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橡胶树炭疽病生防链霉菌DL5C发酵培养基筛选及发酵条件优化研究

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热带农业科技 2022年第2期45卷 6-11页

作者：李岚岚施玉萍刘一贤戴利铭蔡志英云南省热带作物科学研究所云南景洪666100

研发环保的生防菌剂是当前绿色安全的一种方法,优化强拮抗放线菌的发酵培养基及发酵条件,筛选最优配比,可为研制新型、环境友好型的生物杀菌剂提供前期基础。本实验以初始固体培养基为基础,采用单因素试验,以抑菌率和发酵培养基中菌体... 详细信息

研发环保的生防菌剂是当前绿色安全的一种方法,优化强拮抗放线菌的发酵培养基及发酵条件,筛选最优配比,可为研制新型、环境友好型的生物杀菌剂提供前期基础。本实验以初始固体培养基为基础,采用单因素试验,以抑菌率和发酵培养基中菌体数量作为测定指标,筛选出最适的碳源、氮源;在确定碳氮源的基础上进行正交试验,确定培养基中各成分的最佳配比,最终得到最佳培养基。确定合适的碳氮源之后,对种子液接种量、料水比、起始pH、温度、发酵终点等条件进行优化,最终实验发现链霉菌DL5C固体发酵培养基为麦麸50%、玉米粉8%、花生粉饼5%、米糠10%、稻壳26.7%、CaCO_(3)0.3%,最佳接种量20%,最佳料水比1∶1,最适pH 5,最适温度32℃,最佳发酵时间是10 d,发酵活菌数达到2.20×10^(10)CFU/g,抑菌率为92.22%。

关键词：链霉菌固体发酵放线菌

滇金丝猴粪便微生物GH10家族木聚糖酶基因多样性

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微生物学通报 2016年第1期43卷 44-50页

作者：戴利铭邓梦黄遵锡王余娇李俊俊周峻沛慕跃林许波云南师范大学生命科学学院云南昆明650500 生物能源持续开发利用教育部工程研究中心云南昆明650500 云南省生物质能与环境生物技术重点实验室云南昆明650500 云南师范大学酶工程重点实验室云南昆明650500

【目的】分析滇金丝猴粪便微生物中GH10家族木聚糖酶的基因多样性。【方法】以野生和半圈养滇金丝猴粪便微生物宏基因组DNA为模板,用GH10木聚糖酶简并引物扩增木聚糖酶基因片段,利用p MD19-T载体构建细菌克隆文库并进行分析。【结果】... 详细信息

【目的】分析滇金丝猴粪便微生物中GH10家族木聚糖酶的基因多样性。【方法】以野生和半圈养滇金丝猴粪便微生物宏基因组DNA为模板,用GH10木聚糖酶简并引物扩增木聚糖酶基因片段,利用p MD19-T载体构建细菌克隆文库并进行分析。【结果】从野生和半圈养滇金丝猴粪便微生物克隆文库中分别获得26、28条GH10木聚糖酶基因片段,与Gen Bank中木聚糖酶序列一致性分别介于58%-95%、63%-81%之间。比对分析表明,两种环境中的GH10木聚糖酶均来自厚壁菌门、拟杆菌门和未培养细菌。野生滇金丝猴粪便微生物的GH10木聚糖酶基因来源于Uncultured bacterium和Butyrivibrio、Bacteroides、Ruminococcus、Sphingobacterium、Chryseobacterium、Clostridium、Bacillus 7个属;而半圈养滇金丝猴粪便微生物的GH10木聚糖酶基因来源于Uncultured bacterium和Clostridium、Paludibacter、Sphingobacterium、Ruminococcus、Roseburia、Chryseobacterium 6个属,其中两种环境都存在来源于Ruminococcus、Clostridium、Chryseobacterium、Sphingobacterium的GH10木聚糖酶。【结论】滇金丝猴粪便微生物中含有丰富的GH10木聚糖酶基因,且野生和半圈养两种不同环境中GH10木聚糖酶基因的微生物来源存在一定差异。该研究丰富了动物胃肠道中GH10木聚糖酶基因多样性,并为新型木聚糖酶的开发和滇金丝猴胃肠道微生物资源的利用奠定了基础。

关键词：未培养滇金丝猴粪便微生物木聚糖酶多样性

石墨炉原子吸收光谱法测定生熟茶叶中的铅元素含量及其安全评估

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食品安全导刊 2020年第20期 68-71页

作者：魏婧戴利铭西双版纳州食品药品检验所云南景洪666100 云南省热带作物科学研究所云南景洪666100

采用石墨炉原子吸收光谱法测定了勐海和勐腊两个地区的18份生茶及28份熟茶样品中重金属铅的含量,分析不同产地、不同加工方式茶叶的铅含量差异及特征;根据GB 2760-2017及靶标危害系数法评价茶叶的铅暴露风险,为保障消费者安全及茶叶的... 详细信息

