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药用植物金荞麦悬浮体系的建立及其次生代谢物的生产调控

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药用植物金荞麦悬浮体系的建立及其次生代谢物的生产调控

作者：李艳冬西南大学

学位级别：硕士

野生金荞麦[Fagopyrum cymosum(Trev．)Meisn]，亦称野荞麦，天荞麦，红三七，多年生草本植物，系蓼科荞麦属中的一个种。是一种营养丰富并具有重要药用价值的资源植物，其主要的活性成分为黄酮类化合物。然而，近些年由于自然环境的破... 详细信息

野生金荞麦[Fagopyrum cymosum(Trev．)Meisn]，亦称野荞麦，天荞麦，红三七，多年生草本植物，系蓼科荞麦属中的一个种。是一种营养丰富并具有重要药用价值的资源植物，其主要的活性成分为黄酮类化合物。然而，近些年由于自然环境的破坏、无计划的采挖和栽培技术等原因，使得人类对其的需求不断增加，因此，应用生物技术生产天然药物具有重要的经济意义和社会意义。为了开发中药金荞麦的新药源，本文开展了通过建立金荞麦细胞悬浮系来生产黄酮类物质的研究。首先以金荞麦的茎、叶等器官为外植体，在四种含有6-BA和IBA不同激素配比的MS培养基上诱导愈伤组织的形成，并从其中筛选类黄酮含量最高的一种红色细胞系作为悬浮培养的起始材料。然后，在9种含有6-BA和IBA不同激素配比的MS培养基上建立金荞麦细胞悬浮系，筛选得到最适合金荞麦悬浮细胞生长的激素配比为MS+BA 1.0 mg-L+IBA 1.0mg·L。测定获得的悬浮系细胞生长周期及类黄酮合成动态曲线，二者呈紧密偶连，皆呈“S”型，生长周期分为三个时期：延迟期、指数期和静止期。第12d金荞麦细胞生长到达曲线顶峰，此时，为最佳收获期，即可同时获最大的金荞麦细胞生物量和类黄酮产量．同时研究了培养条件(接种量、碳源、氮源以及培养基上其他一些无机离子等)对细胞悬浮培养的影响，通过定期测定悬浮培养收获的细胞鲜重及类黄酮物质的产量，筛选出适宜的培养条件。得到的最适合金荞麦悬浮细胞生长的条件为：以NH和NO摩尔比例在20：40～30：30之间，5.0mmol·LKHPO，0.5 mmol·LCaCl·2HO，1.5mmol·LMgSO·7HO，0.2mmol·LFeSO·7HO，附加30g·L的蔗糖改良的MS液体培养基为基本培养基，激素配方为6-BA 1.0mg／L+IBA 1.0mg／L，配合每25ml培养液中接种鲜重1.2g的细胞。最适合金荞麦悬浮细胞类黄酮积累的培养条件为：以NH和NO摩尔比例为30：30，5.0mmol·LKHPO，1.5mmol·LCaCl·2HO，2.0mmolMgSO·7HO，0.15mmol·LFeSO·7HO附加30g·L的蔗糖改良的MS液体培养基为基本培养基，激素配方为6-BA 1.0mg／L+IBA1.0mg／L，配合每25ml培养液中接种鲜重0.8g的细胞。

关键词：金荞麦悬浮培养类黄酮培养条件

游泳训练诱导小鼠心肌过氧亚硝基阴离子生成的机制研究

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游泳训练诱导小鼠心肌过氧亚硝基阴离子生成的机制研究

作者：李艳冬湖南大学

学位级别：硕士

运动氧应激的研究至今已有大约30年的历史，随着对ROS和RNS特别是NO广泛及其深入的研究，在重视研究氧化应激的同时，又提出了硝基化应激(nitrosative stress)。NADPH氧化酶以前被认为是吞胞专有的酶，但最近发现它在许多别的细胞中也... 详细信息

