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CRISPR-Cas9介导BSP基因编辑对乳腺癌细胞生物学性质的影响

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CRISPR-Cas9介导BSP基因编辑对乳腺癌细胞生物学性质的影响

作者：宋丽杰华南理工大学

学位级别：硕士

CRISPR-Cas9系统是原核生物抵御病毒或质粒等外来遗传物质入侵的一种获得性免疫系统,主要由非特异性Cas9核酸酶和起识别作用的crRNA组成。该系统自2012年首次证明可以在体外对DNA进行基因编辑,现已成功地应用于不同物种的基因编辑中。... 详细信息

CRISPR-Cas9系统是原核生物抵御病毒或质粒等外来遗传物质入侵的一种获得性免疫系统,主要由非特异性Cas9核酸酶和起识别作用的crRNA组成。该系统自2012年首次证明可以在体外对DNA进行基因编辑,现已成功地应用于不同物种的基因编辑中。作为一种新型的基因编辑技术,该技术具有简单、快速、高效等优点。目前该技术已成功的应用于多种物种的基因敲除、gRNA文库的建立及动物疾病模型的构建等。骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein,BSP)是骨基质中一种高度磷酸化和糖基化的分泌性蛋白,在肿瘤的粘附、增殖、侵袭、基质降解、免疫反应(炎症和补体逃逸)、血管生成等转移相关的多个过程中发挥重要作用。自1994年Bellahcene首次证实BSP表达与乳腺癌骨转移相关,有关乳腺癌骨转移与BSP的关系研究取得了明显进展。目前相关研究报道中抑制BSP表达的方法包括反义核酸、BSP抗体及RNA干扰技术,但都只是在转录后或翻译水平不同程度地暂时降低BSP的表达。因此,本研究拟利用CRISPR-Cas9技术,在转录水平抑制亲骨转移乳腺癌细胞(231BO)的BSP基因表达,通过细胞增殖、克隆形成和细胞划痕实验初步检测细胞生物学性质变化,为进一步研究BSP与乳腺癌骨转移关系的分子机制提供实验依据。本实验的主要研究结果如下:1.成功构建表达Cas9蛋白的亲骨转移乳腺癌细胞(231BO-Cas9)。通过流式细胞术、Western blot、免疫细胞化学检测证实231BO-Cas9细胞表达Cas9蛋白,并且在核定位信号的引导下能够进入到细胞核中。2.实时无标记动态细胞分析和划痕实验结果表明Cas9蛋白的表达对乳腺癌细胞的增殖和迁移均无影响;电镜观察发现231BO-Cas9与231BO细胞的细胞膜、细胞器及细胞核的结构一致,提示Cas9蛋白表达对乳腺癌细胞超微结构无影响。***检测和基因测序结果表明针对BSP的gRNA能够介导Cas9蛋白对靶位点进行切割,造成BSP基因的插入缺失突变,提示231BO-Cas9细胞表达的Cas9蛋白能够进入到细胞核中并发挥核酸内切酶的作用。4.利用CRISPR-Cas9技术获得2株BSP蛋白表达下降乳腺癌细胞株(231BO-Cas9-gRNA)。与对照组细胞相比,western blot结果显示2株231BO-Cas9-gRNA细胞BSP表达下降分别为34.5%和36.7%;通过CCK-8检测发现231BO-Cas9-gRNA细胞增殖能力下降,细胞划痕实验提示231BO-Cas9-gRNA细胞的愈合速度分别降低28%和32.9%;克隆形成实验显示231BO-Cas9-gRNA细胞的克隆形成能力分别降低32.3%和37.2%。实验结果表明CRISPR-Cas9介导BSP基因编辑引起BSP蛋白表达水平下调后,亲骨转移乳腺癌细胞的增殖、迁移及克隆形成能力均有所下降。

关键词：骨唾液酸蛋白 CRISPR-Cas9 基因编辑乳腺癌细胞

PGE1对培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

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PGE1对培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

作者：宋丽杰郑州大学

学位级别：硕士

心肌缺血再灌注损伤(Myocardial ischemia/reperfusion injury，IRI)是冠状动脉再通术(药物溶栓法、冠脉腔内成形术或冠脉搭桥术)后的重要并发症与致死原因之一，其机制尚未完全清楚。如何把握时机改善血流，治疗心肌缺血，同时采取细... 详细信息

