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OsPIR1参与水稻抗稻瘟病与盐胁迫下sRNA生物合成的研究

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OsPIR1参与水稻抗稻瘟病与盐胁迫下sRNA生物合成的研究

作者：张秀妍内蒙古农业大学

学位级别：硕士

水稻是全球最重要的粮食作物之一,自发芽至收获,水稻在生长过程中不仅要抵抗非生物胁迫的影响,还要抵抗各种病害所带来的影响,例如稻瘟病。由稻瘟病菌所引起的稻瘟病每年都在全世界范围造成水稻生产的重大损失,选育抗病品种是防治该病... 详细信息

水稻是全球最重要的粮食作物之一,自发芽至收获,水稻在生长过程中不仅要抵抗非生物胁迫的影响,还要抵抗各种病害所带来的影响,例如稻瘟病。由稻瘟病菌所引起的稻瘟病每年都在全世界范围造成水稻生产的重大损失,选育抗病品种是防治该病害最有效的方法之一。实验室前期在田间繁种过程中发现低表达或敲除OsPIRIN1(OsPIR1)基因的水稻材料出现对田间病害抗性增强的表型。本试验以日本晴背景的野生型水稻材料(WT)、OsPIR1基因敲除突变体材料(CRISPR/Cas9,以下简称为pir1)、OsPIR1基因沉默材料(OsPIR1-RNAi)以及OsPIR1基因过表达材料(OsPIR1-OE)为研究对象,对OsPIR1基因参与水稻稻瘟病和盐胁迫的抗性功能方面进行研究,得到的主要研究结果如下:1.通过对萌发5 d的WT、pir1和OE幼苗根部进行RNA-seq分析,发现敲除OsPIR1基因可显著影响水稻体内6个植物-病原体互作相关基因的表达,其中编码OsPR1a与SPL胞外蛋白的基因表达量上调,编码OsCML10、OsCML15、NBS-LRR抗病蛋白的基因表达量下调。而过表达OsPIR1基因可显著下调水稻体内8个植物-病原体互作相关基因的表达,分别编码NBS-LRR抗病蛋白、LRR受体/OsFLS2、OsCML15、OsPR1a、OsCML24、CAMK。说明OsPIR1参与了水稻抗稻瘟病的生物学过程。2.低表达或敲除OsPIR1基因的水稻材料表现出对稻瘟菌生理小种Guy-11抗性增强的表型,且发病率与病情指数较野生型有所降低。3.低表达或敲除OsPIR1基因的水稻材料对稻瘟菌的侵入更为敏感。病原菌入侵10 d内,二者体内POD、SOD、CAT和脯氨酸总含量均高于野生型和过表达材料。4.以OsPIR1基因沉默材料为研究对象,在盐胁迫条件下对水稻miRNA的表达谱以及hpRNA的加工特征进行了研究,结果表明水稻体内能够与OsPIR1基因反义链高度匹配的siRNAs数量随处理时间的增加而降低。推测水稻体内基因沉默效率随处理时间的延长而逐步降低。5.处理前后,水稻体内首位碱基为U和A以及长度为21～22 nt的siRNAs占主要部分。推测水稻Argonaute(AGO)蛋白家族中OsAGO1a/b/c与OsAG05c与水稻DCL(Dicer-like)蛋白家族中DCL2与DCL4发挥了主要作用。6.水稻体内共检测到248个已知的miRNA,来源于132个不同的家族,除此之外,共预测到了 59个新的miRNA。7.水稻根、茎、叶中分别有31、11、9个差异表达miRNA,分属于29个家族靶向592个功能基因,且差异miRNA的靶基因主要为涉及到各种生理代谢进程的转录因子,如SPZ、GRF、SAP、HD-ZIP、NF-YA、Laccase等。新发现的miRNA共预测到754个靶基因,主要为涉及到各种生理代谢进程的酶类,如UDP-葡糖基转移酶、DNA聚合酶、蛋白磷酸酶、氧化还原酶、水解酶、锌指蛋白等以及一些未知蛋白。8.进一步功能研究发现,差异表达的miRNA所对应的靶基因,在细胞组分中显著富集于膜相关细胞器;在分子功能中显著富集于核糖核苷酸结合、ATP结合等过程;在生物学过程中,靶基因显著富集于含氧酸代谢、磷代谢、氮代谢等过程。新预测的miRNA所对应的靶基因在细胞组分中显著富集于细胞、细胞核等部位;在分子功能中显著富集于核糖核苷酸结合、ATP结合等过程;在生物学过程中,靶基因显著富集于细胞代谢、RNA代谢等过程。***分析结果显示,盐胁迫后Osa-miR166h、Osa-miR166k上调表达,Osa-miR169h、Osa-miR530下调表达,针对Osa-miR169h的4个靶基因进一步定量检测,其中的3个靶基因上调表达,这与Osa-miR169h的下调表达结果相一致。综上,本文初步探索OsPIR1基因在水稻-稻瘟病互作过程中的调节作用,以及盐胁迫处理不同时间时OsPIR1-RNAi植株体内miRNA的表达谱以及siRNA的加工机制,以期为水稻的抗性育种提供理论依据,也为探索基因沉默技术在植物体内的加工机制添上一笔。

