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Cortactin不同磷酸化位点在模拟气道剪应力作用下对气道黏液分泌的影响

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Cortactin不同磷酸化位点在模拟气道剪应力作用下对气道黏液分泌...

作者：林宇斌遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:探究在模拟最适气道剪应力的作用下Cortactin不同关键磷酸化位点对MUC5AC分泌的影响。方法:(1)构建野生型CTTN的PTSB质粒,通过对CTTN基因(Cortactin gene,皮层肌动蛋白基因)主要关键酪磷酸化位点(Y421、Y470、Y486)进行定点突变,... 详细信息

目的:探究在模拟最适气道剪应力的作用下Cortactin不同关键磷酸化位点对MUC5AC分泌的影响。方法:(1)构建野生型CTTN的PTSB质粒,通过对CTTN基因(Cortactin gene,皮层肌动蛋白基因)主要关键酪磷酸化位点(Y421、Y470、Y486)进行定点突变,将原来酪氨酸残基替换为成丙氨酸(A),模拟相关位点非磷酸化状态。构建重组质粒PTSB02-GFP-CTTN-Y421A、PTSB02-GFP-CTTN-Y470A、PTSB02-GFP-CTTN-Y486A、PTSB02-GFP-CTTN,酶切鉴定并测序。(2)剪应力模拟装置参考Tarran等的实验研究,采用相位运动仪器,通过不断加速/减速交替进行的方式模拟人体呼吸过程中呼气与吸气的交替对气道上皮的剪应力作用。通过对调节加速/减速的时间和频率模拟病理状态下增大的剪应力和呼吸频率。为模拟病理状态下气流对气道上皮细胞的剪应力作用,本实验把加速/减速的参数设置为1.2 s/次,30次/min,作用35 min。(3)人支气管上皮细胞(16HBE)置于37℃、5%CO培养箱中培养,取状态好的细胞以5×10个细胞/孔种于6孔板中,置于37℃、5%CO培养箱中培养,待16HBE细胞生长至汇合度达70%左右时,随机分成6组:组(A)Y421A、组(B)Y470A、组(C)Y486A、组(D)野生型CTTN、组(E)空白质粒阴性对照、组(F)空白对照。使用lipo3000试剂转染16HBE细胞。孵育24 h后施予剪应力刺激,放回培养箱中继续孵育24 h后分析转染细胞,进行相关实验检测。(4)采用蛋白质免疫印迹(Western blotting,WB)检测Cortactin、p-Cortactin Y421、p-Cortactin Y470、p-Cortactin Y486蛋白相对表达水平;采用RT-PCR检测其Cortactin基因mRNA相对表达水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞外MUC5AC的相对分泌量。结果:(1)经基因测序及酶切鉴定,CTTN基因主要磷酸化位点(Y421、Y470、Y486)定点突变成功,成功构建重组质粒(PTSB02-GFP-CTTN-Y421A、PTSB02-GFP-CTTN-Y470A、PTSB02-GFP-CTTNY486A、PTSB02-GFP-CTTN),可用于后续实验。(2)通过Lipo3000试剂转染,荧光显微镜观察提示质粒转染成功,转染效率均达80%以上。(3)荧光定量PCR检测各组细胞中Cortactin基因mRNA的表达水平:与阴性对照及空白对照比较,各组质粒转染组细胞中Cortactin mRNA表达水平明显升高;各质粒转染组之间相比,各组表达Cortactin mRNA表达水平基本相同。(4)ELISA测定各组细胞MUC5AC胞外分泌量:A组中MUC5AC胞外分泌水平显著低于B组、C组、D组,差异均有统计学意义(P0.05),E组与F组,差异无统计学意义(P>0.05)。(5)Western Blotting检测各组细胞中Cortactin蛋白及p-Cortactin Y421、p-Cortactin Y470、p-Cortactin Y486蛋白相对水平:与E、F组比较,A、B、C、D组Cortactin蛋白表达水平明显增高,各质粒转染组之间比较,Cortactin相对表达水平基本相同;与B、C、D组比较,A组p-Cortactin Y421蛋白相对表达显著降低;各组细胞中p-CortactinY470及p-CortactinY486的相对含量与胞外MUC5AC分泌无明显相关性。结论:模拟气道剪应力作用下Cortactin磷酸化位点Y421的磷酸化促进MUC5AC的分泌作用最强;Y470的磷酸化对MUC5AC的分泌有一定促进作用;Y486的磷酸化对MUC5AC的分泌几乎无作用。

