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基于分子生物学与免疫学技术的肿瘤综合实验课程的设计及思考

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中国免疫学杂志 2024年第10期40卷 2180-2183,2188页

作者：杨明陈多多房明丽王弘瑞李冬苏盈盈杨巍吉林大学基础医学院长春130021

为适应生命科学及医学全面发展的需要,实现本科生实验课程的连贯性和交叉性,需打破常规单一课程实验的教学内容,开展肿瘤综合实验课程的教学改革。分子生物学和免疫学是与生命科学、基础医学及临床医学的科学研究联系最为紧密的两门基... 详细信息

为适应生命科学及医学全面发展的需要,实现本科生实验课程的连贯性和交叉性,需打破常规单一课程实验的教学内容,开展肿瘤综合实验课程的教学改革。分子生物学和免疫学是与生命科学、基础医学及临床医学的科学研究联系最为紧密的两门基础学科,也是学生获得技能训练与形成完善科学思维的重要助力来源。本研究将以肿瘤相关基因的分析及干预为切入点,尝试以分子生物学与免疫学技术为主体进行实验课程整合,初步探索建立新的肿瘤综合实验课程。课程注重学生逻辑思维的开发,通过数据库筛选、实验操作、实验汇报及论文撰写等多个环节模拟科研过程,以期望显著提高本科生对科研的兴趣和理论联系实际的能力,培养学生严谨的科学创新思维能力及全面分析问题和解决问题的能力,为将来研究生阶段相关的科学研究奠定坚实基础。同时,有助于培养具备多学科知识储备的师资力量,通过教学促进科研的协调发展。

关键词：实验课分子生物学免疫学整合肿瘤

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重组牛O型口蹄疫疫苗的构建、表达、纯化及结构优化

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重组牛O型口蹄疫疫苗的构建、表达、纯化及结构优化

作者：房明丽吉林大学

学位级别：硕士

牛O型口蹄疫(FMD)是一种由牛O型口蹄疫病毒(FMDV)引起的急性传染性疾病,传播速度快,易引起爆发流行。为了研制牛O型FMD重组蛋白疫苗,我们根据牛O型FMDV VP1的B细胞表位和T细胞表位结构特征,以不同连接方式设计了多种表位多肽,利用分子... 详细信息

牛O型口蹄疫(FMD)是一种由牛O型口蹄疫病毒(FMDV)引起的急性传染性疾病,传播速度快,易引起爆发流行。为了研制牛O型FMD重组蛋白疫苗,我们根据牛O型FMDV VP1的B细胞表位和T细胞表位结构特征,以不同连接方式设计了多种表位多肽,利用分子生物学软件对其空间结构进行了预测分析,其中FMD-J11的结构类似于病毒VP1,即球形蛋白表面有一个呈环状结构的B细胞表位。然后,采用PCR法和克隆-亚克隆法人工合成了FMD-J11的编码基因,将其克隆入原核表达载体pET28a,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达了FMD-J11。其次,筛选了高产、稳定地表达FMD-J11蛋白的工程菌种,并进行了中式规模的发酵培养,建立了适合该菌株培养的发酵条件。利用镍亲和层析及变复性方法获得了纯度大于98%的FMD-J11蛋白,并在FMD-J11免疫的豚鼠血清中检测到1:156效价的病毒中和抗体。为了解决FMD-J11纯化中易形成多聚体问题,以点突变方法对其结构进行了优化改造,获得了具有更强抗原性的突变体(FMD-J11-A)。本研究有望将FMD-J11-A开发为牛O型口蹄疫的重组蛋白疫苗,为基因工程疫苗的设计提供了新思路。

关键词：重组蛋白疫苗 FMDV 表达纯化结构优化

中职学校“双师型”教师培养策略研究 ——以大连A学校为例

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中职学校“双师型”教师培养策略研究 ——以大连A学校为例

