阴离子和氢氧根离子);在因细胞分裂阻断以及细胞功能丧失所引起的异常细胞中也含有这些活性氧类(ROS)物质。本试验以昆明小鼠1-细胞期胚胎为实验对象，以CZB培养液为基础液在不同发育阶段添加外源性ROS，培养至桑椹胚、早期囊胚、囊胚、扩张囊胚阶段，分别观察胚胎的胚细胞数、分裂指数的变化。从细胞水平上进一步证明外源性ROS是否对哺乳动物早期胚胎有影响。实验结果表明：1、体内发育的桑椹胚、早期囊胚、囊胚、扩张囊胚的每一胚胎平均细胞数分别为22.54、35.49、36.93、46.78其分裂指数分别为5.85、4.64、2.16、4.96;在CZB培养液中培养的每一胚胎平均细胞数分别为18.03、25.30、29.13、45.68其分裂指数分别为6.26、5.08、2.77、3.03。经统计分析体内桑椹胚、早期囊胚、囊胚的每一胚胎平均细胞数与体外桑椹胚、早期囊胚、囊胚的每一胚胎平均细胞数有显著差异;扩张囊胚的体内，体外每一胚胎平均细胞数没有显著差异。另外体内、外各时期胚胎的分裂指数均无显著差异。 2、早期囊胚的12-24h处理组和36-48h处理组的每一胚胎平均细胞数与0-72h处理组有显著差异;扩张囊胚0-72h处理组的分裂指数与0-12h处理组和24-36h处理组有显著差异，其它各组的胚细胞数和分裂指数均无差异。这就说明虽然胚胎在体外培养时期2-细胞期胚胎(0～12h处理组)对外源性HO最敏感，也最容易发生发育阻滞。但是经HO处理之后渡过2-细胞期阻滞的胚胎能在以后的发育中发生补偿性生长，其胚细胞数和分裂指数都和体外正常发育的胚胎没有差异。

关键词：活性氧(ROS) 胚细胞数分裂指数

季节对延边黄牛卵母细胞质量及体细胞核移植胚胎发育的影响

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中国兽医学报 2012年第12期32卷 1896-1900页

作者：尹多柳海星李钟淑许相勋方南洙延边大学农学院吉林延吉133000 吉林省蛟河市职业教育中心吉林蛟河132500

研究季节对延边黄牛卵巢质量和卵母细胞的数量、质量、体外成熟以及核移植重组胚发育的影响。持续1年采集延边黄牛卵巢,分级卵巢,抽取卵巢表面直径2～8 mm的卵泡内的卵母细胞,收集后进行体外成熟和重组胚的体外培养。结果表明,1级卵巢... 详细信息

研究季节对延边黄牛卵巢质量和卵母细胞的数量、质量、体外成熟以及核移植重组胚发育的影响。持续1年采集延边黄牛卵巢,分级卵巢,抽取卵巢表面直径2～8 mm的卵泡内的卵母细胞,收集后进行体外成熟和重组胚的体外培养。结果表明,1级卵巢的比例在春冬季时明显高于秋季(P0.05);卵裂率上,秋季与春季有差异(P0.05),囊胚率上,各组之间均无显著差异(P>0.05)。通过研究发现,季节对延边黄牛卵母细胞的可用回收数量及其质量都会产生影响且秋季为延边黄牛体细胞核移植实验最适合季节。

关键词：季节卵母细胞质量体外成熟核移植牛

甘氨酸对H_2O_2诱导氧化应激的小鼠胚胎抗氧化能力的影响

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中国畜牧杂志 2018年第8期54卷 61-65页

作者：周晶柳海星李钟淑方南洙延边大学农学院吉林延边133000

本实验旨在探究甘氨酸(Gly)对H_2O_2诱导氧化应激的小鼠胚胎抗氧化能力的影响。实验分为对照组、H_2O_2处理组和H_2O_2+Gly处理组,对照组胚胎不经H_2O_2处理培养于M16培养液中;其他2组胚胎均置于25μmol/L的H_2O_2中孵育30 min,然后,H_2... 详细信息

本实验旨在探究甘氨酸(Gly)对H_2O_2诱导氧化应激的小鼠胚胎抗氧化能力的影响。实验分为对照组、H_2O_2处理组和H_2O_2+Gly处理组,对照组胚胎不经H_2O_2处理培养于M16培养液中;其他2组胚胎均置于25μmol/L的H_2O_2中孵育30 min,然后,H_2O_2处理组和H_2O_2+Gly处理组分别在M16培养液和最佳浓度Gly的培养液中进行培养。通过2',7'-二氯荧光素二乙酸盐(DCHFDA)法测定胚胎内部的活性氧水平和巢式PCR法检测内源抗氧化酶基因的表达。结果表明:胚胎经不同浓度Gly处理后,4 mmol/L Gly处理组的4-cell发育率(P>0.05)和囊胚发育率(P0.05)。综上可知,添加Gly可以有效提高胚胎的抗氧化能力,在胚胎体外培养过程中添加Gly的最适宜浓度为4 mmol/L。