运动氧应激的研究至今已有大约30年的历史，随着对ROS和RNS特别是NO广泛及其深入的研究，在重视研究氧化应激的同时，又提出了硝基化应激(nitrosative stress)。NADPH氧化酶以前被认为是吞胞专有的酶，但最近发现它在许多别的细胞中也存在。逐渐增多的证据提示，NADPH氧化酶也参与了运动诱导的心肌活性氧的产生。NOS是在生物体内NO的唯一合成酶，它包括nNOS、eNOS、iNOS三个亚型，不同运动负荷各亚型的表达不尽相同，任何一种酶的表达增加都可导致NO生成增多。基于最近的研究成果，本研究假设，长期游泳运动训练后，心肌中NADPH氧化酶诱导生成的0?2-与NOS催化生成的NO反应生成ONOO-。研究方法： 60只小鼠随机分为6组：(1)对照组(C组);(2)对照+药物组(CA组);(3)游泳训练组(T组);(4)游泳+药物组(TA组);(5)负重游泳组;(6)负重游泳组+药物组(OTA组)。负重游泳为1%体重。每天训练1次，60分钟，每周6次，共8周。于最后两次训练前尾部静脉注射NADPH氧化酶抑制剂Apocynin (10mg/kg体重)，于末次训练结束24小时后取样。研究结果： (1)经过8周训练，训练组小鼠体重比安静组低，大强度游泳训练组比中等强度训练组低。 (2)经8周训练，末次运动24小时后，各游泳训练组Hb浓度下降(P0.05)。TA组与T组相比，OTA组与OT组比较，ONOO-含量均下降(P<0.05)。 (4)经过8周自由游泳或1%%体重负重游泳训练后，与C组相比，T组、TA组、OT组和OTA组，iNOS蛋白表达有非常显著性升高(P<0.01)。TA组与T组，OTA组与OT组相比，iNOS表达都有所下降，但无显著性差异。研究结论： 1、8周训练后，各组小鼠Hb下降，提示长期中等强度和大强度有氧训练后，机体血液的运动氧运输能力减弱。 2、8周训练后，运动组比安静组体重下降，表明运动负荷增加。大强度运动负荷比中等强度运动负荷下降更多，表明大强度运动负荷更大，小鼠机体进入疲劳状态。 3、8周不同负荷的游泳训练，末次运动24h后，心肌0N00-明显增加，两种运动负荷0N00-无明显差异;施加NADPH氧化酶抑制剂后，心肌0N00-产生量减少，推论是其ROS降低所致。提示运动诱导的心肌NADPH氧化酶途径产生的活性氧增加是导致心肌0^00加的机制。 4、长期游泳运动训练诱导心肌iNOS表达增强，从而致使NO升高，进而导致ONOO-的生成量增加。提示运动诱导的心肌iNOS表达升高是导致心肌ONOO-增加的机制之一。

关键词：过氧亚硝基阴离子活性氧 NADPH氧化酶一氧化氮合酶一氧化氮运动

外源褪黑素对葡萄常温贮藏品质和生理特性的影响

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果树学报 2022年第7期39卷 1271-1280页

作者：史星雲王莉徐珊珊李艳冬殷益明湖州市农业科技发展中心(湖州市农业科学研究院) 浙江湖州313000 湖州市双林镇公共事业服务中心浙江湖州313000

【目的】明确褪黑素对鲜食葡萄常温贮藏品质及生理特性的影响。【方法】以红地球葡萄为试验材料,分别用0、50、100、200和500μmol·L-1的褪黑素溶液浸泡0.5 h,自然晾干并用PE保鲜袋扎口包装,置于温度(25±0.5)℃和相对湿度75%±5%条件... 详细信息

【目的】明确褪黑素对鲜食葡萄常温贮藏品质及生理特性的影响。【方法】以红地球葡萄为试验材料,分别用0、50、100、200和500μmol·L-1的褪黑素溶液浸泡0.5 h,自然晾干并用PE保鲜袋扎口包装,置于温度(25±0.5)℃和相对湿度75%±5%条件下贮藏28 d,测定了葡萄的失重率、落粒率、腐烂率、硬度和可溶性固形物、可滴定酸和维生素C含量等采后贮藏品质以及丙二醛含量、超氧阴离子产生速率、过氧化氢含量和抗氧化物酶(超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶、抗坏血酸过氧化物酶)活性等生理指标。【结果】不同浓度褪黑素处理均可以抑制葡萄的落粒和腐烂,延缓果穗水分的散失,其中以200μmol·L^(-1)褪黑素处理效果最好。与对照相比,200μmol·L^(-1)褪黑素处理可以减缓果实硬度的下降,抑制果实可溶性固形物和可滴定酸含量的降低,并保持维生素C含量,进而使葡萄保持较好的品质;同时,褪黑素能够通过增强4种抗氧化酶活性,抑制超氧阴离子产生速率和过氧化氢含量的上升,延缓丙二醛含量的积累,从而延缓葡萄果实的衰老。【结论】外源褪黑素可以延缓葡萄采后衰老,提高葡萄采后贮藏品质。

