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卵形鲳鲹分子标记的筛选与应用

卵形鲳鲹分子标记的筛选与应用

作者：孙立元上海海洋大学

学位级别：硕士

卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）具有生长速度快，食性简单，肉质鲜美，容易饲养等一系列优点，已经成为我国华南沿海地区一种重要的海水养殖品种。由于目前卵形鲳鲹未经过人工选育，在繁、育过程中随机挑取亲本可能导致近交衰退，因此... 详细信息

卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）具有生长速度快，食性简单，肉质鲜美，容易饲养等一系列优点，已经成为我国华南沿海地区一种重要的海水养殖品种。由于目前卵形鲳鲹未经过人工选育，在繁、育过程中随机挑取亲本可能导致近交衰退，因此急需评价卵形鲳鲹育种群体的遗传多样性水平和遗传结构，为在遗传选育中亲本选择和配对策略的制定提供参考依据。本研究采用FIASCO法构建了卵形鲳鲹微卫星（Microsatellite, SSR）富集文库，测序筛选到21个多态性微卫星位点，利用筛选的多态性微卫星位点评价了广东大亚湾和海南三亚两个育种群体遗传多样性水平和种群遗传结构，为育种群体亲本配对策略的制定提供了依据;测序获得了卵形鲳鲹线粒体基因组DNA，利用卵形鲳鲹线粒体基因组DNA序列与从GenBank数据库中下载的6种鲹科鱼类线粒体基因组DNA序列进行了系统发育关系的研究;由于从形态上很难区分卵形鲳鲹雌雄个体，给遗传育种过程中雌雄亲本的配对带来了很大的困难，为了建立雌雄个体的分子识别技术，本研究尝试利用AFLP和RAPD技术对卵形鲳鲹雌雄个体进行了全基因组扫描，以期筛选雌雄个体特异的分子标记。本研究取得的主要结果如下：(1)卵形鲳鲹微卫星标记的筛选使用“磁珠富集法”建立了卵形鲳鲹微卫星序列富集文库，筛选文库中的阳性克隆进行测序分析，共获得了约450个菌落的微卫星富集文库，得到320个阳性克隆，测序其中的219个克隆，有150个克隆（68.5﹪）含有重复次数≧5微卫星序列;利用这些序列共设计了137对微卫星引物，其中108对引物成功扩增出预期大小的片段，利用48个卵形鲳鲹个体评价这些微卫星位点的多态性，结果表明其中21个微卫星位点具有多态性，该群体的等位基因数Na为2-10，观测杂合度HO为0.083-0.792，平均为0.585，期望杂合度He为0.081-0.886，平均为0.589，多态性信息含量PIC为0.0767-0.8623;6个位点(TO33，TO47，TO67，TO80，TO132-1，TO145)明显偏离HEW（P <0.01）。(2)2个卵形鲳鲹育种群体遗传多样性比较分析利用筛选的21个微卫星位点中的11个多态性微卫星位点，对海南三亚和广东大亚湾2个育种群体进行了遗传多样性比较分析，研究结果表明广东大亚湾和海南三亚2个卵形鲳鲹育种群体的平均等位基因Na分别为5.0和3.6，平均有效等位基因Ne为2.965和2.244，观测杂合度Ho分别为0.292-0.814和0.207-0.840，期望杂合度He分别为0.307-0.813和0.189-0.761，海南三亚群体中多态信息含量PIC为0.014-0.719，平均为0.509，广东大亚湾群体的PIC为0.168-0.711，平均为0.436。海南三亚群体有5个位点偏离哈迪-温伯格平衡（P<0.05），广东大亚湾群体有2个位点偏离哈迪-温伯格平衡;2个群体间的遗传相似系数为0.561，遗传距离为0.578，遗传分化指数（Fst）为0.152。聚类分析和Structure软件分析显示海南三亚和广东大亚湾2个卵形鲳鲹群体各为一支，2个群体间具有较大的遗传分化，可作为2个育种群体管理，2个群体间进行杂交选育预期可获得较好的遗传进展。(3)卵形鲳鲹性别特异性分子标记的筛选利用AFLP和RAPD技术进行卵形鲳鲹雌雄个体的全基因组扫描，以期获得雌雄个体特异分子标记。利用64对AFLP引物组合，共扩增出2322个位点，其中18个引物组合（26.6％）产生可能与性别相关联的扩增，未筛选到雌雄个体特异的分子标记;利用238条RAPD引物筛选雌雄特异的分子标记，共有26个随机引物产生可能与性别相关联的标记，也未筛选到卵形鲳鲹雌雄个体特异性的DNA标记。(4)卵形鲳鲹线粒体全基因组克隆及鲹科鱼类发育关系分析根据鲹科鱼类线粒体序列同源性设计10组引物，经PCR扩增和测序分析，获得了卵形鲳鲹线粒体基因组DNA序列，线粒体基因组的大小为16564bp，其中包含13个蛋白编码基因，2个核糖体RNA基因（12SrRNA和16SrRNA），22个转运RNA基因以及一个D-loop区域，绝大部分基因为重链，只有NADH脱氢酶亚基6（ND6）和8种tRNA（Gln，Ala， Asn，Cys，Try，Glu，Pro， Ser）以轻链形式编码蛋白，与另外一个发表于NCBI的序列（KF356397）相比，两个序列的同源性为99﹪，只有在16SrRNA和Control region区域有较大的差异，分别占0.17％和1.7％，由于具有较大的序列差异，这2个基因能够为后期卵形鲳鲹种群结构的研究提供理论参考;应用邻接法，对卵形鲳鲹线粒体基因组DNA序列与6种鲹科鱼线

