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生物活性复合膜材料修复牙周组织缺损

生物活性复合膜材料修复牙周组织缺损

作者：林泓兵吉林大学

学位级别：硕士

牙周炎是牙周组织的感染性疾病，可引起牙齿支持组织（牙龈、牙周膜、牙槽骨和牙骨质）的破坏，是导致牙齿缺失的最主要原因。理想的牙周治疗效果是消除牙周局部炎症，阻止疾病进程，促进牙周组织再生修复，重建牙周组织生理结构和功能... 详细信息

牙周炎是牙周组织的感染性疾病，可引起牙齿支持组织（牙龈、牙周膜、牙槽骨和牙骨质）的破坏，是导致牙齿缺失的最主要原因。理想的牙周治疗效果是消除牙周局部炎症，阻止疾病进程，促进牙周组织再生修复，重建牙周组织生理结构和功能。如何达到理想的牙周治疗效果，一直是临床治疗中的难题，也是基础研究的热点。近年来组织工程（tissueengineering）学的迅速发展为治疗牙周组织缺损，实现再生修复提供了新思路，日益受到人们的重视。组织工程学将工程学与生命科学相结合，将人工合成的支架材料与体外培养的功能相关的高浓度细胞复合，体外培养一段时间后植入病损部位，修复组织缺损，达到结构和功能的重建。组织工程学研究包括三方面：种子细胞、支架材料和生长因子。牙周组织再生的基础是牙周膜细胞（periodontal ligament cells，PDLCs），但在牙周病损部位，由于炎症的影响，PDLCs数量少、活性低，不能较理想地重建牙周组织生理结构和功能。在牙周治疗术后，牙龈上皮生长最快，形成的长结合上皮妨碍新附着形成。引导组织再生术（guidedtissue regeneration，GTR）是目前临床上常用的获得牙周组织再生的手术治疗方法，利用膜性材料作为屏障，阻挡牙龈上皮在愈合过程中沿根面生长，并为PDLCs优先占领根面提供一定的空间，形成新附着性愈合，使牙周组织再生。GTR的关键是膜性材料，近年来聚乳酸/聚羟基乙酸共聚体（polylactic-co-glycolic acid，PLGA）和胶原（collagen，Co）因生物相容性良好、无细胞毒性，常被作为支架材料应用于GTR。血小板生长因子是牙周膜再生最有效的因子，是成纤维细胞和成骨细胞潜在的丝裂原和趋化因子，富血小板血浆（platelet-rich plasma，PRP）中含有大量的血小板生长因子。基于上述，本实验将PDLCs、Co、PLGA与PRP用于修复大鼠牙周组织缺损，观察其作用效果。方法：合成PLGA膜，厚度约0.5mm，剪裁成5mm×2mm的细条，将人PDLCs与PLGA膜体外共培养3天。将厚度为0.30-0.69mm的Co膜剪裁成7mm×4mm，用于覆盖缺损表面。抽取大鼠全血10ml制作PRP。将60只6-8周，体重为160g-180g的成年雄性Wistar大鼠随机分为五组，制作单侧下颌5mm×2mm牙槽骨缺损模型。A组为空白对照;B组为PLGA+Co组;C组为PLGA+PRP+Co组;D组为PLGA+PDLCs+Co组;E组为PLGA+PDLCs+PRP+Co组。术后2周、4周、6周每组分别处死4只大鼠，取下颌牙槽骨标本，H-E染色，观察牙周组织缺损修复效果。结果：1、本实验第一部分制作的PLGA膜，PLA/PGA比例为75∶25、平均孔径为131.80±43.97μm、孔隙率为60%，既能保证材料的机械强度，又能使支架材料在术后6周左右基本降解完成;2、PDLCs黏附生长于PLGA膜上，并长入孔隙中，PDLCs伸展性良好，多伸出伪足附于支架上，有的细胞表面有白色钙质颗粒;3、B、C、D、E组牙周新生骨量优于A组，有统计学意义（p＜0.05）;E组牙周新生骨量优于C、D组，C、D组牙周新生骨量优于B组，均具有统计学意义（p＜0.05）;C、D组间比较无统计学意义（p＞0.05）。结论：1、本实验制作的PLGA膜，孔径大小适宜，具有良好的机械性能;2、PLGA生物相容性良好，无细胞毒性，是牙周组织工程的理想支架材料;3、PLGA+PDLCs+PRP+Co生物活性复合膜材料具有显著的促进牙周组织生长的作用，特别对修复牙周骨组织缺损有显著作用，优于单独使用PRP或PDLCs的作用。本研究的创新点在于首次将PDLCs、PLGA、Co和PRP联合应用修复牙周组织缺损，并得出PLGA+PDLCs+PRP+Co生物活性复合膜材料具有显著的促进牙周组织生长的作用，为今后进一步的临床实验提供理论基础。

