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小鼠胎肝间充质细胞和Sca-1～+细胞体内外向肌样细胞分化的实验研究

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小鼠胎肝间充质细胞和Sca-1～+细胞体内外向肌样细胞分化的实验研...

作者：姜铧暨南大学

学位级别：硕士

目的:探讨小鼠胎肝间充质和Sca-1细胞在体内外向肌样细胞分化的潜能。方法:体外无菌条件下获取胎龄14.5d的小鼠胎肝,制成单细胞悬液,贴壁培养并传代,第三代传代细胞用10μmol/15-氮胞苷与1mg/1二性霉素B诱导24h,诱导处理后置于完... 详细信息

目的:探讨小鼠胎肝间充质和Sca-1细胞在体内外向肌样细胞分化的潜能。方法:体外无菌条件下获取胎龄14.5d的小鼠胎肝,制成单细胞悬液,贴壁培养并传代,第三代传代细胞用10μmol/15-氮胞苷与1mg/1二性霉素B诱导24h,诱导处理后置于完全培养基中继续培养,不同时间点用半定量RT-PCR法检测骨骼肌细胞相关基因Myf5,Myogenin的mRNA表达情况,培养后7d和14d,用免疫细胞化学鉴定骨骼肌细胞特异性抗原Desmin、α-Actin的表达情况。体内实验按8μg/g体重将Cardiotoxin局部注射入左侧股四头肌,造成雌鼠骨骼肌损伤模型,24h后将纯化的雄性胎肝间充质细胞按1×10/只小鼠注射至股四头肌,无菌环境下饲养2月后,处死小鼠,制备受体小鼠骨骼肌组织切片,用免疫组织化学染色对骨骼肌细胞进行特异性标记,再进一步用荧光标记的Y染色体探针进行荧光原位杂交(FISH)检测雌性受体小鼠骨骼肌组织内供体小鼠胎肝间充质细胞向骨骼肌细胞分化情况。性别鉴定为雄性的胎肝单细胞悬液经MASC分离得到Sca-1细胞,2×10个Sca-1细胞经尾静脉移植进10Gy照射的同系雌鼠体内,2月后处死小鼠,制备受体小鼠骨骼肌、心肌组织切片,用免疫组织化学染色分别对骨骼肌细胞、心肌进行特异性标记,再进一步用荧光标记的Y染色体探针进行荧光原位杂交(FISH),检测雌性受体小鼠骨骼肌组织、心肌组织内供体小鼠胎肝Sca-1细胞分别向骨骼肌和心肌细胞的分化情况。结果:第三代胎肝间充质细胞经5-氮胞苷与二性霉素B诱导处理后,细胞形态改变出现骨骼肌样细胞。半定量RT-PCR结果显示诱导分化后的骨骼肌细胞相关基因Myf5,Myogenin的mRNA随时间序贯表达。免疫细胞化学显示诱导分化后的细胞有骨骼肌特异性蛋白如Desmin、α-Actin的表达,且随培养时间的延长阳性率升高,未诱导组的细胞形态未发生明显变化,骨骼肌特异性蛋白表达阴性。胎肝间充质细胞体内局部注射后2月,在骨骼肌组织内发现存在Y染色体阳性的供体来源的细胞,同时免疫组织化学鉴定呈现骨骼肌组织的部分特征。胎肝Sca-1细胞体内移植后2月,在骨骼肌、心

关键词：胎肝 Sca-1+细胞间充质细胞骨骼肌细胞心肌细胞骨骼肌损伤分化

小鼠胎肝间充质干细胞体内向骨骼肌样细胞分化的研究

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2006年第2期27卷 164-171页

作者：姜铧张洹暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632

目的:了解小鼠胎肝间充质干细胞在体内向骨骼肌细胞分化的潜能。方法:无菌条件下将C57BL/6 J胎鼠肝脏制成单细胞悬液,雄性胎肝悬液体外贴壁培养纯化,传3代后将贴壁细胞移植于心肌毒素(card iotoxin)造成的雌鼠骨骼肌损伤部位,2月后处死... 详细信息

