检索结果-南通市图书馆

作者：杜鲁涛山东大学

学位级别：硕士

目的：检测人类白细胞抗原-G（HLA-G）在胃癌组织及细胞系中的表达,初步探讨其在胃癌免疫逃逸中的作用机理及临床意义,并评估其在胃癌诊断和预后中的价值。方法： 1.应用免疫组织化学SP法检测HLA-G及Tregs在179例胃癌组织及... 详细信息

目的：检测人类白细胞抗原-G（HLA-G）在胃癌组织及细胞系中的表达,初步探讨其在胃癌免疫逃逸中的作用机理及临床意义,并评估其在胃癌诊断和预后中的价值。方法： 1.应用免疫组织化学SP法检测HLA-G及Tregs在179例胃癌组织及相应癌旁正常胃组织中的分布及表达情况,探讨其与胃癌临床病理特点及复发预后的关系。 2.应用Western Blot法检测HLA-G在30例胃癌组织及相应癌旁正常胃组织中的表达,证实HLA-G的表达在癌组织与正常组织间存在差异。 3.应用RT-PCR、Real-time PCR和Flow Cytometry检测胃癌细胞系AGS、BGC-823、SGC-7901、MKN-45、MKN-28和HGC-27中HLA-G的表达。 4.应用脂质体2000将pVITRO2-mcs vector-HLA-G及对照空载体pVITRO2-mcs vector分别转染到细胞系SGC-7901内,利用潮霉素B进行稳筛后分别称为SGC-7901-G和SGC-7901-V细胞系。然后利用Real-time PCR和western blot检测转染前后HLA-G的表达。并与健康人PBMC进行共培养,检测培养体系中CD3+CD25+FoxP3+T细胞的变化,同时应用酶标记免疫吸附测定法（ELISA）检测共培养体系中IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10,IFN-y和TNF-a的表达水平。探讨HLA-G在胃癌免疫逃逸中可能的作用机理。 5.应用ELISA法对82例胃癌、52例浅表性胃炎、36例萎缩性胃炎、39例胃上皮内瘤变及67例健康体检者血浆标本进行检测,比较不同组间sHLA-G表达水平的差异及其与胃癌临床病理特点间的关系,同时应用电化学发光法检测CEA的表达水平。运用ROC曲线评估sHLA-G及CEA在胃癌早期诊断中的价值,将二者进行比较,探讨sHLA-G在胃癌早期诊断及临床应用中的价值。结果： 1.免疫组化染色结果显示,胃癌组织中HLA-G的阳性表达率达49.7%（89/179）,而癌旁正常胃组织中无表达（0/179）,二者相比较有显著的统计学差异（P＜ 0.05）。HLA-G的阳性表达与胃癌的浸润深度、邻近脏器受侵及临床分期显著相关（P＜0.05）,而与年龄、性别、肿瘤大小、Borrmann分期、淋巴结转移、分化程度及淋巴结转移无统计学差异（P＞0.05）。HLA-G阳性患者的5年总体生存率、肿瘤相关生存率及无病生存率均显著低于HLA-G阴性表达者（P＜ 0.05）。Cox回归多因素分析的结果显示HLA-G阳性表达是独立的预后因素。肿瘤中Tregs的浸润与胃癌的浸润程度、淋巴结转移、远处脏器侵犯以及临床分期相关（P＜0.05）,而与年龄、性别、分化程度、肿瘤大小、Borrmann分期（P＞0.05）无统计学差异。Tregs高浸润胃癌患者的5年总体生存率、肿瘤相关生存率及无病生存率均显著低于低Tregs浸润胃癌患者（P＜ 0.05）。Cox回归多因素分析结果显示高Tregs浸润是独立的预后因素,且HLA-G的表达和Tregs的浸润呈显著相关。 2. Western Blot结果显示HLA-G在胃癌组织中出现阳性条带,约39kDa大小而对照组（癌旁正常组织）中均无条带出现,进一步证实HLA-G在胃癌组织中表达而在正常胃组织中不表达。 3. HLA-G mRNA及蛋白在胃癌细胞系AGS、BGC-823、SGC-7901、MKN-45、MKN-28和HGC-27中均低表达;SGC-7901转染HLA-G （SGC-7901-G）并稳筛后,经检测HLA-G mRNA及蛋白的表达水平均显著升高。 4.健康人PBMC与SGC-7901-G细胞系共培养,与SGC-7901-V共培养相比,共培养体系中CD3+CD25+FoxP3+T细胞显著上调,同时,SGC-7901-G共培养体系上清中IL-6和IL-10显著上调,TNF-α显著下调。 5.胃癌组血浆中sHLA-G（138.76U/ml）表达水平均显著高于胃上皮内瘤变组（57.28 U/m1）、萎缩性胃炎组（55.55U/m1）、浅表性胃炎组（46.03U/m）及健康对照组（39.28U/ml）（P＜0.001）;胃上皮内瘤变组血浆sHLA-G水平显著高于健康对照组（P＜0.05）;而胃上皮内瘤变与浅表性胃炎组、萎缩性胃炎组之间,浅表性胃炎组与萎缩性胃炎组之间以及浅表性胃炎组、萎缩性胃炎组与健康对照组之间差异均无统计学意义（P＞0.05）。胃癌组血浆CEA水平显著高于其他各组（P＜0.01）。并且胃癌患者血浆sHLA-G水平与患者年龄及肿瘤大小显著相关（P＜0.05）,而与患者性别、分化