采用石墨炉原子吸收光谱法测定了勐海和勐腊两个地区的18份生茶及28份熟茶样品中重金属铅的含量,分析不同产地、不同加工方式茶叶的铅含量差异及特征;根据GB 2760-2017及靶标危害系数法评价茶叶的铅暴露风险,为保障消费者安全及茶叶的加工方式选择提供参考依据。结果显示,生茶的铅含量范围在0.038±0.002至0.255±0.005mg/kg,熟茶的铅含量在0.008±0.001至0.264±0.001 mg/kg,不同地区的茶叶样品铅元素含量存在差异;总体上生茶的铅含量低于熟茶,散装生茶低于饼装生茶,表明茶叶采后加工过程中接触的机械、发酵、渥堆等过程均有可能增加茶叶被重金属污染的风险。勐海及勐腊地区的生、熟茶样品中铅含量均低于GB 2760-2017的限量标准;两个产地生、熟茶的THQ均远低于1,没有明显的铅暴露风险。

关键词：茶叶加工方式铅靶标危害系数安全评估

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1株野生红侧耳菌株分离鉴定及人工驯化栽培

南方农业学报 2023年第12期54卷 3514-3526页

作者：蔡志英马茜戴利铭苏海鹏刘一贤施玉萍李岚岚熊延林穆洪军云南省热带作物科学研究所植物保护与微生物利用研究中心云南西双版纳州666100

【目的】对1株野生侧耳菌株PD2021进行分离鉴定及人工驯化栽培,为该菌株的大规模栽培及开发利用提供理论依据。【方法】以从云南省西双版纳州景洪市采集到的1株野生侧耳菌株PD2021为试材,采用组织分离法获得其母种,结合子实体形态学观... 详细信息

【目的】对1株野生侧耳菌株PD2021进行分离鉴定及人工驯化栽培,为该菌株的大规模栽培及开发利用提供理论依据。【方法】以从云南省西双版纳州景洪市采集到的1株野生侧耳菌株PD2021为试材,采用组织分离法获得其母种,结合子实体形态学观察、侧耳属DNA条形码和分子系统发育分析界定其分类地位,并通过培养特性试验探究其生物学特性及出菇条件,采用正交试验筛选人工室内栽培该菌的栽培配方。【结果】通过形态学观察发现,PD2021菌株实体为呈淡米黄色,孢子印为白色,菌盖成熟时边缘呈波浪形花瓣状,菌盖边缘与中部交界处有一圈环状、参差不齐的条纹、整个子实体似一朵花子。结合侧耳属DNA条形码分析结果,将PD2021菌株鉴定为红侧耳花形变种(Pleurotusdjamor ***)。PD2021菌株的ITS序列和延伸因子基因(EF-1α)序列均与***相似性最高,处于系统发育进化树中的同一分支,但二者分支长短不一,表明二者序列出现变异,进一步证明PD2021菌株为红侧耳的变种。该菌株最适生长的碳源为可溶性淀粉,最适生长的氮源为酵母粉,最适温度为26℃;菌丝耐高温能力强,44℃下处理12 h后于26℃下仍能恢复生长。采用正交试验筛选该菌栽培配方,最优配方:米糠15 kg、麦麸10 kg、橡胶锯末200 kg、玉米粉15 kg。在22~32℃、65%~85%空气湿度、100~550 lx散射光的出菇房中栽培15~21 d可出菇,出菇量可达152.26 g/菌包,生物转化率达55.64%。【结论】PD2021菌株耐高温,适于热带和亚热带栽培,其栽培周期短、抗杂能力强、栽培料广泛,具有良好的应用前景和开发价值。

关键词：红侧耳分离鉴定 DNA条形码形态学特征人工驯化栽培

解淀粉芽孢杆菌生防菌BS-3全基因组测序及生物信息分析

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微生物学通报 2021年第6期48卷 2073-2088页

作者：戴利铭李岚岚刘一贤施玉萍蔡志英云南省热带作物科学研究所云南景洪666100

【背景】解淀粉芽孢杆菌BS-3是从健康橡胶树树根中分离获得的一株对真菌具有较强抗菌活性的内生细菌,有作为生物农药的潜力。【目的】解析菌株BS-3的基因组序列信息,以深入研究该菌株防病促生机制及挖掘次级代谢产物基因资源。【方法】... 详细信息