心肌缺血再灌注损伤(Myocardial ischemia/reperfusion injury，IRI)是冠状动脉再通术(药物溶栓法、冠脉腔内成形术或冠脉搭桥术)后的重要并发症与致死原因之一，其机制尚未完全清楚。如何把握时机改善血流，治疗心肌缺血，同时采取细胞保护措施防治心肌缺血/再灌注损伤是现代心脏病学中的研究热点之一。前列腺素E(Prostaglandin E，PGE)，是前列腺素的一种，具有扩张血管、改善微循环、稳定细胞膜、抑制血小板聚集、抑制细胞内钙动员等多种作用，是目前治疗血栓栓塞性疾病的药物之一。实验证实PGE对冠状动脉结扎法所致缺血/再灌注心肌损伤有明显保护作用。为排除神经体液等因素的影响，本课题采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型，从细胞水平研究PGE对体外培养的心肌细胞缺血再灌注损伤的直接保护作用及对细胞凋亡的影响，并对其作用机制进行探讨。实验采用新生Wistar乳鼠(1～3d)，无菌条件下取出心脏，一 PBS缓冲液冲洗后用 0二25％胰酶反复消化，收集心肌细胞悬液，差速贴壁纯化后制成 3 X 10’·ml”’的心肌细胞悬液接种至 25ml培养瓶(测量MTT的接种到96孔培养板)培养，72h后用原代心肌细胞进行试验。用缺氧液置换正常培养液造成缺氧，用复氧液置换缺氧液模拟再灌注损伤。实验分5组：正常细胞培养组、缺氧复氧损伤(H／R)模型组、缺氧复氧损伤＋PGE;小剂量＊·ml” 忙卜缺氧复氧损伤干P＊E;中剂量门5 ngm卜)组、缺氧复氧损伤＋PGE;大剂量K5 ng·ml“’)组。分别检测以下指标：O心肌细胞形态学变化。O心肌细胞MDA含量及SOD活性：缺氧60min再给氧 30min后，用 0．125％胰酶消化使细胞脱落制成细胞悬液，超声波细胞粉碎仪将细胞匀浆后，黄瞟吟氧化酶法测定SOD活力，硫代巴比妥酸显色法测定MDA含量。①细胞内线粒体脱氢酶活性：缺氧Zh再给氧***后，MTT染色法测定细胞光密度 (OD)值。＠乳酸脱氢酶活性：各组缺氧3 omin再给氧40min后，取其细胞培养液***测LDH含量。⑤心肌细胞电镜超微结构：缺氧30min再给氧40min后，用0．125％胰酶消化使细胞脱落制成细胞悬液，离心固定，超薄切片和双羟染色后以透射电镜观察其超微结构。结果显示： 1．心肌细胞形态学改变：倒置显微镜下，正常培养心肌细胞组细胞从第三天起成簇生长，搏动明显，细胞簇数量增多，细胞形状多样化，呈圆形、梭型及椎型，胞浆突起呈枝芽状，向细胞簇周围呈放射状生长，折光性强。缺氧复氧损伤后，胞体折光 2 一性下降，突起缩短或消失，搏动减弱或消失。PGE;各剂量组心肌细胞形态均较Hft组明显改善。 2．心肌细胞 SOD活性：Hfll组 SOD活性为 171．80士门．6U·gJ中＊，较正常对照组(292刀2士 19．78U·gJPro)明显下降。 PGE;sng·ml”组 SOD活性(192．08士32．52 g·g－’Pro)与模型组相卜无统计学意义(＊＞0．05)，而＊＊E;15 ngml”、45 ngm卜组，SOD 活性均较 He组显著提高(分别为 220二4士 18．92 g·gl＊ro、270．91 土1＊25 U令午ro)(P＜O．01)， 3．心肌细胞MDA含量：H／R组脂质过氧化反应较强烈，其产物MDA含量由正常培养细胞组0尸7士0．34 nmol·mg”午ro升至 3二7士0．72 nmol·mg”午ro(P＜0刀1)，PGE;各齐量组MDA含量分另下降至 1．99士 0．3 5、l石 1士 0．3 5、1．3 8士 0．29(nmol·mg－中ro)，与模型组相比均有明显差异(P＜***)，提示PGEI对心肌细胞具有明显抗脂质过氧化作用。 4．心肌细胞线粒体脱氢酶活性：OD值大小反映细胞内线粒体脱氢酶的活性。H／R组细胞 OD值门．27士 0刀 17)较对照组门．42 士0．014)明显下降(P＜***)，PGE;各剂量组OD值均较H服乡升高(分另为 0．36士0．024、0．38士0．019、0．50士0．02

