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杭白菊提取液对小牛血管平滑肌细胞凋亡及抗氧化性的研究

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杭白菊提取液对小牛血管平滑肌细胞凋亡及抗氧化性的研究

作者：方雪玲浙江大学

学位级别：硕士

一、背景细胞凋亡是20世纪70年代提出的一个新的细胞死亡概念。是指在一定的生理或病理因素条件下，在基因活动的控制下，遵循自身程序的一种主动的细胞死亡过程。近几年的研究表明，细胞凋亡的异常不仅见于肿瘤等疾病，在心血管疾病... 详细信息

一、背景细胞凋亡是20世纪70年代提出的一个新的细胞死亡概念。是指在一定的生理或病理因素条件下，在基因活动的控制下，遵循自身程序的一种主动的细胞死亡过程。近几年的研究表明，细胞凋亡的异常不仅见于肿瘤等疾病，在心血管疾病中也起着重要作用，运用细胞凋亡现象来解释某些临床问题，已成为心血管疾病研究的新思路。动脉粥样硬化(AS)是心血管系统的常见病，是构成威胁人类健康的主要疾病之一。自从1995年Bennet等证实AS斑块中血管平滑肌细胞(VSMC)的死亡是以凋亡形式发生后，吸引了众多学者对这一方面进行了研究，他们发现：在AS中VSMC凋亡的发生率较正常明显增高，由于VSMC的大量凋亡，同时不能分泌足量的细胞外基质来维持组织结构，使斑块的稳定性降低;另外，凋亡的VSMC不但具有产生凝血酶的能力，还能够暴露AS斑块局部的阴性磷脂酰丝氨酸，诱发局部血栓形成，，导致AS斑块破裂、动脉瘤形成、急性心肌梗塞、肢体坏死和猝死等急性临浙江大学硕士学位论文床并发症的发生。因此，若有某种药物能阻断AS晚期VSMC的凋亡，可能会有助于防止AS并发症的发生。杭白菊是菊科多年生草本相物菊的花，含有多种药效成分，其中黄酮类化合物是其主要成份之一，而黄酮类化合物被认为是与人体密切相关的生理活性物质具有清除自由基作用。二、目的本实验通过观蔡杭白菊提取液是否抑制小牛VSMC凋亡及其对培养液中 SOD、MDA含量的变化，进一步探讨杭白菊提取液在预防AS并发症方面的作用及其可能的作用机制。三、方法 1、VSMC的培养：原代细胞培养采用组织贴块种植法，取新生小牛胸主动脉，剥净外膜、内膜，剪成约lmm‘的小组织块，接种于25ml的培养瓶内。加入含20％NCS的1640培养液，放入37oC。5％CO。孵箱，每隔3～sd换液一次，倒置显微镜下动态观察细胞生长情况。待细胞生长融合出现“峰与谷” 结构后，用0．25％胰蛋白酶消化传代（按1;2进行）。在相差显微镜下细胞呈梭形或长梭形，重叠生长达多层，高低起伏呈“峰与谷”，无接触抑制现象。实验选用第4～5代细胞。 2、分组：本实验分 VSMC正常凋亡组和 VSMC异常凋亡组。取长成致密单层的 VSMC接种于 6孔培养板中门～孔L 37aC，5OCOZ培养 24 ’h时后，VSMC正常凋亡组继续给以含20oNCS的培养液：VSMC异常凋亡组则更换成无血清培养液，目的是去除血清生长因子，建立VSMC异常凋亡模型。异常凋亡组又分成五组，无杭白菊组作为空白对照组，其它四组分别加入不同浓度的杭白菊提取液瞩0，100，200，400As／ml入以上每组均为4复孔。上述细胞继续培养48小时后收集培养液，离心10分钟 3 浙江大学硕士学位论文（2000r／mi），取上清液作为待测样品，余细胞即刻行凋亡细胞检测。 3、SOD、MDA的检测：取上述细胞培养的上清液，在分光光度仪下行SOD、 MDA测定。SOD检测采用邻苯三酚自氧化抑制法，在波长550urn处比色，以每ml培养液中SOD活力单位（U／ml）表示;MDA检测通过MDA W与硫代巴比妥酸结合，形成红色产物，在532urn处有最大吸收峰。为确定杭白菊本身对SOD、MDA的测量有无影响，同时取少量未加杭白菊组的上清液加入400。g;’L的杭白菊，进行 SOD和＼IDA测定。 4、流式细胞仪鉴别凋亡细胞：每孔加入***含***。的DMENI液和 sul Annexin V FITC液，室温下孵育 10分钟，弃去上清液，用上述DMEM 液反复冲洗2次，加入极少量的0．25％胰蛋白酶，吹打获取细胞，用缓冲液将细胞稀释至 10乙 10‘尬l，加入＊液，在 0”C孵育