关键词：卵形鲳鲹鲹科遗传多样性分子标记群体遗传育种线粒体DNA 系统发育

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信用卡消费者的权益保护问题研究

信用卡消费者的权益保护问题研究

作者：孙立元华东政法大学

学位级别：硕士

信用交易是市场经济高度发达的必然产物和内在要求。信用卡作为信用交易的电子化载体,是现代货币体系的重要延伸。信用卡给广大消费者带来了购物支付和个人融资消费的极大便利,促进了商家的支付结算和销售,同时给发卡银行带来了巨大的... 详细信息

信用交易是市场经济高度发达的必然产物和内在要求。信用卡作为信用交易的电子化载体,是现代货币体系的重要延伸。信用卡给广大消费者带来了购物支付和个人融资消费的极大便利,促进了商家的支付结算和销售,同时给发卡银行带来了巨大的业务和利润,所以一直保持着快速发展的势头,遍及社会的每个角落,成为人们日常生活的不可或缺的一部分。信用卡市场竞争日趋白热化,然而信用卡消费者的权益被侵害的事件屡屡发生,例如信用卡消费者的隐私权得不到充分的尊重;信用卡消费者的知情权得不到充分的实现,发卡银行未进信息披露义务,导致持卡人经济上的损失;信用卡被冒用,使得信用卡的安全性受到质疑等。信用卡消费者在经济实力强大的发卡银行、特约商户面前处于弱势地位。如若没有消费者权益的充分保护,信用卡产业将不能得到充分的长远发展,在消费信贷蓬勃发展的今天,对于信用卡当事人将是一个“均输”的格局。基于信用卡消费者权利的保护,本文从以下四个部分加以阐述和论证:第一部分:首先对信用的内涵进行界定,分析消费信用的作用。然后通过对信用卡概念的分析,得出信用卡的基础是信用,是消费信用的一种形式。通过对信用卡交易流程的梳理,得出信用卡交易的法律关系主体。第二部分:重点分析信用卡持卡人与发卡银行、发卡银行与特约商户、持卡人与特约商户、发卡银行与收单银行间的法律关系。由于信用卡实践和理论的发展不足,它们之间法律关系的定性存在较多的理论争议。其法律关系的定性决定了主体间的权利义务分配。第三部分:首先分析信用卡消费者是否具有消费者法律地位。信用卡消费者是特殊消费者,他既具有普通消费者的特征,又是银行卡消费者、信用消费者。然后分析信用卡消费者作为普通消费者、银行卡消费者、信用消费者分别具有的权利。第四部分:这部分是文章的重点,分析了信用卡消费者极易被侵犯的四种情形:隐私权、知情权、抗辩权被侵犯、信用卡冒用。首先介绍信用卡消费者在这四方面权益受侵犯的具体情况,分析我国法律、行政法规在这四方面的规定及不足之处,然后介绍外国在这方面的先进法律经验,进行对比,提出我国信用卡法律完善的建议。

