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新疆马驽巴贝斯虫地方虫株靶基因Bc48克隆、表达和rELISA的建立及其应用研究

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新疆马驽巴贝斯虫地方虫株靶基因Bc48克隆、表达和rELISA的建立及...

作者：李永畅新疆农业大学

学位级别：硕士

马驽巴贝斯虫病是由驽巴贝斯虫(Babesia caballi)寄生于驴、骡、马和斑马等马属动物红细胞内的主要以发热、贫血、黄疸的一种蜱传原虫病;是全球性流行、对马属动物危害较大的B类疾病。该病的发生、流行与其地方虫株致病力和其传播媒介... 详细信息

马驽巴贝斯虫病是由驽巴贝斯虫(Babesia caballi)寄生于驴、骡、马和斑马等马属动物红细胞内的主要以发热、贫血、黄疸的一种蜱传原虫病;是全球性流行、对马属动物危害较大的B类疾病。该病的发生、流行与其地方虫株致病力和其传播媒介的分布等密切相关,一般呈地方性流行。本文在分离、获得驽巴贝斯虫新疆地方虫株Bc-Y的基础上,借助外源基因扩增技术获得靶基因Bc48的不同片段,构建重组原核表达质粒、获得高效可溶性重组蛋白、以其为包被抗原研发rELISA检测试剂盒,应用于地方疑似区该病的检测、监控及综合防控,从而减少该病的感染率和马匹、媒介蜱携带率病原率等,促进特色马业的健康发展。(1)采用血液涂片与PCR方法相结合,对新疆昭苏县及和静县部分马驽巴贝斯虫病进行了流行病学调查,并分离地方流行虫株、测序、与GenBank中的序列进行比较,系统发育关系与他国驽巴贝斯虫属的种聚类;通过保虫实验顺利完成了新疆马驽巴贝斯虫Bc-Y虫株(伊犁地区流行虫株)的分离、测序。结果发现,血液涂片检查阳性率为8%,PCR检查阳性率为21.31%,在所检查的实验点中马驽巴贝斯虫病感染率最高可达到64.29%;测序结果与标准虫株同源性为96.7%-99.8%,分歧度0.2%-3.3%。(2)根据GenBank中已发表的马驽巴贝斯虫Bc48基因序列,设计合成4对引物,分别扩增Bc48基因的全长基因(QCL)、截短区域(A)(B)(C)片段从而构建四种重组原核表达质粒。结果显示:成功地扩增了Bc48基因的QCL、A、B、C四个片段,构建了pGEX-4T-1-QCL、GA、GB、GC四种重组原核表达质粒;通过测序后表明已克隆的Bc48序列及翻译氨基酸序列与其它国家的虫株序列进行比较,同源性可达99%;并成功表达出2种融合蛋白,筛选出GST-GB为高表达量蛋白,Western blotting结果显示纯化的融合蛋白具有良好的反应原性,可作为诊断抗原。(3)将已纯化的GST-GB蛋白作为包被抗原,通过优化其反应条件后,成功地建立了检测马驽巴贝斯虫抗体的rELISA方法;并进行重复性、特异性、敏感性等评测试验,并应用已建立的方法检测马血清样品(N=250)。结果显示:rELISA最佳抗原包被浓度为0.8μg/mL,包被时间为4℃过夜;3%脱脂乳为最佳封闭液;血清和酶标二抗的稀释度分别为1:50和1:10000,封闭时间、血清作用及酶标抗体孵育时间均为1 h;底物作用时间为15 min;其临界值为0.221。rELISA试验无交叉反应其变异系数均小于10%;检测伊犁昭苏及巴州和静地区马驽巴贝斯虫总感染率为28.4%,其中100份样品结果符合率为94.1%。该参数可为我区马驽巴贝斯虫病的防治奠定基础。

关键词：马驽巴贝斯虫新疆虫株 Bc48基因重组抗原ELISA

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全船停电时的应急操纵

中国水运(下半月) 2017年第1期17卷 4-6页

作者：李永畅天津港引航中心南港引航站

船舶航行于港口水域,由于港口环境复杂,需要频繁使用车舵避让船舶,船舶主机辅机刚刚启动,导致主机辅机的稳定性差,因而船舶在港口水域出现船舶失控的概率相对港外开阔水域来说大一些,如果处理不当的话,将对码头设施、航道、灯浮造成很... 详细信息