关键词：水稻 OsPIR1 稻瘟病 RNAi sRNAs 盐胁迫

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海鞘油脂提取工艺及其氧化稳定性的研究

海鞘油脂提取工艺及其氧化稳定性的研究

作者：张秀妍大连理工大学

学位级别：硕士

近年来，海鞘因其体内含有丰富的活性物质，逐渐成为研究的热点，这些研究包括生理活性物质的分离、结构确定及药学应用等。本论文主要针对海鞘体内的油脂展开研究，包括提取工艺及氧化稳定性等几个方面。通过一系列的实验研究，... 详细信息

近年来，海鞘因其体内含有丰富的活性物质，逐渐成为研究的热点，这些研究包括生理活性物质的分离、结构确定及药学应用等。本论文主要针对海鞘体内的油脂展开研究，包括提取工艺及氧化稳定性等几个方面。通过一系列的实验研究，确定乙酸乙酯为提取海鞘油脂的最适溶剂，并通过正交实验获得溶剂法提取海鞘油脂的最佳条件为：料液比1:4、提取时间3h、提取温度40℃，所得油脂产率为1.80％。由气相色谱分析结果可知，该油脂多不饱和脂肪酸的含量为67.70％、其中EPA和DHA的含量之和为21.81％。根据单因素实验及正交实验结果，确定采用SCF-CO方法萃取柄海鞘油脂的最佳条件为：柄海鞘干粉粒度40～60目、萃取温度35℃、压力25Mpa、夹带剂(乙酸乙酯)用量为100ml、萃取时间2h、CO流量15L／h，所得油脂产率为1.95％。其中多不饱和脂肪酸的含量为73.31％、EPA和DHA的含量之和为33.96％。由于海鞘油脂内多不饱和脂肪酸含量较高极易氧化酸败，因此必须添加适当的抗氧化剂以提高其氧化稳定性。研究发现，维生素E和中草药荔枝草的乙酸乙酯提取物对海鞘油脂具有很好的抗氧化作用。添加浓度为2.0×10g／g的Ve作为抗氧化剂时，SCF-CO方法提取的柄海鞘油脂的氧化诱导期(60℃)增加至63.8h;添加浓度为2.0×10g／g的荔枝草乙酸乙酯提取物作为抗氧化剂时，有机溶剂法提取的柄海鞘油脂的氧化诱导期(60℃)增加至58.3 h，从而这两种油脂都基本上达到了贮藏要求。通过上述油脂提取工艺条件的确定及所得油脂氧化稳定性的研究，为该油脂的保健品开发奠定了基础。