【背景】解淀粉芽孢杆菌BS-3是从健康橡胶树树根中分离获得的一株对真菌具有较强抗菌活性的内生细菌,有作为生物农药的潜力。【目的】解析菌株BS-3的基因组序列信息,以深入研究该菌株防病促生机制及挖掘次级代谢产物基因资源。【方法】采用第二代BGISEQ与第三代Pac Bio平台相结合的测序技术,对生防菌BS-3进行全基因组测序,并对测序数据进行基因组组装、基因预测与功能注释、共线性分析及次级代谢产物合成基因簇预测等。【结果】BS-3全基因组大小为3 870 130 bp,平均GC含量为46.88%,共编码4 161个基因;含有92个t RNA基因、28个r RNA、10个sRNA;含有122个串联重复序列、98个小卫星DNA、2个微卫星。在COG、GO、KEGG、NR和Swiss-Prot数据库分别注释到基因2 875、2 620、1 885、4 040和3 328个。同时,预测到BS-3中有10个次级代谢产物合成基因簇,编码表面活性素、丰原素、多烯类、儿茶酚型嗜铁素等抑菌物质。基因组测序数据提交至NCBI获得GenBank登录号为CP060384。【结论】为基因组层面上解析菌株BS-3具有良好防病效果的内在原因提供基础数据,为深入了解解淀粉芽孢杆菌次级代谢合成途径提供参考信息,对菌株BS-3后续相关研究具有重要意义。

关键词：解淀粉芽孢杆菌基因组基因注释次级代谢

橡胶褐根病拮抗放线菌17-7的筛选、鉴定及发酵条件优化

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微生物学通报 2020年第1期47卷 118-129页

作者：刘一贤施玉萍戴利铭李岚岚蔡志英云南省热带作物科学研究所

[背景]由有害木层孔菌(Phellinus noxius Corner)侵染引起的橡胶树褐根病是严重危害橡胶树的一类病害,给橡胶产业造成巨大的经济损失。[目的]从橡胶树根际土壤中筛选对橡胶树褐根病菌具有高拮抗活性的放线菌菌株,为该病害生防药剂的研... 详细信息

[背景]由有害木层孔菌(Phellinus noxius Corner)侵染引起的橡胶树褐根病是严重危害橡胶树的一类病害,给橡胶产业造成巨大的经济损失。[目的]从橡胶树根际土壤中筛选对橡胶树褐根病菌具有高拮抗活性的放线菌菌株,为该病害生防药剂的研发提供基础。[方法]采用稀释涂布法分离放线菌,平板对峙法、抑制菌丝生长速率法筛选拮抗菌株,通过培养特征、生理生化特征及16S rRNA基因序列分析确定其分类地位;利用单因子试验和正交试验相结合确定其最优发酵配方及培养条件。[结果]筛选到一株对橡胶褐根病具有较强抑制作用的放线菌菌株17-7,其对橡胶树上的5种病原菌均有较好的抑制作用。菌株17-7与桑树链霉菌(Streptomyces samsunensi)亲缘关系较近,且形态特征、培养特征和生理生化特征基本相符。该菌株最优发酵配方和培养条件分别为:葡萄糖20.0 g/L、大豆粉25.0g/L、KH2PO4 1.0g/L、NaCl 0.5 g/L、CaCO30.5g/L,培养基装瓶量为150 mL/500 mL,起始pH 8.0,摇瓶培养转速为140 r/min,接种量为10%,培养温度为28℃,培养时间为5 d。[结论]菌株17-7被鉴定为桑树链霉菌(Streptomyces samsunensi),其对橡胶褐根病具有较强的拮抗作用。

关键词：橡胶褐根病放线菌筛选鉴定发酵条件

橡胶树炭疽病生防内生菌的分离鉴定及抑菌作用研究

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热带作物学报 2021年第10期42卷 2958-2965页

作者：李岚岚戴利铭蒋桂芝刘一贤施玉萍蔡志英云南省热带作物科学研究所云南景洪666100

目前化学农药的缺点日益突显,研发环保的生防菌剂是当前绿色安全的一种方法,筛选具有抑制橡胶树炭疽病的生防菌株,为研发新型生防菌剂储备资源。本文采用组织培养法分离纯化橡胶树内生菌,平板对峙筛选拮抗菌株;通过菌株培养特征、生理... 详细信息