关键词：皮层肌动蛋白磷酸化剪应力黏蛋白5AC 定点突变

风湿性二尖瓣置换联合双极射频改良迷宫术的早期疗效分析

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风湿性二尖瓣置换联合双极射频改良迷宫术的早期疗效分析

作者：林宇斌福建医科大学

学位级别：硕士

目的本研究对风湿性二尖瓣病变合并房颤患者的围手术期及随访期间的临床资料进行收集分析,旨在分析风湿性二尖瓣置换联合双极射频改良迷宫术治疗该类疾病的早期疗效。方法选取我院自2017年1月至2020年1月共收治的146例风湿性二尖瓣病变... 详细信息

目的本研究对风湿性二尖瓣病变合并房颤患者的围手术期及随访期间的临床资料进行收集分析,旨在分析风湿性二尖瓣置换联合双极射频改良迷宫术治疗该类疾病的早期疗效。方法选取我院自2017年1月至2020年1月共收治的146例风湿性二尖瓣病变合并房颤患者,根据采取的手术方式分为联合组和对照组,行二尖瓣置换同期联合双极射频改良迷宫术治疗房颤的患者共98例,作为联合组;仅行二尖瓣置换同期未采用双极射频改良迷宫术治疗房颤的患者共48例,作为对照组。全体患者均采用配套手术器械进行体外循环辅助下心内直视的心脏外科手术,通过电子病历系统收集两组患者的围手术期资料,并通过门诊系统、电子病历系统及电话随访等形式收集出院后的临床资料,资料内容包括12导联心电图结果、心脏彩超数据、NYHA心功能指标等,通过统计学方法对二尖瓣置换联合双极射频改良迷宫术治疗风湿性二尖瓣病变合并房颤的早期疗效进行分析。结果联合组98例患者均无术中死亡病例,无术后住院期间死亡,痊愈出院93例,出现术后并发症5例。痊愈出院的93例患者中,手术时间、ICU留置时间及术后住院时间分别为(315.80±45.67)min、(33.60±20.85)h、(16.41±8.38)d;出院时窦性心律患者75例,窦性心律转复率为80.65%;86例患者完成术后有效随访(10.8±2.3)个月,窦性心律患者61例,窦性心律转复率为70.93%;随访期间联合组无III度房室传导阻滞、严重卒中、永久起搏器植入等严重并发症发生。联合组术后有效随访时间(10.8±2.3)月心脏彩超较术前相比,LAD[(45.31±5.93)mm vs(53.35±8.83)mm,P0.05]、ICU留置时间[(33.60±20.85)h vs(31.60±18.65)h,P>0.05]、术后住院时间[(16.41±8.38)d vs(16.85±7.32)d,P>0.05]、围术期并发症的发生率[(5/98)%vs(2/48)%,P>0.05]方面无明显差别,差异无统计学意义。结论对于患有风湿性二尖瓣病变合并房颤患者,采用二尖瓣置换同期联合双极射频改良迷宫术治疗的早期临床疗效可靠,安全可行,窦性心律转复成功率高,心功能及心脏结构改善显著,值得推广应用。

关键词：风湿性二尖瓣病变房颤二尖瓣置换双极射频改良迷宫术早期疗效

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鲜湿米粉中蜡样芽孢杆菌定量风险评估

鲜湿米粉中蜡样芽孢杆菌定量风险评估

作者：林宇斌中南林业科技大学

学位级别：硕士

蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus, Bc)广泛存在于自然界中,如空气、水、灰尘及人和动物的毛发等。易被蜡样芽孢杆菌污染的食品主要有米面类淀粉制品、乳制品、肉制品等,是我国引起食物中毒的主要病原菌之一。Bc能产生抗逆性强的芽孢和高... 详细信息

蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus, Bc)广泛存在于自然界中,如空气、水、灰尘及人和动物的毛发等。易被蜡样芽孢杆菌污染的食品主要有米面类淀粉制品、乳制品、肉制品等,是我国引起食物中毒的主要病原菌之一。Bc能产生抗逆性强的芽孢和高温灭菌不能破坏的肠毒素,对人体造成危害。食品中的蜡样芽孢杆菌及其肠毒素的污染是个世界性卫生问题,已经引起了世界各国的广泛关注。本课题以长沙市市售鲜湿米粉为研究对象,对鲜湿米粉中Bc的污染水平进行监测,同时也对长沙市民对鲜湿米粉的消费习惯进行问卷调查。采取预测微生物学的方法,比较了Gompertz方程、Logistic方程、Baranyi方程和MMF方程,建立了鲜湿米粉中蜡样芽孢杆菌的初级模型,并进一步得出次级模型。将监测数据、调查结果以及预测模型结合蜡样芽孢杆菌的微生物学与流行病学资料,应用Palisade公司开发的@RISK6.3软件完成了鲜湿米粉中蜡样芽孢杆菌的定量风险评估报告。本研究的主要结论为：在5℃下鲜湿米粉中的蜡样芽孢杆菌生长受到抑制,增长极缓慢,10～35℃下鲜湿米粉中的蜡样芽孢杆菌呈典型的S形增长,选取Baranyi模型作为初级生长预测模型：将Baranyi模型中的各项参数代入Ratkwosky平方根模型,获得最大比生长速率和延滞期对于温度的次级模型,检验结果表明预测模型能够快速准确的表征鲜湿米粉中蜡样芽孢杆菌的生长情况。对长沙市售鲜湿米粉中蜡样芽孢杆菌的污染水平监测结果表明,夏季样品、流动摊点的样品、散装样品的检出率和污染水平都相对较高。人群消费情况调查结果表明,人群中大多数会选择早餐食用鲜湿米粉(50.27%),在社区小吃店或食堂食用(56.59%),并且以购买后1h内食用为主(71.35%)。定量风险评估结果显示最终食用时鲜湿米粉中蜡样芽孢杆菌含量超过风险阈值5log CFU/g的概率分别为春季5.3%,夏季13.2%,秋季6.6%;这三个季节中与发生蜡样芽孢杆菌食物中毒风险的相关性最大的因素都是初始污染水平,说明生产者与销售者严格控制初始污染水平是风险管理的重点。

关键词：蜡样芽孢杆菌鲜湿米粉预测模型风险评估

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秀屿港区莆头作业区炸礁施工与质量控制探讨

珠江水运 2018年第10期 68-69页

作者：林宇斌中交第三航务工程局有限公司厦门分公司

在进行港口作业时,炸礁施工爆破控制难度比较大,特别是对于水流比较急的区域,在进行爆破施工时,需要合理选择炸礁施工工艺并做好质量控制。文章以实际工程为例,对工程地质情况进行分析总结,并选择了合适的施工方案,然后对炸礁施工进行探... 详细信息

在进行港口作业时,炸礁施工爆破控制难度比较大,特别是对于水流比较急的区域,在进行爆破施工时,需要合理选择炸礁施工工艺并做好质量控制。文章以实际工程为例,对工程地质情况进行分析总结,并选择了合适的施工方案,然后对炸礁施工进行探讨,提出了质量控制措施,顺利完成了炸礁施工。

关键词：炸礁施工网路联结形式清礁施工

静动脉二氧化碳分压差联合中心静脉血氧饱和度评估感染性休克液体复苏治疗效果的Meta分析

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中华医院感染学杂志 2019年第19期29卷 2899-2904页

作者：李丽李正艳秦玲林宇斌温建立遵义医学院第三附属医院心肺重症监护室贵州遵义563000 遵义医学院第三附属医院重症医学科贵州遵义563000 遵义医学院研究生院贵州遵义563000