关键词：杭白菊提取液细胞凋亡抗氧化性血管平滑肌空白对照组胸主动脉自由基作用细胞外基质心血管疾病药效成分

丙二醛和超氧化物歧化酶浓度评估脓毒症患者预后的研究进展

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中华急诊医学杂志 2017年第2期26卷 247-249页

作者：许俞露方强方雪玲浙江大学医学院附属第一医院ICU 杭州310006

1脓毒症、氧化应激及常用的氧化应激指标脓毒症（sepsis）是感染情况下宿主反应失调导致的危及生命的器官功能障碍。脓毒症在临床上十分多见，高病死率和高治疗费用使脓毒症成为了危重病医学研究的焦点。据报道，2011年美国用于治疗脓... 详细信息

1脓毒症、氧化应激及常用的氧化应激指标脓毒症（sepsis）是感染情况下宿主反应失调导致的危及生命的器官功能障碍。脓毒症在临床上十分多见，高病死率和高治疗费用使脓毒症成为了危重病医学研究的焦点。据报道，2011年美国用于治疗脓毒症的费用高达200亿美元，占总临床医疗费用的5．2％。近年来，脓毒症的发病率还在逐年增长.

关键词：超氧化物歧化酶脓毒症患者丙二醛预后评估浓度器官功能障碍治疗费用

液体复苏对重症脓毒症患者黏附分子及血流动力学的作用

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中国危重病急救医学 2006年第9期18卷 539-541页

作者：方雪玲方强蔡国龙严静浙江大学医学院附属第一医院重症监护室浙江杭州310003 浙江医院

目的探讨液体复苏对重症脓毒症患者黏附分子及血流动力学的影响。方法将38例重症脓毒症患者随机分为快速液体复苏组和常规补液速度组。记录液体复苏时间、液体用量以及阿拉明用量监测液体复苏前后:1血流动力学指标,包括心率、平均动脉... 详细信息

目的探讨液体复苏对重症脓毒症患者黏附分子及血流动力学的影响。方法将38例重症脓毒症患者随机分为快速液体复苏组和常规补液速度组。记录液体复苏时间、液体用量以及阿拉明用量监测液体复苏前后:1血流动力学指标,包括心率、平均动脉压、中心静脉压;2组织灌注指标,如血乳酸水平;3黏附分子指标,包括血浆P选择素及细胞间黏附分子1浓度。结果两组患者性别、年龄、急性生理学与慢性健康状况评分系统(APACHE)评分差异均无显著性。常规补液速度组复苏时间与快速液体复苏组比较差异无显著性;与常规补液速度组比较,快速液体复苏组液体用量较多,阿拉明用量较少(P均<0.05);与常规补液速度组比较,快速液体复苏组复苏后患者的平均动脉压及中心静脉压均增高,心率、血乳酸、血浆P选择素及细胞间黏附分子1浓度均降低(P均<0.05),且较复苏前均有所改善。结论重症脓毒症患者尽早进行液体复苏可改善其内皮细胞功能,抑制黏附分子的表达,其机制可能与液体复苏改善血流动力学状态、改善组织灌注有关。

关键词：脓毒症液体复苏黏附分子血流动力学

生大黄对脓毒症患者血浆D-乳酸及前降钙素表达的影响

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中国中西医结合杂志 2006年第2期26卷 128-130页

作者：方雪玲方强骆建军浙江大学医学院附属第一医院监护室杭州310003

目的观察生大黄对脓毒症患者血浆D乳酸和前降钙素的影响。方法前瞻、随机抽取符合入选条件的脓毒症患者40例,分为治疗组(18例)和对照组(22例)。治疗组给予生大黄9g/d,对照组给予常规治疗,于治疗前和治疗后测定患者血浆D乳酸和前降钙素... 详细信息