关键词：牙周膜细胞胶原聚乳酸/聚羟基乙酸共聚体富血小板血浆牙周组织再生

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小型猪牙周膜细胞原代培养及鉴定

吉林大学学报（医学版） 2011年第3期37卷 475-478,I0004页

作者：赵斌申玉芹林崇韬林泓兵吉林大学口腔医院牙周病科吉林长春130021

目的:体外分离培养小型猪牙周膜细胞,为建立小型猪体内实验动物模型及进行牙周组织再生的研究奠定实验基础。方法:无菌拔除小型猪上下颌4颗切牙及4颗尖牙,采用组织块法原代培养小型猪牙周膜细胞并传代,绘制生长曲线,通过形态学和免疫组... 详细信息

目的:体外分离培养小型猪牙周膜细胞,为建立小型猪体内实验动物模型及进行牙周组织再生的研究奠定实验基础。方法:无菌拔除小型猪上下颌4颗切牙及4颗尖牙,采用组织块法原代培养小型猪牙周膜细胞并传代,绘制生长曲线,通过形态学和免疫组织化学染色方法对其进行鉴定。结果:组织块法成功培养小型猪牙周膜细胞,培养成功率为50%,其中切牙培养的成功率高达100%,尖牙培养成功率为0。细胞生长良好,呈梭形或多角形,免疫组织化学鉴定细胞抗波形丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性,为中胚层来源的细胞。结论:小型猪的牙周膜细胞可成功培养,切牙的培养成功率较高,有望为牙周组织再生研究提供有用的细胞来源,小型猪牙周膜细胞可作为体内实验动物模型。

关键词：小型猪牙周膜细胞细胞培养组织块法

人CYP17基因启动子5'上游-34碱基处T→C突变与复发性流产

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现代妇产科进展 2010年第11期19卷 813-815,819页

作者：林泓兵张家颖翟颖仙吉林大学白求恩医学院长春130021

目的:探讨人类CYP17基因启动子5'上游-34碱基处T→C突变与复发性流产的关系,以期为预防和治疗该病易感人群提供新思路。方法:采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,针对CYP17基因启动子5'上游-34碱基处的多态性,检测9... 详细信息

目的:探讨人类CYP17基因启动子5'上游-34碱基处T→C突变与复发性流产的关系,以期为预防和治疗该病易感人群提供新思路。方法:采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,针对CYP17基因启动子5'上游-34碱基处的多态性,检测96例患有原因不明复发性流产患者(病例组)和102例有生育史的健康女性(对照组),并用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法进一步验证,且采用测序方法证实实验结果。结果:病例组和对照组CYP17基因启动子5'上游-34碱基处T和C的分布差异有统计学意义(χ2=8.188,P<0.05),CYP17基因各基因型分布差异有统计学意义(χ2=10.096,P<0.05)。杂合突变(T/C)基因型和纯合突变(C/C)基因型患复发性流产的危险度较野生(T/T)基因型分别提高了0.424和0.271倍。结论:人CYP17基因启动子5'上游-34碱基处T→C突变与中国东北地区人群复发性流产有关,C等位基因可能是复发性流产的遗传易感因素之一。

关键词：复发性流产人类CYP17基因启动子5'上游-34碱基处T→C突变聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性

