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三种海南东方酸瓜中真菌群落多样性差异分析

中国酿造 2024年第8期43卷 100-105页

作者：朱梦寇力丹常秀亭王彬海南省检验检测研究院食品检验检测中心国家市场监管重点实验室(热带果蔬质量与安全) 海南海口570314 海南省检验检测研究院食品审评中心海南海口570314

该研究以海南东方的西瓜、葫芦瓜、哈密瓜为原料腌制东方酸瓜样品(XG、HLG、HMG),利用Illumina Nextseq 2000高通量测序技术对其真菌菌群多样性进行分析。结果表明,HLG样品真菌群落丰富度最高,XG样品真菌群落多样性最高。从3种东方酸瓜... 详细信息

该研究以海南东方的西瓜、葫芦瓜、哈密瓜为原料腌制东方酸瓜样品(XG、HLG、HMG),利用Illumina Nextseq 2000高通量测序技术对其真菌菌群多样性进行分析。结果表明,HLG样品真菌群落丰富度最高,XG样品真菌群落多样性最高。从3种东方酸瓜样品中共划分到432个真菌操作分类单元(OTUs),隶属于3门、14纲、26目、47科、68属。3种东方酸瓜样品真菌主要分布在子囊菌门(Ascomycota)中,主要细菌属包括柯达酵母属(Kodamaea)、哈萨克斯坦酵母属(Kazachstania)、毕赤酵母属(Pichia)、unclassified_f_Saccharomycetales_fam_Incertae_sedis、假丝酵母属(Candida)、Diutina、青霉属(Penicillium)、毛孢子菌属(Trichosporon)、德巴利酵母属(Debaryomyces)、unclassified_o__Saccharomycetales等。3种东方酸瓜样品的真菌菌群结构存在差异,主要体现在Kazachstania、Debaryomyces、Kodamaea、Candida等10个真菌属上,该研究结果为海南东方酸瓜的标准化和工业化生产和食品质量安全控制提供理论基础和科学支撑。

关键词：东方酸瓜真菌菌群多样性差异高通量测序主坐标分析

海南即食鲜切果蔬肠杆菌科细菌污染及产ESBLs菌株耐药性研究

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中国热带医学 2024年

作者：谢作蓉常秀亭朱梦寇力丹杨穗珊海南省检验检测研究院食品检验检测中心国家市场监管重点实验室(热带果蔬质量与安全)

目的　了解海南地区即食鲜切果蔬中肠杆菌科细菌的污染分布、产ESBLs菌株的耐药性、耐药基因赋存情况与耐药基因分型，为即食鲜切果蔬食品卫生安全控制及耐药菌风险防控提供参考。方法　采集市售常见即食鲜切果蔬样品，对肠杆菌科细菌... 详细信息

目的　了解海南地区即食鲜切果蔬中肠杆菌科细菌的污染分布、产ESBLs菌株的耐药性、耐药基因赋存情况与耐药基因分型，为即食鲜切果蔬食品卫生安全控制及耐药菌风险防控提供参考。方法　采集市售常见即食鲜切果蔬样品，对肠杆菌科细菌进行定量检测，通过肠道菌增菌肉汤进行增菌、ESBL显色培养基进行选择性分离培养，对获得的产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）耐药肠杆菌采用VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定系统进行鉴定和药敏测试，通过PCR检测耐药基因，并对产物进行测序以确定耐药基因型别。结果　427份即食鲜切果蔬样品中，肠杆菌科细菌污染量在1.30～6.86 log10CFU·g-1之间，从中筛选得到产ESBLs的肠杆菌，主要为49株肺炎克雷伯菌（污染率11.48%）和38株大肠埃希氏菌（污染率8.90%）。这些菌株存在多重耐药性，其中产ESBLs肺炎克雷伯菌对氨苄西林和头孢唑啉耐药率均为100%，对头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟的耐药率分别为73.46%、81.63%、73.46%，对复方新诺明的耐药率则有79.59%，产ESBLs大肠埃希氏菌对氨苄西林、头孢唑林、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟均表现为耐药，对复方新诺明的耐药率则有52.63%。耐药基因检测结果显示，β-内酰胺类耐药基因blaCTX-M、磺胺类耐药基因sulII和的可移动元件整合酶基因intI在产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希氏菌中的检出率分别为57.14%和84.21%、75.51%和68.42%、91.84%和86.84%，β-内酰胺类耐药基因型为CTX-M-1、CTX-M-9和TEM-1，未检测出CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-25及SHV型。结论　本研究结果表明即食鲜切果蔬受产ESBLs肠杆菌科细菌污染，且产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希氏菌分离株多重耐药情况较为普遍，耐药基因水平转移风险较高，建议对“环境-食品-人”全链条环节中重视即食鲜切果蔬中耐药菌的污染，避免其通过食物链成为耐药基因的传播媒介，危害人类健康。