关键词：甘氨酸小鼠胚胎内源抗氧化酶氧化应激抗氧化能力

金属螯合剂对延边黄牛体细胞核移植重组胚发育的影响

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中国兽医学报 2012年第10期32卷 1566-1568页

作者：尹多柳海星李钟淑许相勋方南洙延边大学农学院吉林延吉133002 吉林省蛟河市职业教育中心吉林蛟河132500

由于在核移植试验中,所用的水和化学物质都不可避免的会被一些金属离子轻微污染,造成胚胎内抗氧化物和过氧化物之间难以保持平衡,从而导致胚胎发育率降低,本试验以此为出发点,探讨了在延边黄牛体细胞核移植重组胚早期培养液中添加乙二... 详细信息

由于在核移植试验中,所用的水和化学物质都不可避免的会被一些金属离子轻微污染,造成胚胎内抗氧化物和过氧化物之间难以保持平衡,从而导致胚胎发育率降低,本试验以此为出发点,探讨了在延边黄牛体细胞核移植重组胚早期培养液中添加乙二胺四乙酸钠(EDTA-Na)和柠檬酸钠(sodium citrate)2种金属螯合剂类抗氧化剂,对其后续发育的影响,以期筛选出最佳的体外培养条件。结果表明:适合延边黄牛体细胞核移植重组胚后期发育的EDTA-Na和柠檬酸钠的最佳浓度分别为50μmol/L和0.6mmol/L。

关键词：金属螯合剂抗氧化剂延边黄牛重组胚体细胞核移植

bFGF对氧化应激状态下小鼠卵母细胞糖代谢能力的影响

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延边大学农学学报 2022年第1期44卷 57-62页

作者：李瑞冬方南洙金庆国柳海星李钟淑延边大学农学院吉林延吉133002

为研究bFGF对氧化应激状态下小鼠卵母细胞糖代谢水平的影响,以6~8周的雌性昆明小鼠为试验材料,获取的卵母细胞分别在正常培养液(正常组),含有250μmol/L过氧化氢(过氧化氢组)、150 ng/L bFGF+250μmol/L过氧化氢(抗氧化组)的培养液中培... 详细信息

为研究bFGF对氧化应激状态下小鼠卵母细胞糖代谢水平的影响,以6~8周的雌性昆明小鼠为试验材料,获取的卵母细胞分别在正常培养液(正常组),含有250μmol/L过氧化氢(过氧化氢组)、150 ng/L bFGF+250μmol/L过氧化氢(抗氧化组)的培养液中培养20 h,结果表明:正常组、过氧化氢组以及抗氧化组3组细胞中的ROS、MDA、8OHdG水平面之间均有显著差异(P<0.05),同理3组细胞中的GSH、线粒体膜电位以及能荷水平间均具有显著差异(P<0.05),通过细胞糖代谢途径中关键酶的活性结果显示,过氧化氢组指标hk,pk,6-pfk酶活性显著高于其他2组(P<0.05),对照组与抗氧化组差异不显著,pdk1酶活性则相反。试验结果表明,bFGF对氧化应激状态下的卵母细胞有保护作用并且能够调节糖代谢能力,从而提高卵母细胞质量。

关键词：雌性昆明小鼠 bFGF 卵母细胞氧化应激糖代谢

研究生“现代动物育种学”课程中情境教学的原则与应用

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黑龙江畜牧兽医 2018年第4期 222-224页

作者：戢爽李钟淑金庆国柳海星延边大学农学院

研究生课堂教学质量是保障研究生培养质量的关键环节,＂现代动物育种学＂是畜牧学科硕士研究生阶段必修的一门专业课,主要讲授家畜育种的基本理论并能运用所学理论指导育种实践的一门课程,笔者结合＂现代动物育种学＂课程特点,改革传统... 详细信息

研究生课堂教学质量是保障研究生培养质量的关键环节,＂现代动物育种学＂是畜牧学科硕士研究生阶段必修的一门专业课,主要讲授家畜育种的基本理论并能运用所学理论指导育种实践的一门课程,笔者结合＂现代动物育种学＂课程特点,改革传统教学方法,引入情境式教学,阐述情境教学在＂现代动物育种学＂课程中应遵循的原则及应用基本途径。