关键词：信用卡消费者法律关系权利保护

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筑坝对河流鱼类空间分布影响的水声学研究

筑坝对河流鱼类空间分布影响的水声学研究

作者：孙立元华中农业大学

学位级别：硕士

长江上游大规模水电开发给渔业资源造成了深远的影响。其中,向家坝是金沙江梯级水电开发的最末阶梯,而梯级水电工程对生态环境的影响是巨大的;三峡大坝是世界上最大规模的水电工程,该工程对鱼类的影响一直受到人们的关注。本文采用裂波... 详细信息

长江上游大规模水电开发给渔业资源造成了深远的影响。其中,向家坝是金沙江梯级水电开发的最末阶梯,而梯级水电工程对生态环境的影响是巨大的;三峡大坝是世界上最大规模的水电工程,该工程对鱼类的影响一直受到人们的关注。本文采用裂波式鱼探仪BioSonics DT-X分别于2006～2012年枯水期、2012年秋季向家坝蓄水期间对向家坝下游江段以及2010年秋季对三峡库区进行了水声学探测,探讨了向家坝至宜宾江段(44km)在枯水期的鱼类空间分布特征及其与非生物环境因素之间的关系,同期进行了渔获物调查用于数据比较;分析了向家坝至三江河口江段(35km)在向家坝第一次蓄水过程中鱼类的分布及其变化特征;并对三峡水库达到175m蓄水高程时泄滩乡至库首江段(45km)的鱼类空间分布特征和资源量进行了研究和评估。主要结果如下： (1)向家坝至宜宾江段获得的渔获物种类总计20种,其中黄颡鱼、圆口铜鱼、铜鱼是主要的优势种。渔获物平均体长为21.4cm,83.53%的鱼类体长集中在10.0～30.0cm。水声学探测目标(Max.(TSc)≥-45dB)的平均强度为-42.32±5.02dB,推算体长平均值为22.7cm。向家坝至宜宾江段枯水期鱼类呈现聚集分布的特征,主要分布在横江河口(rkm1070.12)、岷江河口(rkm1041.80)至南广河口(rkm1037.38)的河口江段以及打铁窝(rkm1050.64)、李家沱(rkm1030)两处深水区,其中岷江口至南广河河口江段鱼类数量较多并集中分布,占研究江段鱼类总数量的43.56%。向家坝至宜宾江段水深范围在3.40～39.23m,鱼类分布在水深较大的位置(平均值为17.16m),四个鱼类集中分布区域的水深显著大于其他调查水域(平均值为9.94m;P<0.01)。调查江段的最小流速为0.14m/s,最大流速达3.77m/s,平均值为1.39m/s,而鱼类对流速选择的范围在0.82～1.59m/s。四个鱼类集中分布区域流速(平均值为1.11m/s)显著小于其他调查水域(平均值为1.67m/s;P<0.01)。该调查江段的弗劳德数(Fr)均小于1,其最大值为0.51。鱼类集中分布江段的弗劳德数小于其他调查江段,范围在0.07～0.13,四个鱼类集中分布江段的弗劳德数(平均值为0.09)小于其他调查水域(平均值为0.19;P<0.01),说明该研究江段的鱼类偏好分布于缓流区域。 (2)2012年10月10～16日向家坝蓄水期间,向家坝至宜宾江段的水文情势变化明显。蓄水造成向家坝坝下水位从274.0m下降至268.5m,含沙量从蓄水之前的0.55～1.0kg/m3增至2.17kg/m3,蓄水后含沙量降为0.01～0.08kg/m3,透明度从蓄水前的小于30cm到蓄水后的大于100cm。向家坝蓄水前、蓄水第1～2d、蓄水第5d、蓄水结束后第2d、蓄水后第7d下游江段鱼类密度分别为0.30ind/km3、1.05ind/km3、0.10ind/km3、0.03ind/km3、0.08ind/km3。这一过程中的鱼类空间分布发生如下变化：蓄水前鱼类在整个调查江段均有所分布,并在横河口和打铁窝附近两处江段鱼类分布较为集中;在蓄水的第1～2d鱼类的空间分布发生急剧变化,横江河口鱼类减少,向家坝至宜宾县鱼类分布变化不大,但宜宾县下游至三江河口整个江段鱼类分布密度明显大于蓄水前,尤其是打铁窝“U”型江段分布密度最高(2.79ind/km3)。蓄水第5d鱼类减少,在横江河口以及宜宾县下游有少量分布。蓄水后第2d整个江段鱼类分布进一步减少,仅在打铁窝附近有零星分布。蓄水后第7d,调查江段鱼类密度有所增加,在打铁窝下游又开始聚集。 (3)三峡水库泄滩乡至坝首江段水声学调查共获得8692ind鱼类信号。TS值主要分布范围为-70～-50dB(89.62%),平均目标强度为-58.33dB。根据Foote (1987)公式(TS=20log10L—71.9)对鱼类的目标信号强度进行体长推算,库首鱼类体长<10cm的占84.71%,大于100cm占0.49%。调查水域鱼类最大密度为1360ind/km3,平均密度为53.47ind/km3。水平分布存在差异,鱼类在香溪河口、银杏沱浅水区、三峡大坝坝前库湾附近鱼类较为密集。香溪河口是调查江段的重要支流,银杏沱鱼类聚集区与其他调查江段水深具有极显著性差异(F=7.05,Sig.=0.008<0.01)。香溪河口、银杏沱附近江段、大坝坝首鱼类平均密度分别为72.83ind/km3、135.75ind/km3、65.26ind/km3。三峡库首江段鱼类分布最为集中的水层为30～60m(41.63%),其次为2～30m(27.73%),再次为60～90m(21.74%),本次探测发现90m以下的

