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转MLPK反义基因对甘蓝自交不亲和性的影响

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园艺学报 2015年第2期42卷 252-262页

作者：何绍敏李春雨兰彩耘邹敏任雪松司军李成琼宋洪元西南大学园艺园林学院南方山地园艺学教育部重点实验室重庆市蔬菜学重点实验室重庆400715

对反义MLPK基因在甘蓝柱头特异启动子SLR的驱动下,通过农杆菌介导转化法将其导入高度自交不亲和甘蓝材料‘TF’。转基因甘蓝T0代植株定量PCR分析结果显示,不同的转MLPK反义基因单株内源MLPK m RNA积累量具有明显差异,其中转基因植株花... 详细信息

对反义MLPK基因在甘蓝柱头特异启动子SLR的驱动下,通过农杆菌介导转化法将其导入高度自交不亲和甘蓝材料‘TF’。转基因甘蓝T0代植株定量PCR分析结果显示,不同的转MLPK反义基因单株内源MLPK m RNA积累量具有明显差异,其中转基因植株花期柱头内源MLPK m RNA积累量明显低于野生型对照。花粉原位萌发的荧光显微镜观察结果显示,转基因甘蓝植株花期自交后,吸附在柱头上的花粉粒大量萌发,且穿过柱头的花粉管明显增加,并导致花期自交结籽数上升,转基因植株花期和蕾期自交亲和指数均明显高于野生型对照植株。结果表明,下调MLPK基因表达能部分打破甘蓝自交不亲和,提高其花期自交结籽能力。

关键词：甘蓝自交不亲和性反义MLPK基因

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胭脂萝卜红色素提取的原理和方法

南方农业 2007年第1期1卷 71-72页

作者：芮春梅李成琼司军西南大学园艺园林学院重庆市蔬菜学重点实验室 400716

胭脂萝卜红色素是一种具有优势的天然红色素。介绍了该红色素的结构,综合前人研究成果,分析讨论了有机溶剂提取法、水浸提法、大孔吸附树脂法、酶工程技术法、高速分离法等提取方法．认为今后的研发重点是如何使一些新兴的技术如超临界... 详细信息

胭脂萝卜红色素是一种具有优势的天然红色素。介绍了该红色素的结构,综合前人研究成果,分析讨论了有机溶剂提取法、水浸提法、大孔吸附树脂法、酶工程技术法、高速分离法等提取方法．认为今后的研发重点是如何使一些新兴的技术如超临界流体萃取技术(SFE)、超滤技术(UF)、酶工程技术等工业化、普及化。

关键词：胭脂萝卜红色素提取

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夏秋甘蓝新品种西园8号的选育

中国蔬菜 2004年第1期 18-19页

作者：李成琼宋明雷建军王小佳任雪松宋洪元司军西南农业大学园艺园林学院华南农业大学园艺学院

西园8号是以从日本引进品种,经多代自交分离选育而成的优良自交不亲和系9617和9670为父母本配制的一代杂种。该品种生育期90-100 d(天),耐热,在夏秋季32℃以上的高温条件下正常生长,抗病毒病,中抗黑腐病,耐根肿病,一般夏播产量3 000 kg... 详细信息

西园8号是以从日本引进品种,经多代自交分离选育而成的优良自交不亲和系9617和9670为父母本配制的一代杂种。该品种生育期90-100 d(天),耐热,在夏秋季32℃以上的高温条件下正常生长,抗病毒病,中抗黑腐病,耐根肿病,一般夏播产量3 000 kg·(667 m2)-1左右。适宜我国南方地区夏秋季栽培。

关键词：甘蓝西园8号品种选育特征特性

利用Cre/lox重组系统建立番茄基因工程雄性不育恢复系

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中国农业科学 2009年第10期42卷 3581-3591页

作者：宋洪元任雪松司军李成琼宋明雷建军西南大学园艺园林学院/重庆市蔬菜学重点实验室华南农业大学园艺学院

【目的】利用Cre/lox重组系统具有的重组删除特性建立番茄工程恢复系,特异删除F1中的雄性不育基因恢复其育性。【方法】将TA29-Barnase雄性不育基因表达盒置于两个同向lox位点之间并与NPTⅡ基因、Bar基因融合后获得植物表达载体pBinBarl... 详细信息