牙周膜干细胞与炎症微环境相互作用的主要生物学机制概述（英文）

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Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology) 2023年第5期 373-387页

作者：赵雪涛林泓兵丁瞳王亚玮柳娜申玉芹吉林大学口腔医院牙周科吉林省牙发育及颌骨重塑与再生重点实验室广州医科大学附属口腔医院牙周科广州市口腔再生医学基础与应用研究重点实验室

牙周炎是一种复杂的慢性炎症性疾病，在此过程中病原体的入侵导致了炎症微环境的发生。细胞的生物学性质在炎症微环境的作用下发生改变，同时又可以通过分泌细胞因子对牙周组织的炎症微环境进行调节。研究证明，牙周膜干细胞在牙周疾病... 详细信息

牙周炎是一种复杂的慢性炎症性疾病，在此过程中病原体的入侵导致了炎症微环境的发生。细胞的生物学性质在炎症微环境的作用下发生改变，同时又可以通过分泌细胞因子对牙周组织的炎症微环境进行调节。研究证明，牙周膜干细胞在牙周疾病过程中至关重要。此外，牙周膜干细胞被证明是在牙周组织再生过程中最有效的干细胞类型。本综述关注在炎症微环境影响下，牙周膜干细胞生物学性质、成骨分化能力以及药物对细胞的影响等方面，有利于进一步理解上述因素对牙周组织稳态的影响。另外，我们还对牙周膜干细胞影响炎症微环境的相关机制进行了讨论。

关键词：炎症微环境炎症调节成骨分化牙周膜干细胞牙周炎

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人参多糖免疫调节作用研究进展

新乡医学院学报 2021年第9期38卷 890-892,896页

作者：张佩佩申玉芹林泓兵陈朕陈慧珊田悦吉林大学口腔医学院牙周科吉林长春130021

人参是五加科人参属的干燥根,是一种具有多种药理活性的传统药材。人参多糖是人参的重要组成部分,主要包括阿拉伯半乳聚糖、果胶和酸性多糖,具有抗菌、抗氧化、抗炎、抗抑郁、抗肿瘤等多种药理作用。现代研究发现,人参多糖可以通过调节... 详细信息

人参是五加科人参属的干燥根,是一种具有多种药理活性的传统药材。人参多糖是人参的重要组成部分,主要包括阿拉伯半乳聚糖、果胶和酸性多糖,具有抗菌、抗氧化、抗炎、抗抑郁、抗肿瘤等多种药理作用。现代研究发现,人参多糖可以通过调节多种免疫细胞活性,改变细胞因子表达,调控免疫分子水平,在机体的固有免疫和获得性免疫中发挥重要作用。本文就人参多糖在免疫调节方面的研究进展进行综述,旨在为人参及其制品的研究和临床应用提供依据。

关键词：人参多糖免疫细胞细胞因子免疫分子免疫调节

生物活性复合膜对大鼠牙周组织缺损的修复作用

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吉林大学学报（医学版） 2013年第5期39卷 888-892,I0002页

作者：林泓兵赵斌丁子清任春霞林崇韬吉林大学口腔医院牙周病科吉林长春130021

目的:联合应用胶原(Co)、聚乳酸/聚羟基乙酸共聚体(PLGA)、牙周膜细胞(PDLCs)和血小板胶(APG)制作生物活性复合膜,评价其对大鼠牙周组织缺损的修复效果。方法:合成厚度约0.5mm的PLGA膜,与PDLCs体外共培养3d。扫描电镜观察PLGA结构及PDLC... 详细信息

