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儿童轮状病毒胃肠炎免疫预防专家共识（2024年版）

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中国疫苗和免疫 2024年第1期 95-126页

作者：段招军李金松张静邓莉赵鲁卿李丹地李静欣轮状病毒胃肠炎专家共识编写组中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京中医医院首都儿科研究所

轮状病毒胃肠炎(Rotavirus gastroenteritis, RVGE)是严重威胁5岁以下儿童健康的全球性公共卫生问题。中国RVGE相关疾病负担重，防控难度大。本共识在《儿童轮状病毒胃肠炎免疫预防专家共识(2020版)》和《世界卫生组织轮状病毒疫苗立场... 详细信息

轮状病毒胃肠炎(Rotavirus gastroenteritis, RVGE)是严重威胁5岁以下儿童健康的全球性公共卫生问题。中国RVGE相关疾病负担重，防控难度大。本共识在《儿童轮状病毒胃肠炎免疫预防专家共识(2020版)》和《世界卫生组织轮状病毒疫苗立场文件—2021年7月》的基础上，系统综述了RVGE流行病学、已上市轮状病毒(Rotavirus, RV)疫苗的安全性、有效性和免疫保护持久性、RV疫苗免疫策略等国内外研究进展，增补了常见的RVGE诊疗方案。本共识旨在从预防为主和医防融合的角度出发，推动落实以疫苗接种为重点的RVGE综合性防控措施，降低儿童RVGE疾病负担，为从事疾病预防控制、疫苗接种、临床诊疗等多领域的工作人员提供参考。

关键词：轮状病毒胃肠炎轮状病毒疫苗免疫预防共识

对两株NSP3区插入外源基因的重组轮状病毒遗传稳定性的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第1期38卷 1-6页

作者：李杉刘夏飞余俊杰李丹地段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 河南中医药大学第一临床医学院郑州450046 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的分析2株插入和表达外源基因的重组轮状病毒rLLR/NSP3-NLuc和rLLR/NSP3-CoV2/RBD在MA104细胞上连续传代增殖的遗传稳定性。方法将2株重组轮状病毒滴度测定后, 按照MOI0.01传至P2代, 随后按1∶100稀释并活化上一代病毒裂解液, 连续18... 详细信息

目的分析2株插入和表达外源基因的重组轮状病毒rLLR/NSP3-NLuc和rLLR/NSP3-CoV2/RBD在MA104细胞上连续传代增殖的遗传稳定性。方法将2株重组轮状病毒滴度测定后, 按照MOI0.01传至P2代, 随后按1∶100稀释并活化上一代病毒裂解液, 连续18代(P20)感染MA104细胞, 用间接免疫荧光法测定P1, P5, P10, P15, P20代细胞裂解液病毒滴度, 进行RT-PCR鉴定以及dsRNA-PAGE银染实验, 并检测rLLR/NSP3-NLuc的荧光素酶活性。结果重组轮状病毒rLLR/NSP3-NLuc在20代内均未发现插入片段丢失, 重组病毒滴度为3.85~5.16×10^(6) FFU/ml, 各代次均有较强的荧光素酶信号。重组轮状病毒rLLR/NSP3-CoV2/RBD在第6代出现了插入片段的丢失, 该重组病毒前5代的感染性滴度为:2.6~3.36×10^(6) FFU/ml。结论 NSP3基因末端插入582 bp NLuc的重组轮状病毒具有很好的遗传稳定性, 而NSP3基因末端插入885 bp RBD的重组轮状病毒仅在前5代稳定, 提示重组轮状病毒NSP3基因末端可以插入和表达外源基因, 但其稳定性需要更深入研究。

关键词：重组轮状病毒 MA104细胞遗传稳定性

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轮状病毒疫苗免疫效果影响因素研究进展

中华实验和临床病毒学杂志 2024年第2期38卷 224-230页

作者：车如意李丹地中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

轮状病毒(Rotavirus,RV)是导致全球5岁以下儿童重度胃肠炎最常见的病原之一,接种RV疫苗是控制婴幼儿轮状病毒腹泻最有效的措施。RV疫苗在不同收入水平国家的免疫效果存在差异,本研究对影响RV疫苗免疫效果的因素进行系统阐述,为RV疫苗的... 详细信息