关键词：前列腺素E1 心肌细胞培养缺氧复氧损伤超氧化物歧化酶丙二醛乳酸脱氢酶细胞凋亡

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A行政单位全面预算管理应用研究

A行政单位全面预算管理应用研究

作者：宋丽杰广西大学

学位级别：硕士

全面预算管理是一种集系统化、战略化和人本化理念为一体的现代管理模式，它集体制、机制、方法于一体，以全员、全面、全方位、全过程监控为核心的一种系统管理方法和策略工具，具有全面控制和约束力。全面预算管理是由一系列预算所构... 详细信息

全面预算管理是一种集系统化、战略化和人本化理念为一体的现代管理模式，它集体制、机制、方法于一体，以全员、全面、全方位、全过程监控为核心的一种系统管理方法和策略工具，具有全面控制和约束力。全面预算管理是由一系列预算所构成的预算体系，是一种综合性的企业管理制度。目前对全面预算的研究，主要集中于企业，本文借鉴企业全面预算管理理论，从行政单位的角度进行了全面预算管理的应用研究，试图找到适合行政单位的全面预算管理方法。本文在引述全面预算管理有关理论和方法的基础上对A行政单位全面预算管理方案进行研究，提出了实施A行政单位全面预算管理方案构建的工作思路，对A行政单位预算管理现状和存在的问题进行背景分析，探讨该单位全面预算管理方案的构建的理论依据，得出了该单位全面预算管理的解决思路和方案的设计。文章从预算目标的构建、预算编制方法的选择、预算编制内容、预算编制过程、预算的执行与监控、预算分析和考评等方面进行了A单位全面预算管理体系的构建。

关键词：全面预算预算编制预算执行预算监控预算考核

影子银行对我国商业银行体系稳定性的影响研究

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影子银行对我国商业银行体系稳定性的影响研究

作者：宋丽杰郑州大学

学位级别：硕士

就全球发展范围来说,影子银行的问题是世界各国普遍关注的焦点。伴随着金融创新的不断发展,影子银行的形式更加多样化,更加贴近大众生活,尤其是近几年来,影子银行已深深渗透到商业银行内部:理财产品、未贴现承兑汇票、委托贷款等形式已... 详细信息

就全球发展范围来说,影子银行的问题是世界各国普遍关注的焦点。伴随着金融创新的不断发展,影子银行的形式更加多样化,更加贴近大众生活,尤其是近几年来,影子银行已深深渗透到商业银行内部:理财产品、未贴现承兑汇票、委托贷款等形式已成为商业银行表外业务的重要形式;商业银行不断加深与证券公司、基金公司、信托公司等非银行业金融机构的合作,开展银证合作、银信合作以及银证信合作等模式。此外,民间融资的形式已被大大拓展,各种融资平台如雨后春笋般以疾风迅雷的速度遍布神州大地,这种与银行相抗衡的力量,由于缺乏相应的监管机制和法律规范,引起了社会深深的担忧。任何一种新事物的出现,必然伴随着利弊两方面。文章客观理性地分析带有中国特色的影子银行的问题,并从各个角度,在理论上剖析其对我国商业银行稳定性的影响机制,并运用实证分析验证其影响效果。首先,由于国际上并没有关于影子银行的权威定义,文章在借鉴专家学者的基础上,结合现代金融创新的形式和趋势,对影子银行在此创新背景下给出界定并分类,对其在我国的发展状况给予详细分析。将对影子银行影响大,占比高的业务形式通过整合计算,测算出近几年影子银行的发展规模。其次,关于商业银行稳定性并没有一个现有的测量标准。所以,本文将在其他相关研究的基础上,按照宏观经济因素、金融因素和商业银行自身运营的因素三大类别,其中选出具有代表意义对商业银行影响大的指标来综合评价我国商业银行的稳定性。再次,针对影子银行对我国商业银行体系稳定性进行理论分析,从积极和消极影响两方面着手,分析影子银行对我国商业银行稳定性的业务增强机制和风险传递机制。另外,基于影子银行的规模和商业银行稳定性的测算标准的分析,选取其他相关解释变量,构建非线性回归模型,进行实证检验。结果显示,就目前阶段而言,影子银行的发展对我国商业银行体系的稳定性具有推动作用。最后,根据实证模型得出结论,并从三方面提出建议:国家适度鼓励影子银行的发展,从而最大程度上发挥影子银行的积极作用;相关部门完善对影子银行的监管,并优化其内控机制;推动金融改革,引导影子银行良性发展。

关键词：影子银行商业银行稳定性金融创新金融监管

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肺类癌治疗现状与进展

中华医学杂志 2020年第16期100卷 1277-1280页

作者：余旭旭陈钟宋丽杰郑州大学第一附属医院肿瘤科郑州450052

神经内分泌肿瘤是一组少见的具有内分泌功能的异质性恶性肿瘤,肺部是其好发部位之一。肺类癌是肺神经内分泌肿瘤的一种类型,包括典型类癌和非典型类癌。由于肺类癌发病率和恶性程度低,预后较好,在临床上容易被忽视;而其临床症状、诊断... 详细信息

