检索结果-南通市图书馆

免疫学杂志 2008年第4期24卷 380-384页

作者：宁亚蕾周立雄张卫军鲁东水肖斌毛旭虎邹全明第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038 重庆工学院生物工程学院生物制药系重庆400050

目的构建基于大肠杆菌α-溶血素(HlyA)分泌机制的原核胞外分泌表达载体系统,将重组人白介素6(rhIL-6)分泌至胞外培养基中。方法利用分子克隆手段,从引起人泌尿道感染的大肠杆菌UPECJ96菌株染色体上获得了α-溶血素(HlyA)系统的分泌功能... 详细信息

目的构建基于大肠杆菌α-溶血素(HlyA)分泌机制的原核胞外分泌表达载体系统,将重组人白介素6(rhIL-6)分泌至胞外培养基中。方法利用分子克隆手段,从引起人泌尿道感染的大肠杆菌UPECJ96菌株染色体上获得了α-溶血素(HlyA)系统的分泌功能基因,与外源基因片段hIL-6一起克隆至pQE30骨架载体,构建了胞外分泌表达质粒pISQ,转化***10,诱导表达后通过Western blot检测培养上清中hIL-6的表达。结果获得了与设计完全一致的pISU载体,Western blot结果显示,可以在pISQ/*** Top10培养液上清中检测到与His-hIL6-HlyAs融合蛋白相对分子质量大小一致的特异条带。结论大肠杆菌HlyA分泌系统操纵子能够在染色体和质粒间传递,rhIL-6能够通过该系统被特异地分泌至胞外培养基中,以可溶形式存在,为后续生物学研究奠定了基础。

关键词：人白介素6 α-溶血素分泌系统 hly操纵子胞外分泌表达

腺苷A_(2A)受体在中枢神经系统损伤中的相关研究进展

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局解手术学杂志 2018年第7期27卷 528-532页

作者：卢丁烯张开元宁亚蕾周元国陆军军医大学(第三军医大学)野战外科研究所分子生物学中心创伤烧伤及复合伤国家重点实验室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)研究生院重庆400038

中枢神经系统损伤以其高发生率和高死残率,已经成为紧迫的世界性公众健康问题,但目前还缺乏公认安全有效的疗法。腺苷A_(2A)受体(A_(2A)R)作为神经精神活动及中枢神经系统损伤的重要调控因子,引起了普遍的关注。目前,研究发现在中枢神... 详细信息

中枢神经系统损伤以其高发生率和高死残率,已经成为紧迫的世界性公众健康问题,但目前还缺乏公认安全有效的疗法。腺苷A_(2A)受体(A_(2A)R)作为神经精神活动及中枢神经系统损伤的重要调控因子,引起了普遍的关注。目前,研究发现在中枢神经系统损伤中,激活A_(2A)R有加重神经损伤与神经保护的复杂作用。本文即对A_(2A)R在中枢神经损伤中的作用与机制进行探讨。

关键词：腺苷 A 2A受体中枢神经系统损伤

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脑损伤后脑脊液腺苷浓度测定方法的建立

西南国防医药 2010年第7期20卷 697-699页

作者：杨楠戴双双宁亚蕾王昊周元国第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所分子生物学中心创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的建立人脑脊液中腺苷(adenosine,AD)浓度的检测方法。方法收集脑损伤后病人脑脊液,采用ODS反相C18柱检测,以50mmol/L磷酸二氢钠∶甲醇(80∶20)为流动相,流速为1.0ml/min,检测波长为254nm。结果该方法在检测0.78～15mg/L腺苷浓度有着... 详细信息