轮状病毒(Rotavirus,RV)是导致全球5岁以下儿童重度胃肠炎最常见的病原之一,接种RV疫苗是控制婴幼儿轮状病毒腹泻最有效的措施。RV疫苗在不同收入水平国家的免疫效果存在差异,本研究对影响RV疫苗免疫效果的因素进行系统阐述,为RV疫苗的研究及免疫策略的制定提供参考。

关键词：轮状病毒疫苗腹泻

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中华预防医学杂志 2024年第4期58卷 421-453页

作者：儿童轮状病毒胃肠炎专家共识编写组段招军李金松张静邓莉赵鲁卿李丹地李静欣不详传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 中国疾病预防控制中心首都儿科研究所北京中医医院

轮状病毒胃肠炎(RVGE)是严重威胁5岁以下儿童健康的全球性公共卫生问题。中国RVGE相关疾病负担重,防控难度大。本共识在《儿童轮状病毒胃肠炎免疫预防专家共识(2020版)》和《世界卫生组织轮状病毒疫苗立场文件-2021年7月》的基础上,系... 详细信息

轮状病毒胃肠炎(RVGE)是严重威胁5岁以下儿童健康的全球性公共卫生问题。中国RVGE相关疾病负担重,防控难度大。本共识在《儿童轮状病毒胃肠炎免疫预防专家共识(2020版)》和《世界卫生组织轮状病毒疫苗立场文件-2021年7月》的基础上,系统阐述了RVGE流行病学、已上市轮状病毒(RV)疫苗的安全性、有效性和免疫保护持久性、RV疫苗免疫策略等国内外研究进展,增补了常见的RVGE诊疗方案。本共识旨在从预防为主和医防融合的角度出发,推动落实以疫苗接种为重点的RVGE综合性防控措施,降低儿童RVGE疾病负担,为从事疾病预防控制、疫苗接种、临床诊疗等多领域的工作人员提供参考。

关键词：轮状病毒胃肠炎轮状病毒疫苗免疫预防共识

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中国疫苗和免疫 2024年第1期30卷 95-126页

作者：轮状病毒胃肠炎专家共识编写组段招军李金松张静邓莉赵鲁卿李丹地李静欣不详传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所中国疾病预防控制中心首都儿科研究所北京中医医院

轮状病毒胃肠炎(Rotavirus gastroenteritis,RVGE)是严重威胁5岁以下儿童健康的全球性公共卫生问题。中国RVGE相关疾病负担重,防控难度大。本共识在《儿童轮状病毒胃肠炎免疫预防专家共识(2020版)》和《世界卫生组织轮状病毒疫苗立场文... 详细信息

轮状病毒胃肠炎(Rotavirus gastroenteritis,RVGE)是严重威胁5岁以下儿童健康的全球性公共卫生问题。中国RVGE相关疾病负担重,防控难度大。本共识在《儿童轮状病毒胃肠炎免疫预防专家共识(2020版)》和《世界卫生组织轮状病毒疫苗立场文件—2021年7月》的基础上,系统综述了RVGE流行病学、已上市轮状病毒(Rotavirus,RV)疫苗的安全性、有效性和免疫保护持久性、RV疫苗免疫策略等国内外研究进展,增补了常见的RVGE诊疗方案。本共识旨在从预防为主和医防融合的角度出发,推动落实以疫苗接种为重点的RVGE综合性防控措施,降低儿童RVGE疾病负担,为从事疾病预防控制、疫苗接种、临床诊疗等多领域的工作人员提供参考。

关键词：轮状病毒胃肠炎轮状病毒疫苗免疫预防共识

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G6P[1]型牛轮状病毒的分离培养及鉴定

中国人兽共患病学报 2024年第2期40卷 134-139页

作者：王铭月张锦华章青孔翔羽王宏孙晓曼李丹地庞立丽段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的从轮状病毒阳性的牛粪便标本中,分离出一株G6P[1]型牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,BRV),对其进行培养和鉴定。方法用PBS溶液重悬粪便标本并离心,将其上清过滤除菌和胰酶处理后,利用MA104细胞进行分离培养;通过逆转录-聚合酶链式反应(... 详细信息