关键词：胃癌人类白细胞抗原G 肿瘤标志物免疫逃逸

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外泌体从实验室到临床, 未来有多远?

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中华检验医学杂志 2021年第12期44卷 1109-1112页

作者：杜鲁涛李娟王传新山东大学第二医院检验医学中心济南250033

外泌体是细胞主动向胞外分泌的纳米级双层膜结构囊泡, 携带大量生物活性物质, 可作为载体在细胞间发挥物质传递和信息交流的作用。近年来, 外泌体已成为生物医学研究的前沿热点, 在疾病实验室诊断和临床治疗领域显示出广阔的应用前景。... 详细信息

外泌体是细胞主动向胞外分泌的纳米级双层膜结构囊泡, 携带大量生物活性物质, 可作为载体在细胞间发挥物质传递和信息交流的作用。近年来, 外泌体已成为生物医学研究的前沿热点, 在疾病实验室诊断和临床治疗领域显示出广阔的应用前景。但总体来说, 大部分外泌体相关研究尚处于实验室研究阶段, 其分离富集、技术操作规范和质量控制等方面仍存在许多问题和挑战, 同时亟需开展多中心、大样本临床试验, 为外泌体真正从实验室走向临床应用提供证据。

关键词：外泌体生物标志物诊断治疗

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GZMB基因cg16212145位点的异常甲基化芯片测定对胃癌早筛的价值探讨

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山东大学学报(医学版) 2022年

作者：王景谢艳李培龙杜鲁涛王传新山东大学第二医院检验医学中心山东省肿瘤标志物检测工程实验室

目的获得外周血单个核细胞(PBMC)来源的胃癌特异性全基因组甲基化图谱,探讨PBMC来源的甲基化位点在胃癌早期诊断中的临床价值。方法采用850k甲基化芯片检测20例胃癌患者和20例健康对照者PBMC的全基因组甲基化状态,初步构建PBMC来源的...