关键词：研究生 “现代动物育种学” 情境教学原则应用

活性氧(ROS)对小鼠早期胚胎染色体相对长度的影响

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黑龙江畜牧兽医 2006年第12期 7-10页

作者：李钟淑高见红方南洙金庆国柳海星延边大学农学院延边大学农学院吉林龙井133400

通过对小鼠体内发育的囊胚、扩张囊胚和从1-细胞期取出在CZB培养液中培养的囊胚、扩张囊胚的染色体相对长度进行统计分析,在各号染色体相对长度出现显著性差异的同时,发现体外培养的比体内发育的染色体相对长度短;体外CZB培养的不同时... 详细信息

通过对小鼠体内发育的囊胚、扩张囊胚和从1-细胞期取出在CZB培养液中培养的囊胚、扩张囊胚的染色体相对长度进行统计分析,在各号染色体相对长度出现显著性差异的同时,发现体外培养的比体内发育的染色体相对长度短;体外CZB培养的不同时期添加外源性过氧化氢,发育至囊胚、扩张囊胚阶段,制作胚胎标本,观察胚胎的染色体相对长度。结果表明:不同时期添加外源性过氧化氢组比对照组的染色体相对长度短。说明经过氧化氢处理之后存活下来的胚胎染色体相对长度发生了变化。

关键词：活性氧(ROS) 早期胚胎相对长度

GSH和过氧化氢对小鼠早期胚胎体外发育的影响

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延边大学农学学报 2010年第4期32卷 281-284页

作者：柳海星延边大学农学院动物科学系

研究活性氧(ROS)-过氧化氢和抗氧化剂-还原型谷胱甘肽(GSH)对小鼠2-细胞期胚胎体外发育的影响.用含有不同浓度H2O2的mSOF液培养小鼠胚胎,从H2O2浓度0.14 mg/L组开始的囊胚发育率显著低于对照组和其它组(P<0.05);以mSOF液为基础液,在添加... 详细信息

研究活性氧(ROS)-过氧化氢和抗氧化剂-还原型谷胱甘肽(GSH)对小鼠2-细胞期胚胎体外发育的影响.用含有不同浓度H2O2的mSOF液培养小鼠胚胎,从H2O2浓度0.14 mg/L组开始的囊胚发育率显著低于对照组和其它组(P<0.05);以mSOF液为基础液,在添加0.14 mg/L H2O2的基础上分别添加不同浓度的GSH,阳性对照组的囊胚发育率显著高于阴性对照组(P<0.05);在添加外源性H2O2(0.14 mg/L)的情况下,随着GSH浓度的增加其囊胚发育率也显著增加.结果表明,H2O2可诱导小鼠2-细胞期胚胎体外发育的阻滞,GSH可阻止H2O2对小鼠2-细胞期胚胎的抑制效果.

关键词：过氧化氢胚胎体外发育阻滞谷胱甘肽

半胱氨酸对氧化损伤小鼠胚胎抗氧化能力的影响

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黑龙江畜牧兽医 2017年第17期 33-36+286页

作者：徐礼杰柳海星李钟淑方南洙延边大学农学院动物科学系

为了进一步了解活性氧(ROS)、半胱氨酸(Cys)与胚胎体外发育之间的关系,通过H2O2建立小鼠胚胎氧化损伤模型,采用2’,7’-二氯荧光素二乙酸盐(DCHFDA)法测定胚胎内部ROS水平,半定量PCR法测定小鼠胚胎内部NADPH氧化酶基因的表达。结果表明... 详细信息

为了进一步了解活性氧(ROS)、半胱氨酸(Cys)与胚胎体外发育之间的关系,通过H2O2建立小鼠胚胎氧化损伤模型,采用2’,7’-二氯荧光素二乙酸盐(DCHFDA)法测定胚胎内部ROS水平,半定量PCR法测定小鼠胚胎内部NADPH氧化酶基因的表达。结果表明:胚胎经不同浓度半胱氨酸处理后,0.4 mmol/L半胱氨酸处理组的4-细胞率和囊胚率都显著比对照组高(P<0.05);氧化损伤胚胎经0.4 mmol/L半胱氨酸处理后,胚胎发育率显著高于H2O2处理组(P<0.05);DCHFDA法检测发现,H2O2+Cys处理组的ROS水平显著比H2O2处理组低(P<0.05);H2O2上调Nox3、Noxo1基因的表达(P<0.05),半胱氨酸下调Nox3、Noxo1基因的表达(P<0.05)。说明胚胎培养的最佳半胱氨酸添加浓度为0.4 mmol/L;半胱氨酸有效抑制NADPH氧化酶的活性,提高氧化损伤胚胎的抗氧化能力,利于胚胎发育。

关键词：半胱氨酸(Cys) 活性氧(ROS) NADPH氧化酶氧化损伤抗氧化作用