目的从轮状病毒阳性的牛粪便标本中,分离出一株G6P[1]型牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,BRV),对其进行培养和鉴定。方法用PBS溶液重悬粪便标本并离心,将其上清过滤除菌和胰酶处理后,利用MA104细胞进行分离培养;通过逆转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription-polymerase Chain Reaction,RT-PCR)对样本VP4和VP7基因进行扩增和测序,与GenBank上的参考序列进行同源性分析,构建进化树,分析确定其G/P基因分型。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Polyacrylamine Gel Electrophoresis,PAGE)、噬斑实验和电镜(Transmission Electron Microscope,TEM)等技术对分离到的病毒进行鉴定和纯化。绘制病毒生长动力学曲线。结果分离培养了1株BRV毒株,将其命名BLL。VP7和VP4基因测序结果显示此毒株为G6P[1]型轮状病毒。PAGE胶结果显示分离株电泳型为长型,条带呈现A组轮状病毒排列电泳图谱;通过噬斑实验将毒株进行了纯化。电镜检测到典型的轮状病毒颗粒。病毒生长动力学曲线可发现病毒在感染后6 h已经开始复制。结论本研究成功分离到G6P[1]型牛型轮状病毒,为研究G6P[1]型轮状病毒的病原学特征提供实验基础和技术参考。

关键词：轮状病毒 G6P 分离噬斑实验纯化序列分析

中国罕见A组轮状病毒DS-1样G3P[8]的全基因组分子特征分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第1期38卷 29-36页

作者：熊光萍魏宇航彭蕊范佳欣唐晓苹黄枝妙董梦洁车如意李丹地甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 北京市通州区卫生健康监督所北京101100 福建省疾病预防控制中心福州350012

目的对2021年采集于我国福建的A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)G3P[8]毒株FJ21351116进行全基因组分子特征分析。方法使用高灵敏度A组轮状病毒全基因组测序方法对FJ21351116进行全基因组测序。用MEGA11.0、Geneious9.0.2和DNASTAR... 详细信息

目的对2021年采集于我国福建的A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)G3P[8]毒株FJ21351116进行全基因组分子特征分析。方法使用高灵敏度A组轮状病毒全基因组测序方法对FJ21351116进行全基因组测序。用MEGA11.0、Geneious9.0.2和DNASTAR软件通过核酸序列分析评估病毒的基因组特征。使用BioEdit v.7.***.9.0和PyMOL v.2.5.2分析VP7和VP4(VP8*)的中和表位。结果我国福建RVA毒株FJ21351116基因型为G3-P[8]-I2-R2-C2-M2-A2-N2-T2-E2-H2,系统进化分析显示,FJ21351116株的VP7、VP4、VP3、NSP2-NSP5基因与近几年日本检测到的马样DS-1样G3P[8]基因存在亲缘关系。而VP6、VP1、VP2、NSP1基因与大部分国家G2P[4]的相应基因亲缘关系近,特别是新加坡,表明该毒株是马样G3P[8]毒株与G2P[4]毒株共感染过程中通过基因重配形成的。FJ21351116的VP7/VP4基因与Rotarix和RotaTeq疫苗的进化分析表明,VP7和VP4(VP8*)中和抗原表位与疫苗氨基酸位点均存在多个突变。推测Rotarix和RotaTeq疫苗针对马样DS-1样G3P[8]RVA的保护效果不佳,且与Rotarix的中和抗原表位氨基酸差异高于RotaTeq。结论本研究发现一例中国罕见的DS-1样G3P[8]型RVA毒株,且疫苗株可能对其保护效果差,强调了持续监测RVA毒株及研发高效覆盖面全的RVA疫苗的重要性。

关键词： A组轮状病毒全基因组 DS-1-like G3P 分子特征

基于慢病毒包装构建稳定表达Cas9蛋白的Caco-2细胞系

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中国生物制品学杂志 2024年

作者：王铭月刘欣奕张锦华章青王宏孔翔羽孙晓曼庞立丽李丹地段招军甘肃中医药大学公共卫生学院传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所大连医科大学附属第二医院