关键词：海鞘油脂溶剂提取超临界CO2萃取氧化稳定性

半夏泻心汤加减治疗老年胃脘痛100例疗效观察

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上海中医药杂志 1989年第10期23卷 31-32页

作者：韩玉秀张秀妍杨光沈阳红十字会医院沈阳市中医院

半夏泻心汤是治疗寒热中阻、胃肠不和的主要方剂。笔者习惯用此方加减治疗老年胃脘痛,收到满意疗效,现报告如下。一、临床资料病例选择:100例老年胃脘痛患者,治疗前均经X线、胃镜、便隐血等检查,确诊为胃炎62例(其中浅表性胃炎26例,萎... 详细信息

半夏泻心汤是治疗寒热中阻、胃肠不和的主要方剂。笔者习惯用此方加减治疗老年胃脘痛,收到满意疗效,现报告如下。一、临床资料病例选择:100例老年胃脘痛患者,治疗前均经X线、胃镜、便隐血等检查,确诊为胃炎62例(其中浅表性胃炎26例,萎缩性胃炎27例,糜烂性胃炎9例)。

关键词：半夏泻心汤胃脘痛老年人

液相色谱-串联质谱法测定养殖水体氯霉素残留量的研究

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水生态学杂志 2015年第6期36卷 14-18页

作者：张秀妍马琳大连市水产技术推广总站辽宁大连116023

由于氯霉素对人体存在严重的毒副作用,是多个国家禁止使用的兽用药物,但在我国水产行业育苗、养殖和运输等环节仍然存在非法使用的情况,水产品药物残留例行监测中,氯霉素屡有检出,在水环境监测中,部分水域也检出了氯霉素,一些饭店暂养... 详细信息

由于氯霉素对人体存在严重的毒副作用,是多个国家禁止使用的兽用药物,但在我国水产行业育苗、养殖和运输等环节仍然存在非法使用的情况,水产品药物残留例行监测中,氯霉素屡有检出,在水环境监测中,部分水域也检出了氯霉素,一些饭店暂养池中也检测出较高的氯霉素。实验水样取自养殖场、育苗室和饭店暂养池,选用乙酸乙酯为提取溶剂,液液萃取方式提取水中氯霉素,萃取时间3 min,应用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）测定养殖水体中氯霉素的含量,量取250 m L水样,用100 m L乙酸乙酯分2次萃取,萃取液经旋转蒸发仪浓缩近干,以40%的甲醇-水溶液定容至1 m L。氯霉素标准系列溶液浓度为0.25、0.50、1.00、1.25、2.50、5.00 ng/m L,氘代氯霉素的含量均为2.0 ng/m L,上机检测,内标法定量。结果表明,氯霉素为外标,氘代氯霉素为内标,其峰面积比值（y）与浓度比值（x）的曲线方程为：y=1.136512x＋0.012050（R2=0.9990）;该方法氯霉素的检出限为2 ng/L,定量限为4 ng/L,仪器线性范围为0.25~5.00 ng/m L;加标浓度在2~20 ng/L时,平均回收率在80%~110%,相对标准偏差小于10%。应用证明该方法比较稳定、灵敏度高,适用于检测养殖水体中氯霉素的含量。

关键词：氯霉素养殖水体液相色谱-串联质谱法

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水中孔雀石绿的高效液相色谱测定法

环境与健康杂志 2007年第8期24卷 633-634页

作者：桂英爱马琳王丹张秀妍郝佳大连市海洋与渔业环境监测中心检测室辽宁大连116023

目的建立淡水中孔雀石绿含量的高效液相色谱法测定分析方法。方法采用ZORBAXSB-C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,二氧化铅柱后氧化柱,流动相为0.1mol/L(pH=4.5)的乙酸铵溶液∶乙腈(体积比为20∶80),流速为1.5ml/min,紫外检测器波长为588n... 详细信息