目的:了解小鼠胎肝间充质干细胞在体内向骨骼肌细胞分化的潜能。方法:无菌条件下将C57BL/6 J胎鼠肝脏制成单细胞悬液,雄性胎肝悬液体外贴壁培养纯化,传3代后将贴壁细胞移植于心肌毒素(card iotoxin)造成的雌鼠骨骼肌损伤部位,2月后处死受鼠,取相应骨骼肌组织固定、制片;用免疫组织化学染色和荧光原位杂交检测雌性受体小鼠骨骼肌组织内供体小鼠胎肝间充质干细胞向骨骼肌样细胞分化情况。结果:在骨骼肌组织内发现存在Y染色体阳性的供体来源的细胞,同时呈现骨骼肌组织的部分特征,表型为desm in+/F lt-1-/CD4-5/F4-/80。结论:胎肝中分离出的间充质干细胞在体内可以分化为骨骼肌样细胞。

关键词：胎肝间充质干细胞分化骨骼肌细胞

小鼠胎肝间质干细胞体外向肌样细胞分化的研究

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中国病理生理杂志 2006年第4期22卷 810-813页

作者：姜铧张洹暨南大学医学院血液病研究所

目的:了解小鼠胎肝间质干细胞在体外向肌样细胞分化的潜能。方法:无菌条件下从正常C57BL/6J胎鼠肝脏中分离出间质干细胞,体外培养传3代后用5-氮胞苷和二性霉素B诱导分化,观察胎肝间质干细胞诱导前后形态变化;用RT-PCR检测细胞诱导前后,... 详细信息

目的:了解小鼠胎肝间质干细胞在体外向肌样细胞分化的潜能。方法:无菌条件下从正常C57BL/6J胎鼠肝脏中分离出间质干细胞,体外培养传3代后用5-氮胞苷和二性霉素B诱导分化,观察胎肝间质干细胞诱导前后形态变化;用RT-PCR检测细胞诱导前后,成肌调控基因Myf5和成肌素myogenin的表达情况;诱导后7d和14d行免疫细胞化学染色鉴定诱导后细胞结蛋白和α-肌动蛋白的表达。结果:RT-PCR显示诱导后6h至72h成肌调控基因Myf5和myogenin序贯表达,而诱导前的细胞则没有检测到表达;免疫细胞化学染色提示第7d细胞结蛋白和α-肌动蛋白表达阳性,第14d阳性率明显升高。结论:胎肝中分离出的间质干细胞在体外可以定向诱导分化为肌样细胞。

关键词：胎儿肝脏间质干细胞骨骼肌细胞细胞分化

急性肾衰竭与胎肝Sca-1^+细胞向肾脏细胞的分化

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中国病理生理杂志 2006年第3期22卷 421-426页

作者：廖继东张洹姜铧暨南大学医学院血液病学研究所广东广州510632

目的:研究急性肾衰竭(ARF)对胎肝Sca-1+细胞向肾组织细胞分化频率的影响。方法:用磁性细胞分选(MACS)和PCR技术分离、鉴定小鼠雄性胎肝Sca-1+细胞;将2×104的雄性胎肝Sca-1+细胞输注给致死量射线照射([60Co],8Gy)的同系雌性小鼠体内;8周... 详细信息

目的:研究急性肾衰竭(ARF)对胎肝Sca-1+细胞向肾组织细胞分化频率的影响。方法:用磁性细胞分选(MACS)和PCR技术分离、鉴定小鼠雄性胎肝Sca-1+细胞;将2×104的雄性胎肝Sca-1+细胞输注给致死量射线照射([60Co],8Gy)的同系雌性小鼠体内;8周后,将受体小鼠随机分为A、B和C3组(A组:单纯辐射;B组:ARF和C组:ARF-Sca-1+),用50%(V/V)的甘油(11.6mL/kg)诱导B组和C组小鼠产生ARF;72h后,将新制备的2×104的雄性胎肝Sca-1+细胞输注给C组小鼠。8周后处死全部实验小鼠,取肾脏固定制片;用Y染色体探针进行荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,FISH),显微观察、摄像并用专业软件进行图像分析和数据处理。结果:在单纯辐射、ARF和ARF-Sca-1+3种模型小鼠的肾小管上皮、间质、肾小球和肾小球边缘等部位,均发现含Y染色体的细胞;在ARF和ARF-Sca-1+小鼠的肾组织切片中,分别发现成对和成环状排列的含Y染色体的细胞,有组成部分肾小管的趋势;胎肝Sca-1+细胞在单纯辐射、ARF和ARF-Sca-1+3种模型小鼠的肾组织切片中的分化频率分别为(1.65±0.18)%、(8.58±1.34)%和(18.13±1.91)%,后者与前者比较,差别有显著意义(P<0.01),显示分化频率伴随肾组织的损伤和再生而增加。结论:急性肾组织损伤和自然再生的生理微环境有助于促进胎肝Sca-1+细胞向肾组织细胞的分化。