目的观察生大黄对脓毒症患者血浆D乳酸和前降钙素的影响。方法前瞻、随机抽取符合入选条件的脓毒症患者40例,分为治疗组(18例)和对照组(22例)。治疗组给予生大黄9g/d,对照组给予常规治疗,于治疗前和治疗后测定患者血浆D乳酸和前降钙素水平。结果治疗前治疗组患者的血浆D乳酸水平(mmol/L)0.18±0.05和前降钙素水平(μg/L)6.50±2.37,与对照组(0.19±0.06、6.98±2.89)比较,差异无显著性(P>0.05);治疗后治疗组血浆D乳酸水平0.09±0.03和前降钙素水平2.21±0.61较对照组(0.24±0.06、4.11±1.40)明显下降(P<0.05)。结论生大黄能改善脓毒症患者肠道黏膜通透性,减少肠道细菌移位,减轻脓毒症。

关键词：生大黄脓毒症 D-乳酸前降钙素

冠心病患者可溶性细胞粘附分子的检测及其临床意义

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临床心血管病杂志 2002年第7期18卷 302-304页

作者：李霞方雪玲王锡田楼基余浙江大学医学院附属第一医院心内科杭州310003 浙江大学医学院附属第一医院监护室浙江大学医学院附属第一医院血液病研究所

目的 :检测冠心病 (CHD)患者可溶性细胞间粘附分子 1(sICAM 1)及P 选择素的变化 ,探讨其在CHD发病机制中的意义。方法 :用ELISA法和酶法分别检测 6 8例CHD患者和 5 5例对照者的血清sICAM 1、P 选择素、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋... 详细信息

目的 :检测冠心病 (CHD)患者可溶性细胞间粘附分子 1(sICAM 1)及P 选择素的变化 ,探讨其在CHD发病机制中的意义。方法 :用ELISA法和酶法分别检测 6 8例CHD患者和 5 5例对照者的血清sICAM 1、P 选择素、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯 (TG)、总胆固醇水平 ,Gensini积分法评价冠状动脉病变程度 ,进行统计学分析。结果 :CHD患者血清sICAM 1和P 选择素水平均较对照组高 ,且差异有非常显著性意义 (均P <0 .0 0 1) ;sICAM 1水平与冠状动脉病变程度显著相关 (r =0 .6 6 2 ,P <0 .0 0 1) ;TG与sICAM 1水平呈正相关 (r =0 .4 0 3,P <0 .0 1) ;P 选择素与冠状动脉病变程度无明显关系。结论 :sICAM 1及P 选择素可能参与了CHD的发病过程 ,血清sICAM 1的检测有助于临床病情分析 ,TG是影响sICAM 1水平的因素之一。

关键词：冠心病可溶笥细胞粘附分子检测临床意义

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脓毒症患者氨基酸谱的变化及其临床意义

中国急救医学 2006年第1期26卷 58-59页

作者：卢阳珍方强方雪玲浙江大学医学院附属第一医院监护室浙江杭州310003

目的观察脓毒症病人氨基酸谱的变化。方法设立实验组(脓毒症组)及对照组(健康志愿者),并观察其氨基酸谱的变化,分析两组病人的氨基酸谱,并测定脓毒症组病人的氮平衡及前白蛋白。结果20例脓毒症病人均处于负氮平衡,前白蛋白明显下降,脓... 详细信息

目的观察脓毒症病人氨基酸谱的变化。方法设立实验组(脓毒症组)及对照组(健康志愿者),并观察其氨基酸谱的变化,分析两组病人的氨基酸谱,并测定脓毒症组病人的氮平衡及前白蛋白。结果20例脓毒症病人均处于负氮平衡,前白蛋白明显下降,脓毒症组病人的支链氨基酸(BCAA)、门冬氨酸、丙氨酸、丝氨酸、谷氨酸及氨较对照组明显下降,而苏氨酸、蛋氨酸及半胱氨酸较对照组明显升高,支链氨基酸的变化与APACHEⅡ评分、氮平衡及前白蛋白的变化呈正相关性。结论脓毒症病人处于高分解代谢状态,蛋白质合成减少,氨基酸代谢发生变化,支链氨基酸的变化与疾病预后呈相关性。

关键词：脓毒症氨基酸谱