船舶航行于港口水域,由于港口环境复杂,需要频繁使用车舵避让船舶,船舶主机辅机刚刚启动,导致主机辅机的稳定性差,因而船舶在港口水域出现船舶失控的概率相对港外开阔水域来说大一些,如果处理不当的话,将对码头设施、航道、灯浮造成很大的损失。本文将就一次发生在天津港的船舶突然失控的应急实例展开分析,找出此次成功避免危机的决定性因素,希望对安全引航有所帮助。

关键词：船舶失控应急安全

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船舶应急用锚实例分析

船舶应急用锚实例分析

作者：李永畅天津港引航中心

锚设备是船舶最重要的设备之一,其主要的功能是使船舶安全地靠泊在预定的水域或海区。在船舶靠离泊操纵中,锚还可以用来辅助控制船舶运动。除此之外,锚设备还是船舶在紧急情况下最有效和可靠的应急设备。结合实例着重讨论船舶在紧急情... 详细信息

锚设备是船舶最重要的设备之一,其主要的功能是使船舶安全地靠泊在预定的水域或海区。在船舶靠离泊操纵中,锚还可以用来辅助控制船舶运动。除此之外,锚设备还是船舶在紧急情况下最有效和可靠的应急设备。结合实例着重讨论船舶在紧急情况下如何合理地抛锚,避免海损事故的发生,减少船舶损失。

关键词：船舶锚设备应急用锚制动安全

来源： cnki会议评论

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基于数据驱动的声源表面振速稀疏恢复方法

南京大学学报（自然科学版） 2024年第3期60卷 523-530页

作者：刘袁刘文强赵瑾瑜胡定玉李永畅安徽建筑大学数理学院合肥230601 安徽省建筑声环境重点实验室合肥230601 上海工程技术大学城市轨道交通学院上海201620

准确描述声源结构的表面振速具有重要意义,振速描述的准确性主要依赖于声源表面的测点数,而增加测点数会导致测量成本增加.为了解决这一问题,提出一种基于数据驱动的声源表面振速的稀疏恢复方法.首先,通过等效源法利用数值仿真获得振速... 详细信息

准确描述声源结构的表面振速具有重要意义,振速描述的准确性主要依赖于声源表面的测点数,而增加测点数会导致测量成本增加.为了解决这一问题,提出一种基于数据驱动的声源表面振速的稀疏恢复方法.首先,通过等效源法利用数值仿真获得振速的训练样本;然后,通过K-SVD字典训练方法训练出声源表面振速的稀疏基;最后,通过稀疏正则化实现从有限的测量数据中恢复整个声源表面的振速.为了验证方法的有效性,给出了简支板的数值仿真,并在消声室内进行了实验验证.仿真与实验的结果表明,在测量点数较少的情况下,使用数据驱动的声源表面振速稀疏恢复方法相较于常规等效源法的恢复精度更高,且该方法的性能更加稳定,为声源表面振速的测量提供了新的方案.

关键词：声源表面振速振速恢复数据驱动字典训练等效源法

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全面建设小康社会必须加快教育发展

中共乐山市委党校学报 2003年第1期5卷 13-13,17页

作者：李永畅乐山市教育局

全民族的思想道德素质、科学文化素质和健康素质明显提高,形成比较完整的现代国民教育体系","人民享有接受良好教育的机会,基本普及高中阶段教育,消除文盲.形成全民学习、终身学习的学习型社会,促进人的全面发展.

关键词：全面建设小康社会乐山市教育发展全民学习终身学习学习型社会教育优先战略地位

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乐山市基础教育发展“十要”

中共乐山市委党校学报 2002年第1期4卷 20-22页

作者：李永畅乐山市教育局

基础教育包括学前教育、九年义务教育、高中阶段教育.搞好基础教育,是落实科教兴国战略和教育优先发展战略的首要任务,是提高国民整体素质、把沉重的人口负担转化为巨大人力资源优势的根本途径,是促进社会主义现代化建设、实现中华民族... 详细信息

基础教育包括学前教育、九年义务教育、高中阶段教育.搞好基础教育,是落实科教兴国战略和教育优先发展战略的首要任务,是提高国民整体素质、把沉重的人口负担转化为巨大人力资源优势的根本途径,是促进社会主义现代化建设、实现中华民族伟大复兴的莫基工程.

关键词：乐山市基础教育发展中小学义务教育农村办学体制改革师资

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关于“教育要适度超前发展”的思考

中共乐山市委党校学报 2001年第1期3卷 19-20页

作者：李永畅乐山市教育委员会

党的十五届五中全会通过的明确指出:"教育是培养人才的基础,对经济和社会发展具有先导性、全局性的作用,要适度超前发展."