关键词：即食鲜切果蔬肠杆菌科细菌超广谱β内酰胺酶抗生素耐药基因

肠道侵袭性大肠埃希氏菌可视化环介导等温扩增方法的建立

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食品安全导刊 2024年第29期 57-61页

作者：杨穗珊常秀亭朱梦罗小菊寇力丹谢作蓉海南省检验检验研究院食品检验检测中心国家市场监管重点实验室(热带果蔬质量与安全)海南海口570100

肠道侵袭性大肠埃希氏菌(Enteroinvasive Escherichia coli,EIEC)是一种重要的食源性致病菌,可引起人类肠道疾病。本研究建立可视化环介导等温扩增(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)方法,针对EIEC特异性基因ipaH设计引物,优化反应条件,并对该方法的特异性、灵敏度进行评估。结果显示,所建立的LAMP方法在63℃反应45 min后可凭肉眼或紫外光下观察判定结果,对EIEC的检测灵敏度可达10 pg·μL^(-1)。该方法特异性良好,与其他常见肠道致病菌,如沙门氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌等均无交叉反应。本研究建立的可视化LAMP方法快速、灵敏度高、对设备要求低,可满足现场快速检测需求。

关键词：肠道侵袭性大肠埃希氏菌环介导等温扩增可视化

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食品检验机构仪器设备管理流程优化策略

食品安全导刊 2024年第26期 19-22页

作者：郑开伦符吉科寇力丹石城轩王丽强汤祝华海南省检验检测研究院国家市场监督管理总局重点实验室(热带果蔬质量与安全) 海南海口570311

在当今食品安全日益受到重视的背景下,食品检验机构作为保障食品安全的重要防线,其仪器设备的管理水平直接关系到检测工作的准确性和效率。随着科学技术的快速发展,新型检测技术和设备层出不穷,这对食品检验机构提出了更高的要求。为了... 详细信息

在当今食品安全日益受到重视的背景下,食品检验机构作为保障食品安全的重要防线,其仪器设备的管理水平直接关系到检测工作的准确性和效率。随着科学技术的快速发展,新型检测技术和设备层出不穷,这对食品检验机构提出了更高的要求。为了确保仪器设备始终处于最佳工作状态,食品检验机构必须不断优化设备管理流程,本文从设备更新计划的制订、维护保养力度的加强、操作人员的专业培训力度提升以及设备管理制度的完善等方面进行了阐述,以提高检测工作的质量与效率,旨在为提升食品安全检测能力提供参考和支持。

关键词：食品检验机构仪器设备管理流程优化

鞘氨醇单胞菌ATCC 31461的三个糖基水解酶的功能鉴定

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鞘氨醇单胞菌ATCC 31461的三个糖基水解酶的功能鉴定

作者：寇力丹广西大学

学位级别：硕士

木聚糖酶与葡聚糖酶均为糖基水解酶,属于半纤维素酶类,在酿造、饲料、洗涤、生物质能源等行业有着广泛的应用。本研究在大肠杆菌（Escherichia coli）中克隆了来源于鞘氨醇单胞菌（Sphingomonas elodea）ATCC 31461中的3个基因xyn10A、e... 详细信息