目的建立淡水中孔雀石绿含量的高效液相色谱法测定分析方法。方法采用ZORBAXSB-C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,二氧化铅柱后氧化柱,流动相为0.1mol/L(pH=4.5)的乙酸铵溶液∶乙腈(体积比为20∶80),流速为1.5ml/min,紫外检测器波长为588nm。结果该方法在孔雀石绿浓度范围在0.1～4.0μg/ml时,r=0.99972。以峰面积(x)对质量浓度(y)做标准曲线,得到线性方程为:y=40.25x+1.99。根据3倍信噪比计算,最低检测限为0.02μg/L。向不含孔雀石绿的水样中分别加入2.0、10.0μg/L的孔雀石绿溶液进行高效液相色谱法的精密度、准确度试验,结果显示,平均回收率分别为98.5%,97.8%,RSD分别为11.2%,8.0%。结论本方法操作简单,回收率稳定,灵敏度高,适用于淡水中的孔雀石绿含量的检测,但不适用于无色孔雀石绿的检测。

关键词：水孔雀石绿高效液相色谱法淡水

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玻璃海鞘脂肪酸提取工艺的研究

海洋通报 2004年第4期23卷 93-96页

作者：张秀妍姜爱莉王长海大连理工大学生物工程系辽宁大连116024

用乙酸乙酯从玻璃海鞘中提取多不饱和脂肪酸,通过正交实验对提取工艺进行研究,得其最佳提取条件为:温度 50 ℃,提取时间 240 min,料液比 1 : 3,提取次数 2 次。按此工艺提取,得脂肪酸产率为 1.22 %,利用气相色谱进行分析,得其中多不饱... 详细信息

用乙酸乙酯从玻璃海鞘中提取多不饱和脂肪酸,通过正交实验对提取工艺进行研究,得其最佳提取条件为:温度 50 ℃,提取时间 240 min,料液比 1 : 3,提取次数 2 次。按此工艺提取,得脂肪酸产率为 1.22 %,利用气相色谱进行分析,得其中多不饱和脂肪酸含量为 66.40 %,EPA 和 DHA 含量之和为 15.20 %。

关键词：玻璃海鞘提取多不饱和脂肪酸 EPA DHA

大连金普湾表层海水N、P含量的时空分布特征及其富营养状况

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海洋环境科学 2013年第6期32卷 889-892页

作者：马琳丁勇周竹君刘中许岩周军张秀妍大连市海洋与渔业环境监测中心辽宁大连116023

根据大连金普湾水质调查数据,分析了表层海水无机氮和活性磷酸盐含量变化及其时空分布特征,并对该海域表层水体的富营养化状况进行了评价。调查结果表明,金普湾海域在大、小潮期表层海水无机氮含量在50%以上的站位达到一类海水水质标准;... 详细信息

根据大连金普湾水质调查数据,分析了表层海水无机氮和活性磷酸盐含量变化及其时空分布特征,并对该海域表层水体的富营养化状况进行了评价。调查结果表明,金普湾海域在大、小潮期表层海水无机氮含量在50%以上的站位达到一类海水水质标准;35%以上的站位超过四类海水水质标准,这些站位基本集中在普兰店湾内。活性磷酸盐含量在85%以上的站位达到一类海水水质标准,其余站位均能达到二、三类海水水质标准。金普湾海域无机氮含量分布呈现东北部区域含量高,往西南方向逐渐递减;活性磷酸盐呈普兰店湾、金州湾附近海域,西南部近岸海域含量较高,并逐渐向外部扩散。普兰店湾湾口处无机氮和活性磷酸盐含量受潮汐变化的影响较大。金普湾海域以普兰店湾表层海水水质富营养化程度最为严重,由北向南至湾口处富营养化程度逐渐减轻,普兰店湾外部海域富营养化指数(E)小于1,未呈现富营养化状态。

关键词：无机氮活性磷酸盐时空分布富营养化