目的获得外周血单个核细胞(PBMC)来源的胃癌特异性全基因组甲基化图谱,探讨PBMC来源的甲基化位点在胃癌早期诊断中的临床价值。方法采用850k甲基化芯片检测20例胃癌患者和20例健康对照者PBMC的全基因组甲基化状态,初步构建PBMC来源的胃癌特异性甲基化图谱,获得差异甲基化位点(DMPs)。对DMPs所在的基因进行基因本体(GO)分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析,进行功能预测。利用基于随机森林的多因素过滤方法对DMPs进行统计筛选。对34例Ⅰ期胃癌患者和21例健康对照者进行基于二代测序的多重目的区域甲基化富集测序,验证筛选得到的位点。结果甲基化芯片结果显示,与健康对照者比较,胃癌患者的PBMC具有独特的全基因组甲基化图谱,以|Δβ|>0.06、adjust P<0.05作为预筛选条件共得到5 883个DMPs,包括2 513个高甲基化位点和3 370个低甲基化位点;GO分析和KEGG分析显示,5 883个DMPs所在的2 677个基因主要与MAPK信号通路、癌症中的转录失调相关。颗粒酶B(GZMB)基因cg16212145位点在胃癌患者的PBMC中呈高甲基化水平,差异具有统计学意义(Δβ=0.0807,adjustP=0.001)。多重目的区域甲基化富集测序结果表明,CpG位点cg16212145的异常甲基化能够区分Ⅰ期胃癌患者与健康对照者(AUC=0.807,P<0.001)。结论胃癌患者具有PBMC来源的特异性全基因组甲基化图谱,GZMB基因cg16212145位点在胃癌患者的PBMC中呈现高甲基化水平,在胃癌的早期筛查中具有重要临床价值。

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HLA-G和调节T细胞在胃癌中的表达

HLA-G和调节T细胞在胃癌中的表达

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第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会

作者：杜鲁涛山东大学齐鲁医院

目的检测人类白细胞抗原G(HLA-G)在胃癌患者组织中的表达水平,以及调节T细胞的浸润情况,探讨其临床意义。材料179例胃癌患者肿瘤和正常癌旁组织。方法采用免疫组织化学技术检测组织中HLA-G水平和调节T细胞的表达。统计胃癌患者临床病理... 详细信息

目的检测人类白细胞抗原G(HLA-G)在胃癌患者组织中的表达水平,以及调节T细胞的浸润情况,探讨其临床意义。材料179例胃癌患者肿瘤和正常癌旁组织。方法采用免疫组织化学技术检测组织中HLA-G水平和调节T细胞的表达。统计胃癌患者临床病理参数和5年生存情况,分析其与HLA-G

关键词：人类白细胞抗原G 调节T细胞胃肿瘤

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2019新型冠状病毒核酸检测专家共识

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中华医学杂志 2020年第13期100卷 968-973页

作者：无王成彬段勇刘子杰童永清伍均杜鲁涛魏超君中华医学会检验医学分会解放军总医院第一医学中心医学检验中心北京100853 昆明医科大学第一附属医院医学检验科昆明650031 武汉大学人民医院检验医学中心上海市第一人民医院检验医学中心山东大学第二医院检验医学中心甘肃省人民医院临床研究与转化医学研究所

突发新型冠状病毒肺炎疫情以来,感染病例快速上升。随着疫情的发展,全国各地乃至境外均有病例报道[1,2,3,4]。及时对急重症及疑似患者进行诊断需要快速有效的方法,2019新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)核酸检测为诊断提... 详细信息

突发新型冠状病毒肺炎疫情以来,感染病例快速上升。随着疫情的发展,全国各地乃至境外均有病例报道[1,2,3,4]。及时对急重症及疑似患者进行诊断需要快速有效的方法,2019新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)核酸检测为诊断提供了直接证据[5,6]。核酸检测过程中,因对病原体的传染途径和致病力尚未完全明确,工作人员存在较大的感染风险。此外,因为2019-nCoV基因结构与一般RNA差别较大,所以检验流程、检验质量和生物安全均需要进行有效地规范。

关键词：传染途径核酸检测检验质量疑似患者致病力诊断需要检验流程感染风险

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人类白细胞抗原G(HLA-G)在胃癌发生发展及预后中的作用研究

人类白细胞抗原G(HLA-G)在胃癌发生发展及预后中的作用研究

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华东六省一市生物化学与分子生物学学会-2011年学术交流会

作者：杜鲁涛王传新山东大学齐鲁医院

目的:检测人类白细胞抗原-G(HLA-G)在胃癌组织及细胞系中的表达及对调节性T细胞(Tregs)的影响,初步探讨其在胃癌免疫逃逸中的作用机理及临床意义,并评估其在胃癌诊断和预后中的价值。方法:1.应用免疫组织化学SP法检测HLA-G及Tregs在179...