【目的】利用Cre/lox重组系统具有的重组删除特性建立番茄工程恢复系,特异删除F1中的雄性不育基因恢复其育性。【方法】将TA29-Barnase雄性不育基因表达盒置于两个同向lox位点之间并与NPTⅡ基因、Bar基因融合后获得植物表达载体pBinBarloxTABn,转化番茄获得雄性不育转基因植株。Cre基因在CaMV35S启动子的驱动下转入番茄获得工程恢复系。两者在开花时进行杂交,利用Cre重组酶删除F1中的TA29-Barnase不育基因表达盒使育性恢复。【结果】利用NPTⅡ作为转化筛选标记基因获得了番茄雄性不育转基因植株。转基因植株中的Bar基因能正常表达,真叶叶盘在含PPT3mg·L-1(phosphinothricin)分化培养基上能分化愈伤组织及芽;真叶具有抗PPT20mg·L-1浓度以上的能力。获得的TA29-Barnase转基因植株表现雄蕊退化、无花粉产生或产生少量形状畸形且无生活力的花粉。雄性不育植株自花授粉不能坐果,用非转基因保持系花粉授粉后,果实正常膨大结籽,杂交后代对除草剂Basta的抗性按1﹕1分离。不育植株与Cre转基因工程恢复系杂交后,果实也正常膨大结籽。对不育植株与Cre转基因工程恢复系杂交后代进行分子检测,结果发现同时含Bar基因和Cre基因F1植株中的TA29-Barnase雄性不育基因被精确删除。TA29-Barnase基因删除植株育性被恢复,能正常开花结果。【结论】利用Cre/lox重组系统建立的Cre工程恢复系成功将番茄F1代中的不育基因删除,恢复了F1的育性。该研究结果为植物基因工程雄性不育系的育性恢复提供了一条新的途径。

关键词： Cre/lox重组系统工程不育系 Cre工程恢复系番茄

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植物蛋白激酶研究进展

生物学杂志 2003年第3期20卷 1-4页

作者：周庆红李成琼匡全西南农业大学园艺园林学院重庆400716

近年来 ,在分子生物学技术不断完善和在酵母与动物蛋白激酶研究的基础上 ,植物蛋白激酶的研究已取得了很大的进展。就近十年来国内外学者对植物蛋白激酶的发现 ,家族分类 ,磷酸化过程及其生理功能等方面的研究进行综述。最后分析了存在... 详细信息

近年来 ,在分子生物学技术不断完善和在酵母与动物蛋白激酶研究的基础上 ,植物蛋白激酶的研究已取得了很大的进展。就近十年来国内外学者对植物蛋白激酶的发现 ,家族分类 ,磷酸化过程及其生理功能等方面的研究进行综述。最后分析了存在的问题并对今后的研究提出了展望。

关键词：植物蛋白激酶家族分类蛋白质磷酸化生理调控

利用Cre/lox重组系统获得无选择标记的SKTI抗虫转基因烟草

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西北植物学报 2010年第1期30卷 21-29页

作者：宋洪元任雪松司军李成琼宋明雷建军重庆市蔬菜学重点实验室西南大学园艺园林学院重庆400715 华南农业大学园艺学院广州510642

将置于两个同向lox位点之间的Bar基因表达盒与大豆胰蛋白酶抑制剂SKTI基因表达盒融合后获得相应植物表达载体,转化烟草Wisconsin 38后获得对棉铃虫具有明显抗性的SKTI转基因植株。SKTI转基因植株通过叶盘二次转化法导入Cre基因,对再生... 详细信息

将置于两个同向lox位点之间的Bar基因表达盒与大豆胰蛋白酶抑制剂SKTI基因表达盒融合后获得相应植物表达载体,转化烟草Wisconsin 38后获得对棉铃虫具有明显抗性的SKTI转基因植株。SKTI转基因植株通过叶盘二次转化法导入Cre基因,对再生植株叶盘进行Basta的抗性检测,检测Bar基因的删除情况。结果表明：绝大多数再生植株对应叶盘在含8 mg/L PPT的筛选培养基上无法再生,Bar基因被删除的效率在38%-100%之间。对Bar基因删除区域进行PCR及克隆测序后发现Bar基因表达盒被精确删除。对Bar基因删除植株开花自交获得的分离后代进行NPTⅡ抗性检测,5株NPTⅡ敏感植株分子检测显示均只含有SKTI基因而无Cre基因存在,为无选择标记基因的SKTI转基因植株。