目的系统评价静动脉二氧化碳分压差(Venous arterial carbon dioxide pressure difference,V-ApCO2)联合中心静脉血氧饱和度(central venous oxygen saturation,ScvO2)在感染性休克液体复苏治疗中的指导作用。方法依据Cochrane协作网文献检索方法,联合检索中国生物医学文献数据库(CBMdisc)、中国知识资源总库(CNKI)、万方数据知识服务平台等,获得有关V-ApCO2联合ScvO2在感染性休克液体复苏治疗过程中指导作用的研究报道,时间截止2018年10月31日。以标准化均数差(SMD)或相对危险度(RR)评价V-ApCO2联合ScvO2在研究组和对照组感染性休克患者液体复苏治疗和预后相关指标。结果共纳入12篇文献,包含感染性休克患者818例,其中研究组450例,对照组368例。Meta分析结果显示,复苏6 h研究组患者急性生理与慢性健康(APACHEⅡ)评分、机械通气时间、ICU住院时间及28天病死率均低于对照组,而乳酸清除率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论V-ApCO2和ScvO2联合作为液体复苏指标,有助于改善患者预后,减少机械通气时间、ICU住院时间以及减少病死率。

关键词：感染性休克二氧化碳分压差中心静脉血氧饱和度 Meta分析

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鲜湿米粉中蜡样芽孢杆菌生长预测模型构建

粮食与油脂 2017年第9期30卷 78-81页

作者：林宇斌李安平付湘晋林亲录中南林业科技大学食品科学与工程学院稻谷及副产物深加工国家工程实验室湖南长沙410004 石家庄君乐宝乳业有限公司河北石家庄050221

测定了不同储藏温度(5、10、15、20、25、30、35℃)下鲜湿米粉中蜡样芽孢杆菌的生长数据,利用Gompertz模型、Baranyi模型、Logistic模型、MMF模型构建鲜湿米粉中芽孢杆菌生长预测初级模型。结果表明,Baranyi模型与实际测试数据符合度最... 详细信息

测定了不同储藏温度(5、10、15、20、25、30、35℃)下鲜湿米粉中蜡样芽孢杆菌的生长数据,利用Gompertz模型、Baranyi模型、Logistic模型、MMF模型构建鲜湿米粉中芽孢杆菌生长预测初级模型。结果表明,Baranyi模型与实际测试数据符合度最好,选用Baranyi作为初级预测模型。进一步利用Baranyi模型参数,选用Ratkowsky平方根方程建立了鲜湿米粉中芽孢杆菌生长预测次级模型。鲜湿米粉中芽孢杆菌生长预测模型表明,鲜湿米粉应在15℃以下储藏,芽孢杆菌在鲜湿米粉中的最低生长温度为5.0℃左右。

关键词：鲜湿米粉蜡样芽胞杆菌预测微生物学 Baranyi模型 Ratkowsky模型

COPD合并呼吸衰竭患者氧驱雾化吸入不同氧流量对疗效的影响

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江西医药 2020年第3期55卷 290-291,312页

作者：林宇斌仲艾芳温建立贵州省遵义医科大学遵义563000 贵州省遵义医科大学第三附属医院遵义563000

目的探讨COPD合并呼吸衰竭患者氧驱雾化吸入不同氧流量对疗效的影响。方法选取2018年12月-2019年12月收治的126例COPD患者为研究对象,采用随机数表法将其分为A、B、C 3组,各42例。所有患者均给予常规治疗,并采用氧气驱动雾化的方式吸入... 详细信息

目的探讨COPD合并呼吸衰竭患者氧驱雾化吸入不同氧流量对疗效的影响。方法选取2018年12月-2019年12月收治的126例COPD患者为研究对象,采用随机数表法将其分为A、B、C 3组,各42例。所有患者均给予常规治疗,并采用氧气驱动雾化的方式吸入异丙托溴铵,A组以6L/min氧流量吸入,B组以7 L/min氧流量吸入,C组以8L/min氧流量吸入。比较3组患者的临床疗效、肺功能(FVC、FEV1、FEV1/FVC)及血氧相关指标(PO2、PCO2、MSaO2)。结果B组患者治疗有效率为97.62%,明显高于A组80.95%和C组85.71%(P0.05);治疗后,B组FVC、FEV1、FEV1/FVC、PO2、MSaO2水平均高于A、C组(P<0.05),PCO2水平低于A、C组(P<0.05)。结论COPD合并呼吸衰竭患者以7 L/min的速度进行氧驱雾化吸入可有效缓解患者的临床症状,改善体内缺氧状态,临床疗效最佳。