目的:检测人类白细胞抗原-G(HLA-G)在胃癌组织及细胞系中的表达及对调节性T细胞(Tregs)的影响,初步探讨其在胃癌免疫逃逸中的作用机理及临床意义,并评估其在胃癌诊断和预后中的价值。方法:1.应用免疫组织化学SP法检测HLA-G及Tregs在179例胃癌组织及相应癌旁正常胃组织中的分布及表达情况,探讨其与胃癌临床病理特点及复发预后的关系。2.应用Western Blot法检测HLA-G在30例胃癌组织及相应癌旁正常胃组织中的表达,证实HLA-G

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基于高通量测序技术的非小细胞肺癌常见基因位点突变分析

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中华检验医学杂志 2019年第4期42卷 297-305页

作者：杜鲁涛展垚李娟王立水杜昭杨丽王传新山东大学第二医院检验医学中心济南250033 山东大学齐鲁医院检验医学中心济南250012 迈凯基因科技有限公司 611730

目的利用高通量测序平台研究非小细胞肺癌(NSCLC)热点基因突变情况,系统性分析突变位点的分布、类型以及频度,评估突变位点致病性。方法本研究共纳入94例NSCLC组织样本,均为2015年7月至2017年4月在山东大学齐鲁医院胸外科收集的非小细... 详细信息

目的利用高通量测序平台研究非小细胞肺癌(NSCLC)热点基因突变情况,系统性分析突变位点的分布、类型以及频度,评估突变位点致病性。方法本研究共纳入94例NSCLC组织样本,均为2015年7月至2017年4月在山东大学齐鲁医院胸外科收集的非小细胞肺癌(NSCLC)石蜡包埋(FFPE)和新鲜组织样本。患者年龄在35~82岁之间,年龄中位数是61岁。男性63例,女性31例。选择22个基因:KRAS、EGFR、BRAF、PIK3CA、AKT1、ERBB2、PTEN、NRAS、STK11、MAP2K1、ALK、DDR2、CTNNB1、MET、TP53、SMAD4、FBXW7、FGFR3、NOTCH1、ERBB4、FGFR1和FGFR2。用Thermo fisher公司Ion Torrent测序平台的Ion Ampli Seq Colon and Lung Cancer Panel进行测序。Ion Torrent平台测序数据使用Ion torrent suite v4.4.2软件进行分析。结果在NSCLC常见的22个突变基因中,TP53基因突变频率最高,约占所有突变的46.9%,其次是EGFR基因(占28.1%);共检测出89种突变,包括63种热点突变(已报道的位点)和26种新发突变(未见报道的位点),其中检出频率最高的是EGFR基因的19号外显子缺失突变,其次是EGFR基因的Leu858Arg;分析EGFR基因的靶向用药位点的突变情况,结果显示EGFR的19号外显子的缺失突变检出次数最高,其次是21号外显子L858R突变;利用生物信息学软件分析了26种新发突变的致病性,结果显示除ATK1:c.47-12G>A和TP53:c.214C>G这两个位点以外,剩余的24种新发突变位点在基因保守性、氨基酸序列变化、蛋白结构影响三个方面至少有一项会对基因的功能产生重大影响。结论本研究通过NGS对NSCLC多个敏感基因的突变位点进行联合检测,更能全面覆盖基因变异情况,为筛选最适宜靶向治疗的群体提供依据。新发突变的致病性预测以及所涉及的肿瘤相关信号通路的改变,为后续为进一步研究NSCLC致病机制提供参考。