关键词：红地球葡萄褪黑素果实品质贮藏保鲜

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提取金荞麦愈伤组织总RNA的一种有效方法

中国中药杂志 2011年第6期36卷 751-754页

作者：眭顺照马婧李艳冬祝钦泷李名扬西南大学园艺园林学院重庆市花卉工程技术研究中心南方山地园艺学教育部重点实验室重庆400715 湖州市农业科学研究院浙江湖州313000

目的:建立金荞麦愈伤组织总RNA提取方法。方法:采用CTAB法结合LiCl沉淀的改良方法提取RNA,紫外分光光度检测、0.8%非变性琼脂糖凝胶电泳检测、RNA的反转录等评价RNA质量。结果:提取的总RNA 28S和18S条带清晰,且A260/A280在1.9～2.0,以... 详细信息

目的:建立金荞麦愈伤组织总RNA提取方法。方法:采用CTAB法结合LiCl沉淀的改良方法提取RNA,紫外分光光度检测、0.8%非变性琼脂糖凝胶电泳检测、RNA的反转录等评价RNA质量。结果:提取的总RNA 28S和18S条带清晰,且A260/A280在1.9～2.0,以提取的RNA为模板反转录的cDNA长度范围较广(500 bp～5 kb)。结论:该方法提取出的总RNA质量能满足RT-PCR等分子生物学操作的要求,且简单、有效、经济,可用于金荞麦愈伤组织总RNA的提取。

关键词：金荞麦愈伤组织总RNA提取

共微囊化异种肝细胞胰岛联合移植治疗急性肝衰

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中华实验外科杂志 2003年第5期20卷 413-414页

作者：高越许军刘伟代文杰乔海泉李艳冬哈尔滨医科大学附属第一医院普外科 150001

目的　探讨共微囊化异种肝细胞胰岛联合移植对急性肝衰的治疗作用。方法　D 氨基半乳糖诱导小鼠急性肝衰 ;Seglen法分离大鼠肝细胞 ;Sutton法分离胰岛 ;自制双喷头成囊器制备微囊。比较生理盐水、自由肝细胞移植、微囊化肝细胞移植、共... 详细信息

目的　探讨共微囊化异种肝细胞胰岛联合移植对急性肝衰的治疗作用。方法　D 氨基半乳糖诱导小鼠急性肝衰 ;Seglen法分离大鼠肝细胞 ;Sutton法分离胰岛 ;自制双喷头成囊器制备微囊。比较生理盐水、自由肝细胞移植、微囊化肝细胞移植、共微囊化肝细胞胰岛联合移植 4组间存活率、体重、谷丙转氨酶、血清白蛋白、总胆红素、血糖等指标的变化情况。结果　共微囊化肝细胞胰岛联合移植组存活率达 10 0 % ,组间差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,各项生化指标也明显占优。肝细胞与胰岛 β细胞可在微囊内融合。

关键词：肝细胞胰岛联合移植治疗急性肝衰免疫隔离微囊

再障中医分型演变和治疗分析(附32例小结)

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山东中医杂志 1981年第1期 31-34页

作者：李艳冬山东省人民医院中医科

再生障碍性贫血(简称再障)属于难治疾病之列。国外报导死亡率高达49～98％。我国用中西医结合治疗死亡率仅为13～36％。不少病例存活期延长,甚至达到长期

关键词：再障心脾病人中医分型肾阴虚型阳虚型小结

中医舌诊与胃十二指肠病变(附纤维胃镜检查162例分析)