作者：房明丽辽宁师范大学

学位级别：硕士

职业教育是为了培养具有生产技能和建设技能及服务与管理技能的一线人才,为此职业教育必须具备高质量、高水平、高技能的师资队伍,不但具有专业知识传授的能力,而且需要教育学生基础知识,同时能够正确引导学生学以致用,在实践中把知识... 详细信息

职业教育是为了培养具有生产技能和建设技能及服务与管理技能的一线人才,为此职业教育必须具备高质量、高水平、高技能的师资队伍,不但具有专业知识传授的能力,而且需要教育学生基础知识,同时能够正确引导学生学以致用,在实践中把知识化为生产力。然而,“双师型”教师是当前各个职业教育学校非常短缺的人才,所以职业教育培养目的的实现面临非常大的困难,而且人才质量无法提高,已成为职业教育培养人才路上的绊脚石,也成为院校再发展必须突破的瓶颈。所以,当务之急是构建“双师型”师资队伍,只有师资力量得以保障,学校的发展才会立在坚固的磐石上。故而,“双师型”师资队伍的构建,将作为职业教育当前首当其冲的目标。本文立足于“双师型”教师的培养现状及存在的问题,借助访谈法和文献法及问卷调查法对“双师型”教师在培养过程中存在的困难和问题进行一一剖析,主要问题原因在于:“双师型”教师的培养目标不清晰;“双师型”教师的培养机制不完善;对“双师型”教师培养管理水平有待提高;“双师型”教师的自我发展意识薄弱;企业实践环节没有发挥相应的作用,“双师型”教师与实际生产脱轨,缺乏相应的激励对策。针对这些困难和问题,本课题给予相应的分析和解决方案。提出促进中职学校在“双师型”教师发展的系列对策,同时依托国外和国内在此方面的研究成果与经验,统筹企业与政府及学校各个部门的力量,对“双师型”教师的发展目标和培养模式进行科学探索,此外还借助实际调查提出可行性的培养方案和举措,并针对大连市A中职学校教师专业化发展需求来制定合理的教育发展规划和模式,从而提升教育的实际效力,使教师培养能够付诸于实践,促进职业教育的正规化发展,最终为其培养人才提供雄厚的师资队伍,从而促进职业教育的健康有序发展。

关键词：中职学校 “双师型”教师培养

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肖咏涵：自得其乐的“小国画迷”

知心姐姐（奇妙语文故事） 2017年第7期 24-26页

作者：房明丽

肖咏涵，北京市东交民巷小学六年级的小姑娘。她梳着马尾辫，说话时声音甜甜的、脆脆的，明亮的眼睛里充满了笑意。在老师面前，

关键词：国画自得小学六年级北京市老师

一种基于植物瞬时表达研制新冠病毒重组蛋白疫苗的方法

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中国免疫学杂志 2022年第20期38卷 2512-2516页

作者：王弘瑞赵丽娟房明丽杨明吉林大学基础医学院分子生物学教研室长春130021

目的:探究一种以植物烟草为瞬时表达载体快速且高效研制和表达SARS-CoV-2重组蛋白疫苗的方法。方法:培育植物烟草,当烟草生长到第6周时,叶片生长到接近手掌大小,可用于下一步的农杆菌渗透。构建包含SARS-CoV-2 S重组质粒的农杆菌。培养... 详细信息

目的:探究一种以植物烟草为瞬时表达载体快速且高效研制和表达SARS-CoV-2重组蛋白疫苗的方法。方法:培育植物烟草,当烟草生长到第6周时,叶片生长到接近手掌大小,可用于下一步的农杆菌渗透。构建包含SARS-CoV-2 S重组质粒的农杆菌。培养含目的基因的农杆菌,来获得农杆菌渗透液。选择待渗透的目标叶片,用针头轻轻在叶片上刺穿一个小孔,然后将制备好的农杆菌渗透液注入叶片,使其慢慢吸收渗透液。需要从渗透后的烟叶中提取和纯化SARS-CoV-2 S重组蛋白,并进行初步鉴定。对SARS-CoV-2 S重组蛋白进行纯化与鉴定,并对纯化的SARS-CoV-2 S重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果:采用植物烟草成功地表达SARS-CoV-2 S重组蛋白,其分子量约为53.2 kD,Western blot结果显示His-tag抗体可以识别SARS-CoV-2 S重组蛋白。结论:基于植物的瞬时表达系统可作为SARS-CoV-2重组蛋白疫苗的快速研制方法。