关键词：向家坝三峡库首空间分布环境因素蓄水

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河北树木志

1997年

作者：孙立元任宪威

本书内容有绪论，分科检索表，树种各论，分属、分种检索表、科、属、种的形态特征，每种有文献引证、分布、生态习性、繁殖方法和用途，并附有插图；书末附有“河北珍稀濒危树种名录”、“河北新分类群、新组合和新记录树种名录”、“... 详细信息

ISBN: (纸本)7503818379

本书内容有绪论，分科检索表，树种各论，分属、分种检索表、科、属、种的形态特征，每种有文献引证、分布、生态习性、繁殖方法和用途，并附有插图；书末附有“河北珍稀濒危树种名录”、“河北新分类群、新组合和新记录树种名录”、“河北习见落叶树木冬态检索表”、“中文名索引”和“拉丁学名索引”。

关键词：木本植物植物志中国河北

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伊曲康唑治疗体股癣两种疗程的比较观察

临床皮肤科杂志 2000年第4期29卷 224-225页

作者：张红褚小玲孙立元首都医科大学附属北京安贞医院皮肤科北京100029

比较用斯皮仁诺两种不同疗程治疗40例体、股癣的疗效，结果显示7日组(200mgq.d.服7日)与14日组(200mgq.d.服14日)的疗效无统计学的差异。

关键词：伊曲康唑体股癣药物疗法疗程

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河北蔷薇科植物小志

植物研究 1991年第1期11卷 25-27页

作者：黄金祥冯天杰孙立元河北林学院河北农业大学

本文发表了蔷薇科1新种,即光萼山楂Crataegus laevicalyx ***,*** et ***,2河北新分布记录种,即光叶山楂Crataegus dahurica Koehne ex Schneid.,麦李Prunus glandulosa Thu-nb。

关键词：蔷薇科河北

急性泌尿生殖道症状患者支原体感染及抗生素的选择

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中国皮肤性病学杂志 2003年第2期17卷 115-116页