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山东医药 1980年第9期 31-32页

作者：李艳冬山东省人民医院中医科

舌诊是望诊中的重要组成部分。“舌”可以反映内脏病变的程度,“有诸内,必形诸外”,“舌乃脾之外候”,舌与脾胃有着密切的联系。《灵枢·经脉篇》说:“脾是大阴之脉,……入腹,属脾络胃、上膈挟咽,连舌本散舌下”。因此,临床上辨舌象对... 详细信息

舌诊是望诊中的重要组成部分。“舌”可以反映内脏病变的程度,“有诸内,必形诸外”,“舌乃脾之外候”,舌与脾胃有着密切的联系。《灵枢·经脉篇》说:“脾是大阴之脉,……入腹,属脾络胃、上膈挟咽,连舌本散舌下”。因此,临床上辨舌象对脾胃病更有其重要意义。

关键词：舌质舌诊纤维胃镜脾胃湿热中焦湿热舌苔黄厚腻舌体黄厚游离盐酸病变慢性胃炎中医分型黄苔胃阴胃(中医) 十二指肠小肠

800例门诊阴道分泌物常规及BV检查结果分析

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内蒙古医学杂志 2016年第6期48卷 728-729页

作者：李艳冬赤峰市红山区妇幼保健所内蒙古赤峰024000

目的通过对我院800例妇科门诊阴道分泌物的检查,了解阴道分泌物的清洁度和病原体感染情况,为临床诊治提供依据。方法对门诊送检阴道分泌物进行镜检,对清洁度、霉菌和滴虫的感染状况及BV检测结果进行分析。结果 800例患者中,清洁度Ⅰ~Ⅱ... 详细信息

目的通过对我院800例妇科门诊阴道分泌物的检查,了解阴道分泌物的清洁度和病原体感染情况,为临床诊治提供依据。方法对门诊送检阴道分泌物进行镜检,对清洁度、霉菌和滴虫的感染状况及BV检测结果进行分析。结果 800例患者中,清洁度Ⅰ~Ⅱ度419例,占52.38%;Ⅲ~Ⅳ度381例,占48.62%。BV阳性115例,占14.37%;单独霉菌65例,占8.13%;单独滴虫5例,占0.63%;霉菌＋BV阳性21例,占2.62;滴虫＋BV阳性9例,占1.13%。阴道清洁度Ⅲ~Ⅳ度者BV阳性241例,阳性率为30.13%;阴道清洁度为Ⅰ~Ⅱ度者BV阳性67例,阳性率为8.38%。结论该地区细菌性阴道病在妇女阴道炎中发病率最高,应加强妇女健康教育行为干预,定期开展健康查体,积极预防妇科相关疾病的发生。

关键词：门诊妇科阴道分泌物检验

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血液标本静置时间对血常规结果影响分析

内蒙古医学杂志 2016年第7期48卷 856-858页

作者：李艳冬赤峰市红山区妇幼保健所内蒙古赤峰024000

目的探讨血液标本静置时间对血常规结果的影响。方法选取2014年4-8月在我院进行健康体检者100例,清晨对所有受检者抽取静脉血,分别于1、2、4、6、8、12h进行血常规测定,检测样本的白细胞计数（WBC）、中性粒细胞比值（NEU%）、淋巴细胞... 详细信息

目的探讨血液标本静置时间对血常规结果的影响。方法选取2014年4-8月在我院进行健康体检者100例,清晨对所有受检者抽取静脉血,分别于1、2、4、6、8、12h进行血常规测定,检测样本的白细胞计数（WBC）、中性粒细胞比值（NEU%）、淋巴细胞比值（LYM%）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白（Hb）、血小板计数（PLT）,分析其在不同时间段的变化规律。结果随着血液标本存放时间的延长,WBC、NEU%、PLT出现不同程度的变化,1、2、4h的WBC、NEU%、PLT比较,变化不大,差异无统计学意义（P〉0.05）;4h以后WBC逐渐上升,而NEU%、PLT逐渐下降,与1、2、4h比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。LYM%、RBC、Hb在1、2、4、6、8、12h6个时间点均变化不大,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论血液标本的静置时间会对血常规结果造成一定影响,标本放置时间越长对检测结果的影响越大,最好在在血常规标本采集后4h内进行测定,以更好的提高检测结果的准确性。

关键词：血液标本血常规静置时间影响