目的:联合应用胶原(Co)、聚乳酸/聚羟基乙酸共聚体(PLGA)、牙周膜细胞(PDLCs)和血小板胶(APG)制作生物活性复合膜,评价其对大鼠牙周组织缺损的修复效果。方法:合成厚度约0.5mm的PLGA膜,与PDLCs体外共培养3d。扫描电镜观察PLGA结构及PDLCs生长情况。选取1只成年雄性Wistar大鼠,抽取全血10mL制作富血小板血浆(PRP)1mL,加入含有1 000U·mL-1牛凝血酶的10%CaCl2溶液制成APG。应用酶联免疫吸附法测定全血和PRP中生长因子水平。将60只成年雄性Wistar大鼠随机分为5组,分别制作大鼠下颌牙周骨缺损模型(5mm×2mm,去除根面牙骨质)。各组按置入材料不同命名为对照组、PLGA+Co组、PLGA+APG+Co组、PLGA+PDLCs+Co组和PLGA+PDLCs+APG+Co组。术后2、4和6周每组分别处死4只大鼠,HE染色观察新生牙周骨量,应用Image-Pro Plus测量新生牙周骨面积。结果:PLGA膜平均孔径为(131.80±43.97)μm,孔隙率为60%;PDLCs能在PLGA膜上黏附生长、状态良好。PRP中血小板浓度高达全血的4倍以上,PRP上清液中生长因子水平高于血浆(P0.05)。结论:PLGA膜生物相容性良好,孔径大小适宜,具有良好的机械性能;PLGA+PDLCs+APG+Co生物活性复合膜能促进牙周组织生长,对牙周骨组织缺损修复具有显著作用。

关键词：牙周膜细胞胶原聚乳酸聚羟基乙酸共聚体富血小板血浆牙周组织再生

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中西医结合口腔雾化剂的临床研究

中国临床研究 2013年第10期26卷 1114-1115页

作者：韩亚萍张洪伟林泓兵一汽总医院口腔科长春市130011

目的观察复方莲柏雾化剂以雾化吸入作为给药方式治疗复发性阿弗他溃疡(recurrent aphtha ulcer,RAU)的疗效。方法将276例RAU患者随机分为观察组和对照组,各138例。观察组给予自制复方莲柏雾化剂(成分:莲子心50 g,黄柏150 g,生地200 g,竹... 详细信息

目的观察复方莲柏雾化剂以雾化吸入作为给药方式治疗复发性阿弗他溃疡(recurrent aphtha ulcer,RAU)的疗效。方法将276例RAU患者随机分为观察组和对照组,各138例。观察组给予自制复方莲柏雾化剂(成分:莲子心50 g,黄柏150 g,生地200 g,竹叶150 g,白矾25 g,甘草50 g,硫糖铝)雾化吸入,对照组口服维生素C、维生素B2、奥硝唑。5 d为1疗程,均治疗1个疗程。结果临床追踪观察,3例失访者排除(观察组2例,对照组1例),观察组与对照组总有效率比较差异有统计学意义(88.2%vs 74.5%,P<0.05);经180 d以上随访,观察组治疗后复发周期明显较治疗前和对照组治疗后延长(P均<0.05);治疗后,观察组溃疡大小、溃疡数目、充血程度及疼痛程度与对照组比较明显好转(P均<0.05)。结论复方莲柏雾化剂治疗RAU无毒副作用,方便易行,疗效确切。

关键词：复方莲柏雾化剂导赤散,加减硫糖铝阿弗他溃疡,复发性

碱性成纤维细胞生长因子与牙周组织再生的研究进展

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口腔疾病防治 2022年第10期30卷 757-760页

作者：张佩佩李红艳田悦陈慧珊林泓兵申玉芹吉林大学口腔医院牙周病科吉林长春130021

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)通过改善牙周炎症状态,促进牙周相关干细胞的迁移、增殖,促进血管、牙周膜样组织生成以及在调节骨/牙骨质的形成等方面表现出优越的生物学功能,在牙齿发育、修复和再生中... 详细信息

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)通过改善牙周炎症状态,促进牙周相关干细胞的迁移、增殖,促进血管、牙周膜样组织生成以及在调节骨/牙骨质的形成等方面表现出优越的生物学功能,在牙齿发育、修复和再生中起重要作用。bFGF能够与种子细胞和支架材料联合应用于牙周组织再生,并在多项实验研究中获得验证。然而,bFGF作为药物单独应用于临床治疗的应用方式需要进一步研究。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子炎症控制迁移增殖血管生成牙周膜样组织成骨/成牙骨质牙周组织再生牙周病

Effect of Complex Biomembranes in repairing periodontal tissue defect

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