神经内分泌肿瘤是一组少见的具有内分泌功能的异质性恶性肿瘤,肺部是其好发部位之一。肺类癌是肺神经内分泌肿瘤的一种类型,包括典型类癌和非典型类癌。由于肺类癌发病率和恶性程度低,预后较好,在临床上容易被忽视;而其临床症状、诊断、治疗等具有一定的特殊性,本文拟对肺类癌的治疗现状及进展进行综述。

关键词：神经内分泌瘤肺类癌治疗

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对思想政治课多媒体辅助教学的认识与思考

对思想政治课多媒体辅助教学的认识与思考

作者：宋丽杰辽宁师范大学

学位级别：硕士

随着科学技术的进步,人类的教育技术手段和教学模式出现过多次重大改革,多媒体教学越来越引人注目。运用多媒体教学,不仅能充分调动学生视听器官,使其很快进入情境,得到美的享受,而且能促进学生积极主动地学习,激发学生的学习兴趣,加深... 详细信息

随着科学技术的进步,人类的教育技术手段和教学模式出现过多次重大改革,多媒体教学越来越引人注目。运用多媒体教学,不仅能充分调动学生视听器官,使其很快进入情境,得到美的享受,而且能促进学生积极主动地学习,激发学生的学习兴趣,加深其对教学内容的理解。但不恰当地运用多媒体,不仅达不到应有的效果,反而会产生许多负面影响。因此,只有一切从实际出发,充分利用多媒体技术,克服在运用中的不足之处,思想政治课教学才会具有生命力。思想政治课教师,要不断转变观念,进行改革创新,努力学习,掌握并运用现代教育技术,切实提高课堂教学质量,让思想政治课焕发出更强的生机和活力。

关键词：多媒体辅助教学思想政治课教学

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论改革开放前后中国政治信任的变迁及启示

论改革开放前后中国政治信任的变迁及启示

作者：宋丽杰吉林大学

学位级别：硕士

政治信任是在一定的政治和社会环境下，公民在与政治系统的互动过程中形成的对政治系统及其内部各因素的信心。政治信任内部包括不同的层次，由低到高分别是：公民对公职人员的信任，公民对政府的信任，公民对政治制度和政治共同体的信... 详细信息

政治信任是在一定的政治和社会环境下，公民在与政治系统的互动过程中形成的对政治系统及其内部各因素的信心。政治信任内部包括不同的层次，由低到高分别是：公民对公职人员的信任，公民对政府的信任，公民对政治制度和政治共同体的信任，这三个层次是层层递进的。低层次政治信任的积累有利于形成并维持高层次的政治信任。政治信任来源于公民对政治制度绩效的理性计算，同时受到个体条件的制约，被本国的政治文化所塑造。政治信任对于维持政治系统稳定，降低政策成本有重要价值。中华人民共和国成立后到改革开放之前，中国的政治信任状况主要表现为：对政治制度和政治共同体的信任水平比较高;而对公职人员的信任度则出现波动;政治信任带有浓厚的领袖崇拜色彩;政治信任主体的理性缺失;政治不信任无法进行公开表达。而改革开放之后，中国社会发生了全面的变化，同时中国的政治信任状况也发生了一些变化：对政治制度和政治共同体的信任虽然出现波动，但总体水平较高;公职人员的政治信任流失严重;对政府的信任呈现出央强地弱的特点;政治信任的差异化和个人化;政治不信任的压力增加。综观改革开放前后中国政治信任状况的变化，可以看出中国的政治信任呈现出由人格信任向制度信任的演变图景。这启示我们要把握好政治信任和不信任的合理限度;要发挥传统政治文化的积极作用，维持公民对政治制度和共同体的信任;提高公职人员素质，重塑对公职人员的信任;加强基础政府建设，提高公民对基层政府的信任度;还要提高公民的鉴别能力，扩大理性政治信任的维度。

关键词：改革开放政治信任层次变迁

GPS/INS紧组合导航系统的故障诊断方法研究

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GPS/INS紧组合导航系统的故障诊断方法研究

作者：宋丽杰哈尔滨工程大学

学位级别：硕士

随着科学技术的发展和控制理论的进步,尤其是在航天、航海等事业的发展,组合导航系统的发展已经成为了主流的发展趋势,导航系统朝着大规模、更复杂的方向发展。为了使导航系统的精度和可靠性更好的提高,所以故障诊断技术成为了必要的手... 详细信息

