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Magnetospirillum gryphiswaldense MSR-1磁小体缺失突变株NM4Tn5侧翼序列的克隆及功能分析

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中国科学（C辑） 2005年第4期35卷 349-358页

作者：李峰李颖姜伟王珍芳李季伦农业生物技术国家重点实验室中国农业大学微生物学系

利用mini-Tn5lacZ2对格瑞菲斯瓦尔德磁螺菌(Magnetospirillumgryphiswaldense)MSR-1进行转座插入突变,获得磁小体缺失突变株NM4.通过锚定PCR(anchoredPCR)从NM4中克隆出Tn5插入位点的侧翼序列,获得长5045bp的DNA片段,其中含有6个ORFs,Tn5插入在ORF4中.功能互补实验证明该片段与磁小体的合成有关.对ORF4编码的蛋白进行同源比较和功能分析,发现ORF4编码的蛋白与CaulobactercrescentusCB15的长为200AA的趋化蛋白CheYIII的同源性为25%(30/116),且ORF4编码的蛋白也具有与CheYIII相同的接收磷酸基团的REC结构域,可进行信号传递,因此推测ORF4编码的蛋白可能参与磁小体合成过程中的某种(低氧分压或铁离子浓度)信号的转导.

关键词： Magnetospirillum gryphiswaldense 磁小体缺失突变株基因克隆功能分析 mini-Tn5 缺失突变株侧翼序列磁小体克隆

细菌Ⅱ型分泌途径控制产碱假单胞菌(Pseudomonasalc aligenes)S2中卵磷脂酶的分泌

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科学通报 2005年第16期50卷 1725-1730页

作者：吕静李繁陈三凤李季伦中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100094

从水稻根际分离筛选出1株降解卵磷脂的有机磷降解细菌菌株S2,通过形态指标、生理生化性状、16SrDNA序列、(G+C)含量以及DNA-DNA杂交分析,鉴定为产碱假单胞菌(Pseudomonasalcaligenes).采用双亲接合的方法将带有Tn5转座子的质粒导入产碱... 详细信息

从水稻根际分离筛选出1株降解卵磷脂的有机磷降解细菌菌株S2,通过形态指标、生理生化性状、16SrDNA序列、(G+C)含量以及DNA-DNA杂交分析,鉴定为产碱假单胞菌(Pseudomonasalcaligenes).采用双亲接合的方法将带有Tn5转座子的质粒导入产碱假单胞菌S2菌株中进行转座子插入诱变,从5000个卡那霉素抗性的Tn5插入突变株中,筛选到3株丧失解磷能力的突变株(M808,M1329和M1400)和1株解磷能力增强的突变株(M20).对Tn5插入位点的基因进行DNA测序表明,丧失解磷能力突变株中被突变的基因分别是xcpS,xcpX和xcpW,它们分别编码XcpS,XcpX和XcpW蛋白,这些蛋白是细菌Ⅱ型分泌途径中的主要成分.将xcpS,xcpX和xcpW基因分别构建在pLAFR3载体上,通过双亲接合的方式分别导入上述M808,M1329和M1400三个丧失解磷能力突变株中进行功能互补实验,结果表明这3个基因都能使各自相对应的突变株恢复解磷能力.以上结果表明,在产碱假单胞菌中卵磷脂酶的分泌是通过Ⅱ型分泌途径来完成的.解磷能力的丧失可能是由于Tn5插入xcp基因簇中的某一基因破坏了卵磷脂酶向胞外的分泌,造成突变株不能降解有机磷.在解磷能力增强突变株M20中,被突变的基因与铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)PAO1中的chpA基因(参与细菌的颤动)同源性达88%.

关键词： Pseudomonas alcaligenes 有机磷降解 Tn5转座子 xcpS xcpX xcpW chpA 产碱假单胞菌分泌途径

磁螺菌MSR-1磁小体缺失突变株NM21 Tn5侧翼序列的克隆及功能分析

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科学通报 2009年第7期54卷 892-897页

作者：李峰李颖姜伟王珍芳李季伦农业生物技术国家重点实验室中国农业大学生物学院北京100193 淮北煤炭师范学院生命科学学院资源植物生物学安徽省重点实验室淮北235000

利用mini-Tn5 lacZ2对磁螺菌(Magnetospirillum gryphiswaldense)MSR-1进行转座插入突变,获得磁小体缺失突变株NM21.通过锚定PCR从NM21中克隆出Tn5插入位点的侧翼序列,获得长3073bp的DNA片段,其中含有3个ORF,Tn5插入在ORF1中,互补实验证明该片段与磁小体合成相关.对ORF1编码的蛋白进行同源比较和功能分析,发现ORF1编码的蛋白中部有4个跨膜螺旋,与其同源性较高的序列全部为二价阳离子转运蛋白.BLAST软件分析表明,ORF1编码的蛋白具有COG0053和PRK09509结构域,与FieF和MMT1等二价阳离子转运蛋白家族CDF(cation diffusion facilitator)有相同的结构域,推测其为磁小体膜上Fe2+的转运蛋白,且可能在去除Fe2+对细胞毒害的过程中起着重要作用.