关键词： COVID-19 植物生产疫苗瞬时表达系统本氏烟草农杆菌渗透法

CD14和IL-8基因多态性与新生儿坏死性小肠结肠炎易感性的关联性分析

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吉林大学学报（医学版） 2016年第5期42卷 958-962页

作者：田佳怡朱彤王健房明丽严超英吉林大学第一医院新生儿科吉林长春130021 吉林大学第一医院儿科研究所吉林长春130021

目的：探讨白细胞分化抗原14（CD14）-159C/T（rs2569190）和白细胞介素8（IL-8）-251A/T（rs4073）基因多态性与坏死性小肠结肠炎（NEC）易感性之间的关系,阐明NEC易感性的可能影响因素,为NEC的发病机制研究提供遗传学理论依据。方法... 详细信息

目的：探讨白细胞分化抗原14（CD14）-159C/T（rs2569190）和白细胞介素8（IL-8）-251A/T（rs4073）基因多态性与坏死性小肠结肠炎（NEC）易感性之间的关系,阐明NEC易感性的可能影响因素,为NEC的发病机制研究提供遗传学理论依据。方法：选取28例NEC新生儿（NEC组）和41例非NEC新生儿（对照组）作为研究对象,提取并应用基因聚合酶链式反应（PCR）扩增其外周血DNA,并采用Sanger基因测序方法,检测CD14-159C/T和IL-8-251A/T区域的等位基因频数和基因型频数的分布,探讨其与NEC易感性的关联性。结果：CD14-159C/T和IL-8-251A/T位点基因型频数分布符合Hardy-Weinberg平衡定律（P〉0.05）;CD14-159C/T的等位基因和基因型频数分布在2组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）;IL-8-251A/T位点的基因型频数分布在2组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）;而NEC组IL8-251A/T基因位点T等位基因频数分布高于对照组（χ~2=4.184,P=0.041,OR=2.14,95%CI：1.03~4.46）。结论：CD14-159C/T的基因位点多态性和NEC的发病无关联,而IL-8基因的-251T位点与NEC发病易感性存在关联,IL-8基因的-251T等位基因突变可能是NEC的危险因素之一。

关键词：坏死性小肠结肠炎白细胞分化抗原14 白细胞介素-8 单核苷酸多态性

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T-2毒素免疫毒性分子机制的研究进展

中国免疫学杂志 2022年第19期38卷 2430-2432,F0003页

作者：王弘瑞赵丽娟房明丽杨明(指导) 吉林大学基础医学院分子生物学教研室长春130021

T-2毒素是由镰刀菌代谢产生的一种毒性很强的霉菌毒素,是单端孢霉稀族类毒素的一种。T-2毒素具有典型的免疫毒性特征,目前已证实了T-2毒素诱导的免疫毒性与氧化应激、炎症反应、凋亡及自噬等分子机制有关,涉及多条信号通路,调节与免疫... 详细信息

T-2毒素是由镰刀菌代谢产生的一种毒性很强的霉菌毒素,是单端孢霉稀族类毒素的一种。T-2毒素具有典型的免疫毒性特征,目前已证实了T-2毒素诱导的免疫毒性与氧化应激、炎症反应、凋亡及自噬等分子机制有关,涉及多条信号通路,调节与免疫应答和细胞凋亡/存活相关的信号分子表达。氧化应激是T-2毒素诱导DNA断裂和凋亡的关键毒性机制,细胞凋亡通路维持毒素免疫调控的动态平衡,而自噬可促进T-2毒素诱导的免疫抑制,在免疫调控中发挥着关键而复杂的作用。此外,T-2毒素免疫调控中也存在类似“免疫逃逸”的机制。本综述对T-2毒素的免疫毒性及其毒性作用的分子机制进行了详细阐述,为T-2毒素的毒性机制及防控研究提供参考。