关键词： Sca—1^+细胞胎儿肝肾功能衰竭,急性小鼠

组织辐射损伤与胎肝Sca-1阳性细胞的移植后分布

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中国病理生理杂志 2008年第3期24卷 577-581页

作者：廖继东张洹姜铧暨南大学医学院血液病学研究所广东广州510632

目的:探讨在同种异体造血重建中组织辐射损伤与胎肝Sca-1+细胞及其子代细胞移植后在不同组织器官分布差异的联系。方法:用快速PCR和免疫磁珠分选技术鉴定并分离14.5 d雄性胚胎小鼠肝脏Sca-1+细胞;将分离的Sca-1+细胞(2×104细胞/只)通... 详细信息

目的:探讨在同种异体造血重建中组织辐射损伤与胎肝Sca-1+细胞及其子代细胞移植后在不同组织器官分布差异的联系。方法:用快速PCR和免疫磁珠分选技术鉴定并分离14.5 d雄性胚胎小鼠肝脏Sca-1+细胞;将分离的Sca-1+细胞(2×104细胞/只)通过尾静脉输入到受[Co60]致死剂量(8Gy只/)照射的同系成年雌性小鼠体内,重建受体小鼠的造血功能;在输入细胞6个月后,处死受体小鼠,取出肾、肝、肺、胃和小肠组织固定制片;用Y染色体探针进行荧光原位杂交、荧光显微图像系统观察、摄像和分析。结果:输入2×104细胞/只的雄性胎肝Sca-1+细胞可完全重建经致死剂量照射雌性小鼠的造血功能;造血重建半年后,在受体小鼠的肾、肝、肺、胃和小肠等多个器官组织内可检出含Y染色体的细胞,显微图像计数各器官组织切片中含Y染色体细胞率分别为:肾脏(1.65±0.18)%、肝脏(0.90±0.10)%、肺(1.90±0.60)%、胃(6.10±0.50)%和小肠(7.61±2.30)%。各组织中含Y染色体细胞的检出率呈小肠>胃>肺>肾>肝的趋势,结合资料分析显示与各组织对辐射的敏感性强弱及组织细胞更新率大小基本一致。结论:胎肝Sca-1+细胞向各组织细胞的分化与组织器官受损程度可能存在一定的联系。

关键词：胎儿肝 Sca-1^+细胞造血重建辐射损伤移植小鼠

小鼠胎肝Sca-1^+细胞分化为心肌细胞的研究

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第二军医大学学报 2005年第4期26卷 371-375页

作者：姜铧张洹廖继东暨南大学医学院血液病研究所广州510632

目的:探讨小鼠胎肝组织中干细胞抗原1阳性的细胞(Sca 1+细胞)向心肌细胞分化的潜能。方法:取妊娠14.5 d的小鼠胎肝,制作细胞悬液,用单克隆免疫磁珠细胞分离技术分离Sca 1+细胞,PCR鉴别Y染色体性别决定区域(Sry)基因序列;将2×103 个雄... 详细信息

目的:探讨小鼠胎肝组织中干细胞抗原1阳性的细胞(Sca 1+细胞)向心肌细胞分化的潜能。方法:取妊娠14.5 d的小鼠胎肝,制作细胞悬液,用单克隆免疫磁珠细胞分离技术分离Sca 1+细胞,PCR鉴别Y染色体性别决定区域(Sry)基因序列;将2×103 个雄性小鼠Sca 1+细胞输注给经致死剂量60Co(10 Gy)全身照射的雌性小鼠体内,于移植后2个月,处死受体小鼠,取心肌组织固定、制片,免疫组织化学染色和荧光原位杂交检测雌性受体小鼠心肌组织内供体小鼠胎肝Sca 1+细胞向心肌细胞分化的情况。结果:在受体小鼠心肌组织内发现存在Y染色体阳性的供体来源的细胞,呈现心肌组织的部分特征,表型为Desmin+/Flt 1-/CD45-/F-4/80。结论:小鼠胎肝Sca 1+细胞(其中绝大部分是造血干细胞)具有向心肌组织细胞分化的潜能。