目前化学农药的缺点日益突显,研发环保的生防菌剂是当前绿色安全的一种方法,筛选具有抑制橡胶树炭疽病的生防菌株,为研发新型生防菌剂储备资源。本文采用组织培养法分离纯化橡胶树内生菌,平板对峙筛选拮抗菌株;通过菌株培养特征、生理生化、根据16S rRNA和gyrA基因序列构建系统发育树确定其分类地位;采用平板对峙法研究内生菌株的抗菌持久性、稳定性、广谱性;采用牛津杯法研究拮抗内生菌对杀菌剂的敏感性。从橡胶树健康的根组织中分离得到4株对橡胶树炭疽病具有抑制作用的细菌(BacRZS3D4-1、BacRZS3D4-2、BacRZS3D4-3、Bac RZS3D4-4),系统发育树分析结果显示这4株细菌与解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)亲缘关系很近,且培养性状和生理生化特征也与解淀粉芽孢杆菌相似。这4株内生菌的抗菌持久性强,抗菌稳定性好;对尖孢炭疽菌(Colletotrichum acutatum)DFMP1E和MLZZP3、小孢拟盘多毛孢(Pestalotiopsis microspora)MF375898均有较强的抑菌能力,对茄类镰刀菌(Fusariumsolani)XJ160901的抑制作用较弱;对多菌灵、异菌脲、百菌清、苯醚甲环唑4种杀菌剂均不敏感,有望开发为生防菌剂。

关键词：橡胶树炭疽病解淀粉芽孢杆菌生防内生菌分离鉴定

倭蜂猴粪便微生物苯酚羟化酶和邻苯二酚1,2-双加氧酶基因多样性研究

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微生物学通报 2015年第11期42卷 2189-2197页

作者：熊彩云许波戴利铭李俊俊唐湘华慕跃林杨云娟周峻沛丁俊美黄遵锡云南师范大学生命科学学院云南昆明650500 生物能源持续开发利用教育部工程研究中心云南昆明650500 云南省生物质能与环境生物技术重点实验室云南昆明650500 云南师范大学酶工程重点实验室云南昆明650500

【目的】分析倭蜂猴粪便微生物中苯酚羟化酶(Phenol hydroxylase,PH)和邻苯二酚1,2-双加氧酶(Catechol 1,2-dioxygenase,C12O)的基因多样性。【方法】利用简并引物,以倭蜂猴粪便微生物宏基因组DNA为模板,通过PCR扩增,分别构建PH和C12O... 详细信息

【目的】分析倭蜂猴粪便微生物中苯酚羟化酶(Phenol hydroxylase,PH)和邻苯二酚1,2-双加氧酶(Catechol 1,2-dioxygenase,C12O)的基因多样性。【方法】利用简并引物,以倭蜂猴粪便微生物宏基因组DNA为模板,通过PCR扩增,分别构建PH和C12O基因克隆文库,并对克隆进行测序分析。【结果】倭蜂猴粪便微生物来源的PH和C12O基因序列经BLAST比对分析,与Gen Bank中相应酶的序列一致性分别介于92%-100%和87%-100%。系统进化树分析表明PH基因序列与Neisseria、Burkholderia、Alcaligenes、Acinetobacter 4个属来源的PH序列相关;C12O基因序列全部与Acinetobacter来源的C12O序列相关。序列比对结果表明PH序列具有Lm PH(Largest subunit of multicomponent PH)中高保守的两个DEXRH结构域;C12O序列具有能被Ag+和Hg2+抑制的位点(半胱氨酸)。【结论】倭蜂猴粪便微生物来源的PH为多组分PH,其降解苯酚的中间产物邻苯二酚可以被C12O通过邻位开环途径裂解。

关键词：倭蜂猴粪便微生物苯酚羟化酶邻苯二酚1 2-双加氧酶多样性

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宏基因组学在纤维素酶研究中的应用进展

微生物学通报 2015年第6期42卷 1089-1100页

作者：戴利铭熊彩云黄遵锡李俊俊唐湘华杨云娟许波云南师范大学生命科学学院云南昆明650500 生物能源持续开发利用教育部工程研究中心云南昆明650500 云南省生物质能与环境生物技术重点实验室云南昆明650500 云南师范大学酶工程重点实验室云南昆明650500

纤维素酶能降解纤维素,被广泛应用于生物修复、食品加工、化工合成等领域,开发高活力、广底物、耐高温高碱等极端条件的新型纤维素酶具有重要意义。宏基因组学以特定环境样品中微生物的基因组总和为研究对象,避开传统的微生物分离培养过... 详细信息

纤维素酶能降解纤维素,被广泛应用于生物修复、食品加工、化工合成等领域,开发高活力、广底物、耐高温高碱等极端条件的新型纤维素酶具有重要意义。宏基因组学以特定环境样品中微生物的基因组总和为研究对象,避开传统的微生物分离培养过程,为基因资源的开发、利用提供了新技术。文中结合本课题组的研究工作,综述了利用宏基因组学获取纤维素酶的策略,同时着重介绍利用宏基因组学从动物胃肠道、土壤等环境中获取纤维素酶的研究。

关键词：宏基因组学纤维素酶高通量筛选未培养微生物