关键词：癌,非小细胞肺肺肿瘤高通量核苷酸序列分析突变

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仿NET的网状十字形DNA纳米机器的构建及其抑菌机制研究

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中华检验医学杂志 2024年第11期47卷 1332-1339页

作者：韩金秀张鹏李伟李娟王传新杜鲁涛山东大学第二医院检验医学中心济南250033 山东大学齐鲁医院检验医学中心济南250012

目的探究仿中性粒细胞胞外陷阱(NET)的网状十字形DNA纳米机器的抑菌性能及其抑菌机制。方法本研究通过一步法合成十字形DNA纳米结构,在镁离子聚合作用下形成网络,并以此为模板镶嵌被还原的Cu^(0)形成网状DNA模板化的铜纳米簇(CuNPs);通... 详细信息

目的探究仿中性粒细胞胞外陷阱(NET)的网状十字形DNA纳米机器的抑菌性能及其抑菌机制。方法本研究通过一步法合成十字形DNA纳米结构,在镁离子聚合作用下形成网络,并以此为模板镶嵌被还原的Cu^(0)形成网状DNA模板化的铜纳米簇(CuNPs);通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)表征十字形DNA形成过程;通过原子力显微镜(AFM)和能量色散谱仪(EDS)表征网状十字形DNA纳米机器;通过涂布实验确定合成网状十字形DNA纳米机器的Cu^(2+)、Mg^(2+)和DNA的最优浓度;通过平板涂布实验验证网状十字形DNA纳米机器对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的抗菌性能;通过结晶紫染色评估大肠埃希菌的聚集效果,通过扫描电镜观察大肠埃希菌膜表面的变化,以此探究网状十字形DNA纳米机器的抑菌机制。结果PAGE显示4条DNA链共孵育后的条带迁移距离最小;AFM显示DNA结构呈网状,分布均匀,且该结构中Cu、Mg和P元素共存;合成网状十字形DNA纳米机器所需的Cu^(2+)、Mg^(2+)和DNA的最优浓度分别为1 mmol/L、100 mmol/L和20μmol/L;网状十字形DNA纳米机器对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌均具有抑菌能力,存活率分别为39.72%、43.56%和60.57%;网状十字形DNA纳米机器对大肠埃希菌具有聚集作用;细菌膜表面发生皱缩和破损。结论本研究构建的网状十字形DNA纳米机器能够聚集大肠埃希菌,能使菌膜表面发生皱缩和破损,具有抑菌作用。

关键词：大肠杆菌纳米机器网状DNA 中性粒细胞胞外陷阱

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GZMB基因cg16212145位点的异常甲基化芯片测定对胃癌早筛的价值

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山东大学学报（医学版） 2022年第6期60卷 26-34,40页

作者：王景谢艳李培龙杜鲁涛王传新山东大学第二医院检验医学中心山东济南250033 山东省肿瘤标志物检测工程实验室山东济南250033

目的获得外周血单个核细胞(PBMC)来源的胃癌特异性全基因组甲基化图谱,探讨PBMC来源的甲基化位点在胃癌早期诊断中的临床价值。方法采用850k甲基化芯片检测20例胃癌患者和20例健康对照者PBMC的全基因组甲基化状态,初步构建PBMC来源的胃... 详细信息