目的建立人脑脊液中腺苷(adenosine,AD)浓度的检测方法。方法收集脑损伤后病人脑脊液,采用ODS反相C18柱检测,以50mmol/L磷酸二氢钠∶甲醇(80∶20)为流动相,流速为1.0ml/min,检测波长为254nm。结果该方法在检测0.78～15mg/L腺苷浓度有着良好的线性关系(R2=0.9981),保留时间为4.9min,平均加样回收率为(98.59±0.65)%,日内相对标准偏差小于2.46%,日间相对标准偏差小于3.56%。脑损伤病人脑脊液腺苷含量高于正常腺苷范围。结论本方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、操作简便等优点,可用于脑脊液中腺苷浓度的测定。

关键词：脑损伤腺苷脑脊液反相高效液相色谱法

新月柄杆菌RsaA分泌系统用于大肠杆菌胞外递送重组蛋白的初步研究

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生物技术通讯 2008年第2期19卷 175-180页

作者：宁亚蕾周立雄肖斌张卫军曾浩毛旭虎邹全明第三军医大学临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038 重庆工学院生物工程学院重庆400050

目的:构建基于新月柄杆菌RsaA外运机制的以大肠杆菌为宿主的原核胞外分泌表达载体系统。方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系统操纵子组织方式,将RsaA系统外运功能基因配合以异源调控序列克隆至pQE30骨架质粒。以绿色荧光蛋白(GFP)为报... 详细信息

目的:构建基于新月柄杆菌RsaA外运机制的以大肠杆菌为宿主的原核胞外分泌表达载体系统。方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系统操纵子组织方式,将RsaA系统外运功能基因配合以异源调控序列克隆至pQE30骨架质粒。以绿色荧光蛋白(GFP)为报告分子、大肠杆菌M15为宿主菌,诱导表达后通过Western Blotting检测培养上清中GFP的表达。结果:获得了与设计完全一致的pQABPS载体,利用该载体系统,在培养上清中报告分子GFP的表达明显增加,且是通过特异的RsaA外运机制被分泌至胞外的,而非渗漏表达或简单的信号肽引导。结论:在大肠杆菌中重现了RsaA分泌系统的外运功能,为该系统在基因工程领域的应用研究打下了良好基础。

关键词：新月柄杆菌 RsaA分泌系统大肠杆菌胞外分泌表达载体

基于新月柄杆菌RsaA外运机制的EspA及EspA-IL-24融合蛋白胞外分泌表达研究

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生物技术通讯 2008年第3期19卷 353-357页

作者：宁亚蕾周立雄毛旭虎张卫军程琰余抒邹全明第三军医大学临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038 香港大学医学院

目的:实现大肠杆菌分泌蛋白(Esp)A及EspA与白细胞介素(IL)-24融合蛋白的胞外分泌表达,进一步验证基于新月柄杆菌RsaA外运机制的原核胞外分泌表达载体系统的有效性和通用性,并改造优化该系统。方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系统操纵... 详细信息

目的:实现大肠杆菌分泌蛋白(Esp)A及EspA与白细胞介素(IL)-24融合蛋白的胞外分泌表达,进一步验证基于新月柄杆菌RsaA外运机制的原核胞外分泌表达载体系统的有效性和通用性,并改造优化该系统。方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系统操纵子组织方式,将获得的RsaA系统元件编码序列和异源调控序列克隆至pQE30骨架质粒,构建新的胞外分泌表达质粒pQABP2S;以大肠杆菌为宿主菌诱导表达EspA及EspA-IL-24融合蛋白,并通过Westernblot检测目标蛋白在培养上清中的表达。结果:获得了新的胞外分泌表达载体pQABP2S;与对照相比,该载体宿主系统培养上清中目标蛋白EspA及EspA-IL-24的表达量明显增加。结论:在大肠杆菌中通过RsaA分泌系统可实现分子大小不同的EspA及EspA-IL-24融合蛋白的特异性分泌表达,进一步证实该分泌表达策略的有效性和通用性;调整调控序列以优化分泌系统的尝试,为此类基因工程技术平台的开发提供了借鉴。

关键词：新月柄杆菌 RsaA分泌系统大肠杆菌分泌蛋白A 白细胞介素-24 分泌表达表达载体大肠杆菌