木聚糖酶与葡聚糖酶均为糖基水解酶,属于半纤维素酶类,在酿造、饲料、洗涤、生物质能源等行业有着广泛的应用。本研究在大肠杆菌（Escherichia coli）中克隆了来源于鞘氨醇单胞菌（Sphingomonas elodea）ATCC 31461中的3个基因xyn10A、eg5A、eg16A,并成功表达。初步检测粗酶的底物特异性发现xyn10A编码的是GH10家族的β-内切木聚糖酶,eg5A编码的是GH5家族的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,eg16A编码的是GH16家族的β-1,3（4）-葡聚糖酶。采用镍亲和层析法纯化Xyn10A、EG5A、EG16A,并对这三个糖基水解酶的酶学性质进行研究。在pH7.0、37℃条件下,Xyn10A能够水解山毛榉木聚糖、桦木木聚糖、玉米芯木聚糖、小麦阿拉伯木聚糖、燕麦木聚糖、甘蔗渣木聚糖、p NPC,其对山毛榉木聚糖的水解活力最高。以山毛榉木聚糖为底物,测得Xyn10A的最适反应pH为6.5,最适反应温度为45℃,其能在pH4.5-10.5和温度25℃-40℃间保持稳定;Xyn10A的K值和V值分别为13.26±1.813 g/L和138.3±8.648μmol*min*mg;醇类等有机试剂均不同程度抑制Xyn10A的活力。Xyn10A水解木寡糖、木聚糖类底物最终生成木糖和木二糖,同时Xyn10A具有微弱的转糖苷活力。在pH7.0、37℃条件下,EG5A能够水解大麦葡聚糖、燕麦葡聚糖、地衣多糖、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、山毛榉木聚糖、p NPC,其对大麦葡聚糖的水解活力最高。以大麦葡聚糖为底物,测得EG5A的最适反应pH为6.0,最适反应温度为45℃,其能在pH4.5-10.5和温度45℃-50℃间保持稳定;EG5A的Km值和Vmax值分别为2.034±0.189 g/L和515.3±17.79μmol*min*mg;醇类等有机试剂均不同程度抑制EG5A的活力。EG5A水解大麦葡聚糖、燕麦葡聚糖、地衣多糖的产物相同,都是葡萄糖、纤维二糖、3-O-纤维二糖基-葡萄糖（G4G3G）、3-O-纤维三糖基-葡萄糖（G4G4G3G）;水解微晶纤维素、羧甲基纤维素钠生成的终产物主要为葡萄糖、纤维二糖、纤维三糖;水解山毛榉木聚糖主要生成木二糖、木三糖、木四糖。同时,EG5A能够水解纤维寡糖。在pH7.0、37℃条件下,EG16A能够水解大麦葡聚糖、燕麦葡聚糖、地衣多糖、昆布多糖、酵母葡聚糖、β-1,3-葡聚糖,其对大麦葡聚糖的水解活力最高。以大麦葡聚糖为底物,测得EG16A的最适反应pH为7.0,最适反应温度为40℃,其能在pH3.0-7.0和温度25℃-40℃间保持稳定;EG16A的Km值和Vmax值分别为4.363±0.230 g/L和15.94±0.320μmol*min*mg;醇类等有机试剂均不同程度抑制EG16A的活力。EG16A水解大麦葡聚糖、燕麦葡聚糖、地衣多糖生成的终产物为葡萄糖、纤维二糖、昆布二糖、4-O-昆布二糖基-葡萄糖（G3G4G）、4-O-昆布二糖基-纤维二糖（G3G4G4G）;水解昆布多糖、酵母葡聚糖时,生成的产物类型主要是三糖、四糖。

关键词： β-木聚糖酶 β-1,3-1,4-葡聚糖酶 β-1,3(4)-葡聚糖酶酶学性质水解产物

肠膜明串珠菌ATCC 12291蔗糖磷酸化酶的酶学性质及转糖苷分子改造

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食品科学 2019年第20期40卷 122-129页

作者：何贺贺林厚民寇力丹覃凤兰韦宇拓黄日波杜丽琴亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室广西大学生命科学与技术学院

根据GenBank数据库公布的肠膜明串珠菌ATCC 12291中蔗糖磷酸化酶基因序列,构建重组表达质粒pQE-lmsp.在大肠杆菌Escherichia coli M15/pREP4中诱导表达,镍亲和层析纯化蛋白,进行酶学性质测定和重组酶转糖苷活性的研究.以蔗糖为底物对LMs... 详细信息