目的获得外周血单个核细胞(PBMC)来源的胃癌特异性全基因组甲基化图谱,探讨PBMC来源的甲基化位点在胃癌早期诊断中的临床价值。方法采用850k甲基化芯片检测20例胃癌患者和20例健康对照者PBMC的全基因组甲基化状态,初步构建PBMC来源的胃癌特异性甲基化图谱,获得差异甲基化位点(DMPs)。对DMPs所在的基因进行基因本体(GO)分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析,进行功能预测。利用基于随机森林的多因素过滤方法对DMPs进行统计筛选。对34例Ⅰ期胃癌患者和21例健康对照者进行基于二代测序的多重目的区域甲基化富集测序,验证筛选得到的位点。结果甲基化芯片结果显示,与健康对照者比较,胃癌患者的PBMC具有独特的全基因组甲基化图谱,以|Δβ|>0.06、adjust P<0.05作为预筛选条件共得到5883个DMPs,包括2513个高甲基化位点和3370个低甲基化位点;GO分析和KEGG分析显示,5883个DMPs所在的2677个基因主要与MAPK信号通路、癌症中的转录失调相关。颗粒酶B(GZMB)基因cg16212145位点在胃癌患者的PBMC中呈高甲基化水平,差异具有统计学意义(Δβ=0.0807,adjust P=0.001)。多重目的区域甲基化富集测序结果表明,CpG位点cg16212145的异常甲基化能够区分Ⅰ期胃癌患者与健康对照者(AUC=0.807,P<0.001)。结论胃癌患者具有PBMC来源的特异性全基因组甲基化图谱,GZMB基因cg16212145位点在胃癌患者的PBMC中呈现高甲基化水平,在胃癌的早期筛查中具有重要临床价值。

关键词：胃癌 DNA甲基化外周血单个核细胞早期筛查标志物

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cg08721802位点异常甲基化对良恶性肺结节鉴别诊断的价值探讨

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重庆医科大学学报 2022年第8期47卷 933-940页

作者：马苏红李培龙谢艳杜鲁涛王传新山东大学第二医院检验医学中心、山东省肿瘤标志物检测工程实验室济南250033

目的:探讨基于外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)的DNA差异甲基化修饰位点在肺良恶性结节临床鉴别诊断中的价值。方法:采用850k甲基化芯片检测20例良性肺结节和34例恶性肺结节患者PBMCs的全基因组甲基化状态... 详细信息

目的:探讨基于外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)的DNA差异甲基化修饰位点在肺良恶性结节临床鉴别诊断中的价值。方法:采用850k甲基化芯片检测20例良性肺结节和34例恶性肺结节患者PBMCs的全基因组甲基化状态,初步构建PBMCs来源的良恶性肺结节特异性甲基化图谱并获得差异甲基化位点(differentially methylated positions,DMPs),对DMPs所在的基因进行基因本体(gene ontology,GO)分析及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析。利用LASSO回归分析方法对DMPs进行统计筛选。将36例良性肺结节患者和84例恶性肺结节患者随机分成2组队列(测试队列和验证队列),通过焦磷酸测序方法对所选的位点进行分析验证,并采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线进行分析,计算ROC曲线下面积(area under the curve,AUC),评估其对肺良恶性结节的预测效能。结果:发现队列的良恶性肺结节患者PBMCs差异甲基化图谱具有明显差异。以Δβ>0.06,adjust P<0.01作为预筛选条件共得到421个DPMs。使用LASSO回归分析进一步筛选得到6个CpG位点。根据Pearson相关分析,以及进一步去除具有引物错配风险及引物合成困难的位点,得到cg05460181(AUC=0.793,P<0.0001)和cg08721802(AUC=0.893,P<0.0001)2个位点。测试阶段,通过焦磷酸测序测试2个位点在16例良性肺结节患者及34例恶性肺结节患者中的甲基化水平,发现cg08721802位点对肺良恶性结节具有较高的诊断价值(AUC=0.778,敏感度=85.29%,特异度=56.25%,P<0.01)。验证阶段,在另一个包含20例良性肺结节患者及50例恶性肺结节患者的独立样本集中对cg08721802的甲基化水平进行检测,发现其对区分良恶性肺结节仍具有临床价值(AUC=0.768,敏感度=84%,特异度=50%,P<0.01),cg08721802位点诊断效能明显高于传统肿瘤标志物,cg08721802位点与CEA结合明显提高了对大小为6~20 mm的结节诊断价值。结论:cg08721802甲基化水平在良恶性结节患者中具有明显差异,可以作为良恶性肺结节鉴别诊断的新型分子标志物。

关键词：良恶性肺结节 DNA甲基化外周血单个核细胞鉴别诊断标志物

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