随着科学技术的发展和控制理论的进步,尤其是在航天、航海等事业的发展,组合导航系统的发展已经成为了主流的发展趋势,导航系统朝着大规模、更复杂的方向发展。为了使导航系统的精度和可靠性更好的提高,所以故障诊断技术成为了必要的手段,其中,人工神经网络的引入与应用成为了研究的热潮,并给组合导航系统的故障诊断指明了新的研究方向,能够满足各领域的应用需求并且给现代的军事提供有力的保障。以GPS(Global Positioning System)卫星导航系统为例,按照GPS/INS组合导航系统的发展可以将其概括为松组合、紧组合以及深组合三种方式。松组合的研究已经相对成熟,所以本文以GPS/INS紧密组合导航系统为研究背景,进行了故障的检测和诊断技术的方法的研究。目前,故障诊断的方法很多,其中人工智能方法已经成为了越来越潮流的方法。神经网络技术具有智能和仿生控制的功能,从开始创立神经网络一直到现如今己经历了五十多年的研究,它在极其曲折发展道路上艰难发展大起大落,它的特点是自适应性、自主学习能力、线性化能力、容错能力等,目前己在故障检测、信息融合等多个领域被广泛的应用。本文首先介绍了课题的研究背景和意义以及故障诊断与容错技术的发展现状,故障诊断技术的主要类型、任务和常用的方法,以及将该方法引入到组合导航系统中的方法,然后系统的介绍了组合导航系统的发展和原理,以及对其可靠性进行了研究,分析了组合导航的各个传感器的误差模型以及故障结构。根据组合导航系统的各传感器常见的惯常故障模型提出了故检测和诊断的方法设计。本文把故障分为五种模型,通过将神经网络方法与传统的故障检测方法相结合从而达到优势互补的效果,可以使系统的可靠性和精度得到显著的提升。应用χ2检测算法对组合导航故障进行探究和分析,然后提出将神经网络方法应用到系统中,在对神经网络的设计过程中,发现了将集成算法与神经网结合,形成了集成神经网络的新方法,并对于所发现的新方法进行了算法的仿真验证。最后,把此方法引入到组合导航系统的故障诊断中,设计了基于该方法的组合导航故障诊断的系统原理和结构,结果表明该系统可行并且有效。

关键词：组合导航信息融合故障诊断神经网络集成算法

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直肠神经内分泌肿瘤的单中心临床研究

肿瘤 2017年第2期37卷 163-170页

作者：王怡君宋丽杰樊青霞郑州大学第一附属医院肿瘤科河南郑州450000

目的 :探讨直肠神经内分泌肿瘤(neuroendocrine neoplasms,NENs)患者的临床病理特征、治疗方法、预后及影响因素。方法 :收集郑州大学第一附属医院2011年1月—2016年3月收治的80例直肠NENs患者的临床病理资料和随访资料,对所有标本进行... 详细信息

目的 :探讨直肠神经内分泌肿瘤(neuroendocrine neoplasms,NENs)患者的临床病理特征、治疗方法、预后及影响因素。方法 :收集郑州大学第一附属医院2011年1月—2016年3月收治的80例直肠NENs患者的临床病理资料和随访资料,对所有标本进行免疫组织化学法检测及分级分期,采用Kaplan-Meier法和COX比例风险模型对可能影响预后的临床病理因素进行单因素和多因素分析。结果:80例患者中,男性47例,女性33例;中位年龄52岁(范围:20~75岁),肿瘤平均直径为1.65 cm,常见症状为排便习惯改变(37.5%)、便血(23.7%)和腹痛(16.3%)。嗜铬粒蛋白A(chromogranin,Cg A)的阳性率为50.0%,突触素(synaptophysin,Syn)的阳性率为97.5%。74例行手术治疗,12例接受化疗。随访时间3~57个月,中位无进展生存时间为20个月(95%可信区间为15.354~24.646个月)。全组患者1年和3年的总生存率为93.4%和85.7%。多因素分析结果显示,美国东部肿瘤协作组(Eastern Cooperative Oncology Group,ECOG)体能状况评分(P<0.001)、肿瘤直径(P=0.010)、Ki-67阳性指数(P=0.020)、TNM分期(P=0.012)是与预后相关独立危险因素。结论 :直肠NENs较罕见,但发病率呈明显上升趋势。手术切除是首选治疗手段。ECOG体能状况评分、肿瘤直径、Ki-67阳性指数、TNM分期是与预后相关独立危险因素。

关键词：癌,神经内分泌临床方案预后