关键词： M.gryphiswaldense 磁小体缺失突变株基因克隆功能分析 Fe^2+转运蛋白

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生物素核酸探针的制备及应用

微生物学通报 1992年第4期19卷 241-245页

作者：何路红阎大来李季伦北京农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100094

随着重组DNA技术的兴起,核酸杂交技术也有很大进展。已往的核酸杂交,主要使用高比活放射性同位素标记的核酸探针以及放射自显影技术的检测手段。但由于放射性同位素半衰期短,易扩散和放射性污染等问题。

关键词：生物素核酸探针

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红豆草根瘤菌的耐盐和共生性状改造

北京农业大学学报 1993年第2期19卷 1-6页

作者：朱晓玉杨苏声李季伦北京农业大学生物学院

本实验以042B 的 DNA 转化 ROG31细胞,在以0.2 mol/L NaCl 为选择标记的YMA 培养基上,获得37个耐盐的菌落,纯化后又经30代的转管移植,有8株转化子获得了稳定的耐盐性,再将这8株转化子回接红豆草植株,得到1株耐0.4 mol/L NaCl 和固氮能... 详细信息

本实验以042B 的 DNA 转化 ROG31细胞,在以0.2 mol/L NaCl 为选择标记的YMA 培养基上,获得37个耐盐的菌落,纯化后又经30代的转管移植,有8株转化子获得了稳定的耐盐性,再将这8株转化子回接红豆草植株,得到1株耐0.4 mol/L NaCl 和固氮能力较好的红豆草根瘤菌 ROt6。供体菌042B 和转化子 ROt1和 ROt6在0.3 mol/L NaCl 培养基中生长时,细胞内积累大量谷氨酸。

关键词：耐盐性红豆草根瘤菌改造

全国克山病病因发病机制暨克山病与扩张型心肌...

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中国地方病学杂志 1991年第5期10卷 257-263页

作者：李季伦赵德育

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发明记录赤霉素的生物合成和应用

发明记录赤霉素的生物合成和应用

N_2和H^+在固氮酶活性中心金属原子簇中还原位点的分析

1963年

作者：俞大绂李季伦等

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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汇雅图书（南通市图书馆）

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科学通报 2007年第10期52卷 1141-1146页

作者：关锋赵德华潘淼姜伟李季伦中国农业大学农业生物技术国家重点实验室生物学院微生物与免疫学系北京100094

目前研究表明,固氮酶的生理底物氮气(N_2)和质子(H^+)在钼铁蛋白中的铁钼辅因子(FeMo-co)上被还原,但其确切的还原位点尚未确定.对比分析了棕色固氮菌(Azotobactervinelandii,Av)野生型(WT)与5种突变株(包括FeMo-co附近2个保守氨基酸α-... 详细信息

目前研究表明,固氮酶的生理底物氮气(N_2)和质子(H^+)在钼铁蛋白中的铁钼辅因子(FeMo-co)上被还原,但其确切的还原位点尚未确定.对比分析了棕色固氮菌(Azotobactervinelandii,Av)野生型(WT)与5种突变株(包括FeMo-co附近2个保守氨基酸α-191^(Gln)和α-195^(His)单突变菌株(Qα191K和Hα195Q)、FeMo-co上钼原子相连的高柠檬酸突变株(nifV^-)以及α-191^(Gln)和α-195^(His)与高柠檬酸的双突变菌株(Qα191K/nifV?和Hα195Q/nifV^-))固氮酶催化还原N_2和H^+活性的变化,结果表明,N_2在靠近FeMo-co中心硫原子(S2B)的Fe2和Fe6上络合和还原,FeMo-co上的钼原子是H^+还原的位点.结合生物信息学分析结果显示,[8Fe7S]和FeMo-co之间可能存在两条平行的电子传递通路.

关键词： Azotobacter vinelandii突变株固氮酶 N2和H^+还原位点电子传递通路

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一株产生聚-β-羟基烷酸细菌的筛选和鉴定

中国公共卫生 2000年第5期16卷 449-451页

作者：刘宏生李季伦辽宁大学环境与生命科学学院沈阳110036 中国农业大学

从北京近郊分离出一株能积累聚 β 羟基烷酸的菌株 ,经分类鉴定 ,确定其为Xanthobacterautotrophicus。并确定了其最适生长条件。提纯的聚 β 羟基烷酸 ,经H NMR证明此多聚体由聚 β 羟基丁酸盐和聚 β 羟基戊酸盐组成。在 2 %GH培... 详细信息

从北京近郊分离出一株能积累聚 β 羟基烷酸的菌株 ,经分类鉴定 ,确定其为Xanthobacterautotrophicus。并确定了其最适生长条件。提纯的聚 β 羟基烷酸 ,经H NMR证明此多聚体由聚 β 羟基丁酸盐和聚 β 羟基戊酸盐组成。在 2 %GH培养基中 ,两者的比例为 1∶2 6,聚 β 羟基烷酸的最高含量达62 70 % (W /DW )。

关键词：聚-β-羟基烷酸细菌筛选鉴定 PHA