关键词：教育民族地区劳动者受教育层次教育现代化师资建设教育投入

右美托咪定通过抑制脊髓小胶质细胞活化减轻吗啡戒断反应痛觉过敏

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海军军医大学学报 2022年第7期43卷 729-735页

作者：孔二亮凤旭东杨梅李永畅袁红斌海军军医大学(第二军医大学)第二附属医院麻醉科上海200003 中国人民解放军联勤保障部队988医院麻醉科郑州450042

目的探讨右美托咪定(Dex)对吗啡戒断反应中痛觉过敏的影响及机制。方法根据药物处理不同将健康雄性C57/BL小鼠随机分为空白对照组、吗啡戒断反应痛觉过敏模型组(M组)、M+Dex组、M+米诺环素(Min)组、M+Dex+Min组、M+MK8825组、M+Min+MK8... 详细信息

目的探讨右美托咪定(Dex)对吗啡戒断反应中痛觉过敏的影响及机制。方法根据药物处理不同将健康雄性C57/BL小鼠随机分为空白对照组、吗啡戒断反应痛觉过敏模型组(M组)、M+Dex组、M+米诺环素(Min)组、M+Dex+Min组、M+MK8825组、M+Min+MK8825组,每组6只。空白对照组小鼠不予任何干预;其他6组小鼠每天上午8:00和下午6:00各腹腔注射吗啡溶液1次,连续注射6 d,随后注射纳洛酮构建吗啡戒断反应痛觉过敏模型。M组为单纯吗啡戒断反应痛觉过敏小鼠,M+Dex、M+Min、M+Dex+Min、M+MK8825、M+Min+MK8825组小鼠在纳洛酮给药前30 min通过鞘内导管分别单次给予人工脑脊液稀释的Dex、小胶质细胞激活抑制剂Min、Dex与Min混合液、降钙素基因相关肽(CGRP)抑制剂MK8825、Min与MK8825混合液。应用von Frey纤维丝测定各组小鼠机械性痛阈,免疫荧光和蛋白质印迹法检测脊髓背角小胶质细胞激活标志物钙离子结合调节因子1(IBA-1)的表达,蛋白质免疫印迹法和PCR检测脊髓背角组织中CGRP蛋白和mRNA表达变化,并用微透析技术测定脊髓背角炎症因子TNF-α、IL-1β水平,最后电生理技术观察Dex对脊髓背角自发性抑制性突触后电流(sIPSC)的影响。结果成功构建吗啡戒断反应痛觉过敏模型,与空白对照组相比,M组机械性痛阈降低(P0.05)。电生理结果显示,与人工脑脊液灌流相比,灌流Dex增强了脊髓背角神经元sIPSC的振幅和频率(P均<0.05)。结论 Dex通过抑制脊髓小胶质细胞激活、减少CGRP表达、减轻脊髓炎症反应及增强脊髓抑制性电活动缓解吗啡戒断反应中的痛觉过敏。

关键词：右美托咪定吗啡痛觉过敏小胶质细胞降钙素基因相关肽脊髓背角

新疆和静县部分地区散养户焉耆马梨形虫病的PCR诊断

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中国兽医杂志 2016年第10期52卷 42-44页

作者：呼尔查哈西巴特李永畅席耐巴音查汗新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052 新疆巴音郭楞蒙古自治州动物疾病控制与诊断中心新疆库尔勒841000 新疆巴音郭楞蒙古自治州和静县畜牧兽医站新疆和静841300

马梨形虫病是寄生于马属动物（马、斑马、驴和骡）红细胞内的通过蜱传播的血液原虫病,目前已发现的有马泰勒虫和驽巴贝斯虫两种。被梨形虫感染的马属动物发病后出现发热、皮下淋巴结肿大、贫血、黄疸等主要症状,降低动物的劳动力,偶尔... 详细信息

马梨形虫病是寄生于马属动物（马、斑马、驴和骡）红细胞内的通过蜱传播的血液原虫病,目前已发现的有马泰勒虫和驽巴贝斯虫两种。被梨形虫感染的马属动物发病后出现发热、皮下淋巴结肿大、贫血、黄疸等主要症状,降低动物的劳动力,偶尔会出现死亡病例。该病常出现在3月底至5月中旬,6月至8月份散发与该地区的蜱虫活动密切相关。

关键词：马梨形虫病 PCR诊断马属动物和静县血液原虫病焉耆马贝斯淋巴结肿大梨形蜱虫