关键词： Cre/lox重组系统 SKTI基因无选择标记抗虫转基因烟草

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用胚挽救法创建甘蓝×大白菜抗根肿病新材料

植物保护学报 2016年第3期43卷 419-426页

作者：彭丽莎周俐利任雪松宋洪元李成琼司军西南大学园艺园林学院重庆市蔬菜学重点实验室南方山地园艺学教育部重点实验室重庆400715

为改良甘蓝Brassica oleracea ***的根肿病抗性,以2个甘蓝品种D2、B1为母本和2个抗根肿病大白菜品种CR-英雄、CR-春美杂交,比较4个远缘杂交组合的亲和性,运用胚挽救技术获得试管苗并对远缘杂交种进行真假杂种鉴定、育性研究以及根肿病... 详细信息

为改良甘蓝Brassica oleracea ***的根肿病抗性,以2个甘蓝品种D2、B1为母本和2个抗根肿病大白菜品种CR-英雄、CR-春美杂交,比较4个远缘杂交组合的亲和性,运用胚挽救技术获得试管苗并对远缘杂交种进行真假杂种鉴定、育性研究以及根肿病抗性鉴定来创建和筛选根肿病抗性新种质。结果表明,杂交组合D2×CR-春美的结荚率为86.08%,高于其它组合,而成活的幼胚数/授粉花蕾数和试管苗数/授粉花蕾数以组合D2×CR-英雄最高,分别达15.96%和8.16%,4个组合D2×CR-英雄、D2×CR-春美、B1×CR-英雄、B1×CR-春美分别获得23、8、2、2株试管苗。细胞学鉴定发现杂种茎尖的染色体是19条,结合形态学鉴定确定为真杂种。组合D2×CR-英雄获得的试管苗只有1个株系有花粉,花粉萌发率为0.90%,极显著低于母本对照的40.58%;对该组合的试管苗进行苗期抗根肿病鉴定,有8个株系抗11号生理小种,3个株系抗4号生理小种。表明通过胚挽救技术可筛选到杂交效率较高的远缘杂交组合以及抗根肿病材料。

关键词：甘蓝大白菜种间杂交胚挽救根肿病

结球甘蓝西园六号种子纯度的SSR和SRAP鉴定

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西南大学学报（自然科学版） 2014年第6期36卷 41-46页

作者：袁天成司军宋洪元任雪松李成琼西南大学园艺园林学院/重庆市蔬菜学重点实验室/南方山地园艺学教育部重点实验室重庆400716

用SSR和SRAP标记技术对结球甘蓝西园六号进行品种纯度鉴定,从94对SSR引物和109对SRAP引物中分别筛选出4对条带清晰、多态性较高且具有高度区分度的引物.依据8对引物在西园六号及其亲本的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果,构建了清晰的品种指... 详细信息

用SSR和SRAP标记技术对结球甘蓝西园六号进行品种纯度鉴定,从94对SSR引物和109对SRAP引物中分别筛选出4对条带清晰、多态性较高且具有高度区分度的引物.依据8对引物在西园六号及其亲本的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果,构建了清晰的品种指纹图谱.通过对特异片段的序列分析,比较了亲本特异片段的碱基差异并揭示了杂交后代中产生非亲条带的本质,将SSR转化为SCAR标记.SSR和SRAP分子标记构成的DNA指纹图谱及SCAR标记,为西园六号品种纯度快速鉴定提供了科学依据.

关键词：结球甘蓝纯度鉴定非亲条带序列分析 SCAR

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等电聚焦电泳测定甘蓝自交不亲和性研究

西南农业大学学报（自然科学版） 1998年第2期20卷 104-110页

作者：刘宝敬宋明李成琼王小佳西南农业大学园艺系

利用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法研究了甘蓝（ＢｒａｓｉｃａＯｌｅｒａｃｅａＬ．）自交不亲和系与亲和系的柱头和花粉蛋白质谱带，并进行自交，以考察其亲和指数。结果表明，自交不亲和系与亲和系的柱头蛋白质谱带有明显差异：６条... 详细信息

利用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法研究了甘蓝（ＢｒａｓｉｃａＯｌｅｒａｃｅａＬ．）自交不亲和系与亲和系的柱头和花粉蛋白质谱带，并进行自交，以考察其亲和指数。结果表明，自交不亲和系与亲和系的柱头蛋白质谱带有明显差异：６条带只出现于自交不亲和系中；亲和系柱头没有特异带。对比自交不亲和系开花前２～３天的柱头与成熟柱头的蛋白质谱带，发现了Ｓ特异蛋白质的准确位置，其等电点约为８．３～８．５。此法可用于鉴定甘蓝自交不亲和性。以双蒸水和疏基乙醇作为提取液处理花粉，均未发现自交不亲和系的特征谱带。

关键词：甘蓝等电聚焦自交不亲和性