作者：褚小玲孙立元朱英杨莲北京安贞医院皮肤科北京100029

目的　了解以泌尿生殖道症状为主诉的就诊患者解脲支原体 (UU )、人型支原体 (MH )感染情况及耐药性。方法　对 2 67例未经治疗患者进行支原体培养及药敏试验 ,以聚类分析法处理数据。结果　支原体总分离率43 .1% ,UU、MH感染及混合感... 详细信息

目的　了解以泌尿生殖道症状为主诉的就诊患者解脲支原体 (UU )、人型支原体 (MH )感染情况及耐药性。方法　对 2 67例未经治疗患者进行支原体培养及药敏试验 ,以聚类分析法处理数据。结果　支原体总分离率43 .1% ,UU、MH感染及混合感染者分别为 40 .4%、15 .0 %和 12 .4%。敏感性最好的药物是强力霉素 ,耐药最多的是壮观霉素。结论　支原体感染以UU为主 ,MH感染逐渐增多。治疗药物首选强力霉素和美满霉素。

关键词：急性泌尿生殖道症状支原体感染抗生素药敏试验治疗

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中国经济树木原色图鉴 1

TPPA阳性“冠心病”患者梅毒血清试验与超声心动图研究

2000年

作者：纪殿荣孙立元刘传照

a主要收载了我国北方地区有经济价值和常见的野生及引种栽培种、变种、变型和栽培变种.我们除以全新的视角,精美的图片,直观、形象、生动、逼真地表现每个树种的景观、数形、树皮等部位及生态景观外,还对每个树种的中文名、拉丁文名,以... 详细信息

ISBN: (纸本)7810761137

a主要收载了我国北方地区有经济价值和常见的野生及引种栽培种、变种、变型和栽培变种.我们除以全新的视角,精美的图片,直观、形象、生动、逼真地表现每个树种的景观、数形、树皮等部位及生态景观外,还对每个树种的中文名、拉丁文名,以及形态特征、分布、生活习性和主要用途等进行了扼要的描述。

关键词：经济林木本植物中国图谱

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中国皮肤性病学杂志 2006年第3期20卷 144-146页

作者：褚小玲孙立元朱英杨莲北京安贞医院皮肤科北京100029

目的分析近2年来TPPA阳性的“冠心病”患者的梅毒血清试验、心脏彩超和胸片资料,为这类患者在诊断心血管梅毒上提供思路和方法。方法对以“冠心病”相关诊断入院的心内、心外科及急诊抢救中心的TPPA阳性患者进行梅毒血清复检,并对患者... 详细信息

目的分析近2年来TPPA阳性的“冠心病”患者的梅毒血清试验、心脏彩超和胸片资料,为这类患者在诊断心血管梅毒上提供思路和方法。方法对以“冠心病”相关诊断入院的心内、心外科及急诊抢救中心的TPPA阳性患者进行梅毒血清复检,并对患者进行了心脏彩超检查。结果132例TPPA阳性患者,RPR、TPHA阳性者分别47(35.61%)例,130(98.49%)例。心脏彩超检查,132例主动脉(AA)根径(32.2±4.2)mm,65例升主动脉(Aao)内径(37.9±5.1)mm,均大于正常值,并且AA根径平均值与TPPA阴性冠心病患者相比有统计学差异;主动脉瓣钙化49(37.13%)例,主动脉瓣返流52(39.40%)例,较老年性AV退行性变差异有显著性。胸片示:主动脉增宽86.61%(97/112),主动脉钙化41.08%(46/112)。RPR阳性/阴性患者的AA根径、Aao内径差异无统计学意义;但主动脉瓣钙化及返流有统计学差异。结论对不能提供相关病史的TPPA、TPHA同时阳性患者,应考虑患者既往感染过梅毒螺旋体。即使RPR阴性,且未见其他阳性体征,仅AA及Aao稍大及主动脉瓣钙化、主动脉瓣返流的冠心病患者,也应对可能潜在的梅毒性损害给予重视,并在合适时机实施规范化治疗及复查。

关键词：晚期梅毒诊断超声心动图