关键词： T-2毒素免疫毒性氧化应激细胞凋亡自噬

Toll样受体9在病毒性心肌炎中作用的研究进展

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中华实用儿科临床杂志 2018年第1期33卷 78-80页

作者：聂抒王慧房明丽韩燕燕吉林大学第一医院小儿心血管科长春130021 吉林大学基础医学院分子生物学教研室长春130021

Toll样受体是机体识别抵御病原微生物的重要防线，在天然免疫反应中发挥重要作用。Toll样受体9（TLR9）通过识别CpGDNA诱导炎性反应，过度激活可造成炎性损伤。研究发现病毒性心肌炎（VMC）时由损伤的心肌细胞释放的内源性核酸能激活TLR... 详细信息

Toll样受体是机体识别抵御病原微生物的重要防线，在天然免疫反应中发挥重要作用。Toll样受体9（TLR9）通过识别CpGDNA诱导炎性反应，过度激活可造成炎性损伤。研究发现病毒性心肌炎（VMC）时由损伤的心肌细胞释放的内源性核酸能激活TLR9而导致心脏炎症加重，从而参与VMC的发展进程。深入研究TLR9在VMC中作用，将为进一步揭示VMC的发病机制和寻求有效的治疗手段提供理论基础。

关键词： Toll样受体9 心肌炎治疗

实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌方法的建立及评价

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吉林大学学报（医学版） 2014年第3期40卷 686-691页

作者：张力文王宗润吴秀丽房明丽张云峰吉林大学第一医院小儿呼吸一科吉林长春130021 吉林大学第一医院儿科研究所吉林长春130021 吉林大学基础医学院分子生物学教研室吉林长春130021

目的：建立利用实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌浓度的方法，为检测人肠道内菌群浓度提供有效手段。方法：提取60例儿童粪便样本中细菌总DNA。选择细菌种属的特异性基因16SrRNA作为扩增区，依据双歧杆菌的16 SrRNA序列共设计3条... 详细信息

目的：建立利用实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌浓度的方法，为检测人肠道内菌群浓度提供有效手段。方法：提取60例儿童粪便样本中细菌总DNA。选择细菌种属的特异性基因16SrRNA作为扩增区，依据双歧杆菌的16 SrRNA序列共设计3条引物，以常规 PCR扩增出的16 SrRNA部分基因片段制作标准品，应用 SYBR Green Ⅰ双链嵌合染料，对连续稀释的标准品及待测样本进行分析，建立绝对定量的标准曲线，同时计算出待测样本双歧杆菌浓度；根据可检测到的标准品最低拷贝数计算反应灵敏度；分析 PCR产物熔解曲线评价反应特异性；重复检测梯度稀释的标准品，用相同浓度标准品的Ct值变异系数（CV）评价反应稳定性。结果：常规PCR扩增出双歧杆菌16SrRNA部分基因片段长度约为613 bp，测序结果正确，成功构建了双歧杆菌实时荧光定量PCR反应中的标准品；生成的标准曲线R2＝0.999，最低检测限度为每个反应1.48＆#215;102个拷贝；实时荧光定量PCR产物的熔解曲线为单峰。对待测样本分批进行荧光定量 PCR检测，各组间每微升1.48×10^3～1.48×10^7个拷贝浓度标准品Ct值的变异系数为2.94％、3.39％、3.54％、3.08％和3.34％。60份儿童粪便样本双歧杆菌浓度对数值为7.77±0.86（拷贝数·-1湿便）。结论：本研究所建立的实时荧光定量 PCR法敏感性高、特异性强，且重复性好，适用于检测人粪便中双歧杆菌的浓度。

关键词：实时荧光定量聚合酶链式反应引物标准曲线双歧杆菌