关键词：慢性阻塞性肺疾病氧驱雾化吸入呼吸衰竭氧流量

替加环素治疗多重或泛耐药鲍曼不动杆菌引起的重症肺炎的疗效分析

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云南医药 2020年第6期41卷 534-536页

作者：林宇斌温建立东莞市妇幼保健院内科广东东莞523000

目的探讨分析采用替加环素治疗多重或泛耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB/XDRAB)引起重症肺炎的临床价值。方法随机纳入本院于2016年3月-2019年5月收治MDRAB/XDRAB致重症肺炎患者83例作为本次研究对象,随机将患者分为对照组(n=43)与研究组(n=40)... 详细信息

目的探讨分析采用替加环素治疗多重或泛耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB/XDRAB)引起重症肺炎的临床价值。方法随机纳入本院于2016年3月-2019年5月收治MDRAB/XDRAB致重症肺炎患者83例作为本次研究对象,随机将患者分为对照组(n=43)与研究组(n=40)。对照组采取头孢哌酮/舒巴坦治疗方案,研究组采取替加环素结合头孢哌酮/舒巴坦治疗方案,对比分析2组患者临床疗效、细菌清除率情况,记录对比并研究组治疗有效与无效患者ICU入住时间、机械通气治疗情况、aAPACHE-Ⅱ评分情况、PCT,Alb以及患者替加环素应用时间。结果纳入菌株均对替加环素药物敏感,药物敏感度达到100.0%;研究组患者治疗后治疗有效以及细菌清除相比对照组均明显更高(P<0.05);研究组治疗有效患者年龄、APACHE-Ⅱ评分、ICU入住时间、PCT指标相比治疗无效患者明显更低(P<0.05);治疗有效患者行机械通气率、Alb指标水平相比治疗无效患者明显更高(P<0.05)。结论临床针对MDRAB/XDRAB致重症肺炎患者采取替加环素结合头孢哌酮/舒巴坦的治疗方案疗效更明确,患者经治疗后症状得到明显改善,患者临床疗效及细菌清除效果受患者年龄、APACHE-Ⅱ评分、ICU入住时间、机械通气、PCT指标以及Alb指标水平影响。

关键词：替加环素多重或泛耐药鲍曼不动杆菌重症肺炎临床疗效

“静脉流域分析法”切除位于亚段交界位置的早期周围型肺癌10例报告

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中国微创外科杂志 2023年第7期23卷 543-546页

作者：张楠陈树兴许德新许添辉林宇斌陈星福建省福州肺科医院胸外科福州350000

目的探讨“静脉流域分析法”精准切除位于亚段交界位置的早期周围型肺癌的可行性。方法2021年9月~2022年10月我科采用“静脉流域分析法”精准切除10例位于亚段交界位置的早期周围型肺癌。术前行三维重建,确定结节位于肺亚段交界,明确结... 详细信息

目的探讨“静脉流域分析法”精准切除位于亚段交界位置的早期周围型肺癌的可行性。方法2021年9月~2022年10月我科采用“静脉流域分析法”精准切除10例位于亚段交界位置的早期周围型肺癌。术前行三维重建,确定结节位于肺亚段交界,明确结节归属静脉流域及其靶静脉,行单操作孔胸腔镜手术,术中暂时阻断靶静脉,无需处理动脉、支气管,荧光反染法或膨胀-萎陷法确定边界,然后释放阻断的靶静脉,根据边界切除靶肺。结果10例均顺利完成手术,无扩大切除,无中转肺叶切除。手术时间52~100 min,平均74 min;术中出血量10~50 ml,平均20 ml。术后引流时间1~4 d,平均2.6 d。术后住院时间3~6 d,平均4.4 d。切除淋巴结1~5枚,(3.1±1.2)枚,均未见肿瘤转移。10例随访2~15个月,平均10.1月,无并发症,无死亡。结论“静脉流域分析法”精准切除位于亚段交界位置的早期周围型肺癌安全、可行。

关键词：静脉流域分析解剖性部分肺切除术周围型肺癌