根据GenBank数据库公布的肠膜明串珠菌ATCC 12291中蔗糖磷酸化酶基因序列,构建重组表达质粒pQE-lmsp.在大肠杆菌Escherichia coli M15/pREP4中诱导表达,镍亲和层析纯化蛋白,进行酶学性质测定和重组酶转糖苷活性的研究.以蔗糖为底物对LMsp进行酶学性质分析,其最适温度和最适pH值分别为40℃和6.5;Km值和Vmax值分别为(34.16±1.219)mmol/L和(370.5±6.049)μmol/(mg·min).当以葡萄糖-1-磷酸为供体时,对于大多数单糖及其糖醇类受体均具有转糖苷活性,尤其对L-阿拉伯糖具有75%的转化效率.然后通过对LMsp进行同源建模和氨基酸序列比对分析,进行分子改造,并比较酶学性质及转糖苷活性的变化.获得7个单点和联合的突变体T180A、T219V、P236S、T180A-T219V、T180A-P236S、T219V-P236S、T180A-T219V-P236S,其中突变体T180A、P236S对L-山梨糖的转糖苷活性分别有13.7%和15%的提高.本研究通过对LMsp的研究,发现其具有良好的酸碱稳定性和对L-阿拉伯糖的高转糖苷活性,并且获得了对于L-山梨糖转糖苷活性提高的突变体,丰富了有关于蔗糖磷酸化酶的性质,并且对该酶的分子改造提供了经验依据.

关键词：肠膜明串珠菌蔗糖磷酸化酶酶学性质转糖苷功能分子改造

海南省桶装饮用水中铜绿假单胞菌耐药性、T3SS毒力基因分布与同源性分析

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中国热带医学 2023年第12期23卷 1307-1312页

作者：杨穗珊朱梦常秀亭罗小菊寇力丹王彬谢作蓉海南省食品检验检测中心国家市场监管重点实验室(热带果蔬质量与安全)海南海口570311

目的对海南省桶装饮用水中铜绿假单胞菌的耐药性及Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,T3SS)毒力基因携带情况进行调查,在菌株核糖体分型基础上探讨其与样品来源及毒力基因之间的关系,为桶装饮用水的安全监管、污染溯源调查及耐药菌... 详细信息

目的对海南省桶装饮用水中铜绿假单胞菌的耐药性及Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,T3SS)毒力基因携带情况进行调查,在菌株核糖体分型基础上探讨其与样品来源及毒力基因之间的关系,为桶装饮用水的安全监管、污染溯源调查及耐药菌临床治疗提供数据基础。方法使用VITEK 2 Compact全自动微生物药敏系统对分离得到的55株铜绿假单胞菌进行耐药性分析,通过PCR法扩增T3SS毒力基因ExoU、ExoS、ExoT、ExoY,并应用RiboPrinter全自动微生物基因指纹鉴定系统对分离菌株进行鉴定分型及聚类同源性分析。结果药敏结果显示,桶装饮用水中分离的铜绿假单胞菌菌株处于较低耐药水平,但仍然发现1株多重耐药铜绿假单胞菌,对亚胺培南、环丙沙星、头孢吡肟均耐药。T3SS毒力基因分布表现为4种基因型组合,分别为ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(+)/ExoU^(-)(45.45%,25/55)、ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(-)/ExoU^(+)(34.55%,19/55)、ExoT^(+)/ExoY^(-)/ExoS^(-)/ExoU^(+)(18.18%,10/55)、ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(+)/ExoU^(+)(1.82%,1/55)。菌株核糖体分型共分为6个亚型,各亚型包含菌株数分别为24、1、25、1、3、1,占比分别为43.64%、1.82%、45.45%、1.82%、5.45%和1.82%,以亚型Ⅰ和亚型Ⅲ的菌株占主要优势,亚型Ⅰ菌株主要的T3SS基因型为ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(-)/ExoU^(+),占比66.67%(16/24),亚型Ⅲ菌株主要的T3SS基因型则为ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(+)/ExoU^(-),占比88%(22/25)。结论T3SS分泌系统呈现多个毒力基因协同表达的特点,各菌株亚型与毒力基因型存在一定的关联性,通过对两者之间的关系探讨对桶装饮用水铜绿假单胞菌污染溯源、生产控制、临床治疗具有一定的指导意义,初步积累了本地桶装饮用水中铜绿假单胞菌株库及药敏数据。

关键词：铜绿假单胞菌桶装饮用水耐药性毒力基因同源性

海南酸瓜源植物乳杆菌与壳聚糖复合处理对芒果保鲜效应研究

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食品安全质量检测学报 2023年第18期14卷 146-153页