目的采用成簇的规律性间隔短回文重复序列及其相关蛋白9(clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)系统构建基因敲除细胞文库，以人结肠腺癌细胞Caco-2为研究对象构建稳定表达Cas9蛋白的细胞系。方法包装重组Cas9慢病毒并感染Caco-2细胞，经杀稻瘟菌素及2次有限稀释法筛选Caco-2/Cas9单克隆细胞，并进行PCR和Western blot鉴定。用同时表达GFP和带有GFP向导RNA(single guide RNA,sgRNA)的慢病毒感染Caco-2/Cas9单克隆细胞，经嘌呤霉素筛选后，采用流式细胞术检测结果计算Caco-2细胞株的敲除效率，CCK-8法检测其细胞增殖活性。结果共获得5株Caco-2/Cas9单克隆细胞系，分别命名为Caco-2/Cas9-2、Caco-2/Cas9-3、Caco-2/Cas9-4、Caco-2/Cas9-5和Caco-2/Cas9-6，均可扩增出392 bp的Cas9基因条带，Cas9蛋白在细胞中稳定表达，敲除效率分别为91.27%、20.30%、24.13%、11.33%、12.27%、8.89%;Caco-2/Cas9-4、Caco-2/Cas9-5、Caco-2/Cas9-6 3株单克隆细胞及未感染Caco-2细胞的增殖活性分别为2.07、1.75、1.46和1.40。Caco-2/Cas9-5、Caco-2/Cas9-6单克隆细胞与未感染Caco-2细胞比较，差异均无统计学意义（t分别为1.92和0.37,P均> 0.05）。结论筛选出1株具有Cas9高酶切活性且细胞增殖活性较未感染Caco-2细胞无显著变化的Caco-2/Cas9单克隆细胞系，即Caco-2/Cas9-6单克隆细胞，为进一步构建高覆盖率敲除细胞文库奠定了基础，也为筛选病毒感染有关基因和其他特定功能基因提供了平台。

关键词： Cas9蛋白 Caco-2细胞基因敲除成簇的规律性间隔短回文重复序列

中国中南部G8P[8]型A组轮状病毒全基因组遗传特征研究

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病毒学报 2024年第1期40卷 27-37页

作者：熊光萍田毅范佳欣唐晓苹董梦洁车如意李伟红唐梅荣周珺刘颂王铭月李丹地段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 沧州医学高等专科学校病原生物学与免疫学教研室沧州061001 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 北京市疾病预防控制中心北京100013 广西壮族自治区疾病预防控制中心南宁530028 江西省疾病预防控制中心南昌330046 青岛市疾病预防控制中心青岛266033

G8基因型轮状病毒已在我国出现并迅速增加。本研究拟对采集于中国中南部5岁以下急性胃肠炎患儿的7例G8P[8]型RVA毒株进行全基因组分子特征分析。对轮状病毒特异性扩增结合高通量测序方法对中国中南部14株G8P[8]型RVA毒株进行全基因组测... 详细信息

G8基因型轮状病毒已在我国出现并迅速增加。本研究拟对采集于中国中南部5岁以下急性胃肠炎患儿的7例G8P[8]型RVA毒株进行全基因组分子特征分析。对轮状病毒特异性扩增结合高通量测序方法对中国中南部14株G8P[8]型RVA毒株进行全基因组测序。利用MEGA11.0、Geneious Prime、Geneious9.0.2和DNASTAR软件对RVA毒株进行全序列及遗传变异和进化分析。7株G8P[8]型RVA的基因分型为G8-P[8]-I2-R2-C2-M2-A2-N2-T2-E1-H2,显示为DS-1样基因型。系统进化树结果显示,本研究中国中南部7株G8P[8]分为两大谱系G8-I(13株)和谱系G8-Ⅱ(1株),VP7的最大分支可信度(MCC)树表明,G8的平均进化率估计为1.4×10^(-3)替换/位点/年。G8P[8]基因型RVA在我国包括两个谱系,从该病毒在中国的出现到该病毒在中国的流行传播将经过1~2年,持续的全国RVA监测至关重要。

关键词：轮状病毒 G8P基因型分子特征平均进化率