作者：杨穗珊朱梦常秀亭罗小菊寇力丹谢作蓉海南省食品检验检测中心国家市场监管重点实验室(热带果蔬质量与安全)海口570311

目的从海南酸瓜中筛选具有抑菌活性的植物乳杆菌,并探究其发酵液与壳聚糖复配处理对芒果贮藏品质的影响。方法采用MRS培养基结合生理生化特征从酸瓜中分离植物乳杆菌,通过牛津杯法筛选对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特... 详细信息

目的从海南酸瓜中筛选具有抑菌活性的植物乳杆菌,并探究其发酵液与壳聚糖复配处理对芒果贮藏品质的影响。方法采用MRS培养基结合生理生化特征从酸瓜中分离植物乳杆菌,通过牛津杯法筛选对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌具有抑菌效果的菌株,采用16s rRNA基因序列测定方法对菌株进行确认。以芒果为保鲜对象,分别用菌株发酵液、壳聚糖、菌株发酵液-壳聚糖复配液进行处理,25℃贮藏12 d,每2 d取样,测定好果率、失重率、可溶性固形物、可滴定酸、维生素C(vitamin C,VC)、菌落总数、霉菌和酵母的变化,评价不同处理方式对芒果的保鲜作用。结果从海南传统发酵食品酸瓜中分离得到一株具有抑菌效果的植物乳杆菌R2。菌株发酵液、壳聚糖、菌株发酵液-壳聚糖复配液3种处理方式对芒果均具有保鲜效果,均能有效提高芒果好果率,降低失重率,减缓VC的损失,抑制表面微生物的生长而减缓芒果腐烂,其中菌株发酵液-壳聚糖复配液的保鲜效果最佳。与CK组对比,在贮藏第12 d时,菌株发酵液-壳聚糖复配液处理组的好果率高40%,失重率和可溶性固形物分别降低了4.4%和3.1%,可滴定酸下降趋势减缓,VC的含量为CK组的1.5倍,芒果表面菌落总数、霉菌和酵母菌落数均小于CK组。结论海南酸瓜源植物乳杆菌发酵液结合壳聚糖复配处理能有效保持芒果的贮藏品质,对芒果采摘后保鲜、果实品质保持和食品安全风险控制具有较好的应用价值。

关键词：植物乳杆菌海南酸瓜壳聚糖芒果保鲜

一株黄瓜源肠集聚性大肠埃希氏菌耐药及生长预测模型分析

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食品安全质量检测学报 2022年第18期13卷 5917-5923页

作者：罗小菊寇力丹杨穗珊朱梦常秀亭谢作蓉海南省食品检验检测中心国家市场监管重点实验室(热带果蔬质量与安全)海口570311

目的考查一株黄瓜源肠集聚性大肠埃希氏菌(enteroaggregative Escherichia coli,EAEC)的耐药情况,并建立其生长预测模型。方法将采集的黄瓜样品进行大肠埃希氏菌的分离和鉴定,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对EAEC... 详细信息

目的考查一株黄瓜源肠集聚性大肠埃希氏菌(enteroaggregative Escherichia coli,EAEC)的耐药情况,并建立其生长预测模型。方法将采集的黄瓜样品进行大肠埃希氏菌的分离和鉴定,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对EAEC特征性毒力基因进行确认,并通过VITEK 2 Compact全自动微生物药敏系统进行18种抗生素的耐药性分析;以分离鉴定的EAEC为研究对象,监测其在4、15、25、35℃贮藏条件下在黄瓜上的生长数据,绘制生长曲线,采用SLogistic模型进行拟合,建立黄瓜中EAEC生长预测模型。结果自黄瓜中分离到一株EAEC,携带aggR和astA毒力基因,对磺胺类药物复方新诺明高度耐药。4、15、25、35℃贮藏条件下EAEC在黄瓜上的生长用SLogistic模型拟合的相关系数都大于0.95,该模型可以有效地反应EAEC在黄瓜上的生长情况。结论黄瓜上存在EAEC污染风险,EAEC的耐药性进一步加剧生食黄瓜的安全风险。通过SLogistic方程可以有效建立不同温度条件下EAEC在黄瓜上的生长预测模型,对生食黄瓜的加工、供餐等过程中食源性致病菌风险控制提供参考依据。

关键词：黄瓜肠集聚性大肠埃希氏菌耐药生长预测模型