关键词：胎肝 Sca-1^+细胞细胞分化心肌组织

小鼠胎肝Sca-1^+细胞分化为骨骼肌细胞

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基础医学与临床 2004年第6期24卷 672-676页

作者：姜铧张洹廖继东暨南大学医学院血液病研究所广州510632

探讨小鼠胚胎肝组织中干细胞抗原 1阳性的细胞 (Sca 1+ 细胞 )向骨骼肌细胞分化的潜能。取 14 5d的小鼠胎肝 ,制作细胞悬液 ;用单克隆免疫磁珠细胞分离技术分离Sca 1+ 细胞 ;用PCR鉴别Y染色体性别决定区域 (SRY)基因序列 ;将 2× 10 3... 详细信息

探讨小鼠胚胎肝组织中干细胞抗原 1阳性的细胞 (Sca 1+ 细胞 )向骨骼肌细胞分化的潜能。取 14 5d的小鼠胎肝 ,制作细胞悬液 ;用单克隆免疫磁珠细胞分离技术分离Sca 1+ 细胞 ;用PCR鉴别Y染色体性别决定区域 (SRY)基因序列 ;将 2× 10 3 个雄性小鼠Sca 1+ 细胞输注给经致死剂量 (10Gy) 60 钴全身照射的雌性小鼠体内 ;于移植后 2个月 ,处死受体小鼠 ,取骨骼肌组织固定、制片 ;用免疫组织化学染色和荧光原位杂交检测雌性受体小鼠骨骼肌组织内供体小鼠胎肝Sca 1+ 细胞向骨骼肌细胞分化情况。结果在骨骼肌组织内发现存在Y染色体阳性的供体来源的细胞 ,同时呈现骨骼肌组织的部分特征 ,表型为Dystrophin+ /Flt 1-/CD4 5 -F4 / 80 -。提示小鼠胎肝Sca 1+ 细胞 (其中绝大部分是造血干细胞 )具有向骨骼肌组织细胞分化的潜能。

关键词： Sca-1^+细胞胎肝骨骼肌组织小鼠骨骼肌细胞分化阳性 Y染色体雌性性别决定

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急性白血病院内下呼吸道感染临床分析

医师进修杂志 2002年第5期25卷 19-21页

作者：章正华姜铧等十堰市太和医院血液科，湖北十堰442000

目的探讨急性白血病院内下呼吸道感染的发病情况，危险因素及病原学特点。方法对1990-1999年10月的372例急性白血病住院患者进行回顾性调查。分析总结。结果急性白血病院内下呼吸道感染发病率为15.6%。病死率48.3%。白细胞下降，年... 详细信息

目的探讨急性白血病院内下呼吸道感染的发病情况，危险因素及病原学特点。方法对1990-1999年10月的372例急性白血病住院患者进行回顾性调查。分析总结。结果急性白血病院内下呼吸道感染发病率为15.6%。病死率48.3%。白细胞下降，年龄、激素、化疗、广谱抗生素的使用及住院时间长是院内下呼吸道感染的主要危险因素。铜绿假单胞菌，大肠杆菌，克雷伯菌属及真菌是主要致病菌，亚胺培南，头孢他啶，阿米卡星及环丙沙星对革兰阴性杆菌有较强的抗菌活性，但近两年大肠杆菌和克雷伯菌对阿米卡星及环丙沙星抗药性增加。结论对白细胞小于1.5×10^9/L的病人进行保护性隔离并合理使用抗生素治疗是必要的措施。

关键词：急性白血病下呼吸道感染临床分析院内感染

间质干细胞来源、鉴定、可塑性和应用前景(综述)

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2004年第4期25卷 468-473页

作者：姜铧张洹暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632

间质干细胞 (MSCs)存在于骨髓、肌肉、骨、软骨等部位 ,可分化为中胚层的细胞 ,如成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞等 ,亦可分化为内胚层、外胚层的细胞 ,如神经细胞、肝脏细胞、肾脏细胞等 ,同时由于来源广、易于分离扩增和基因转染 ... 详细信息

间质干细胞 (MSCs)存在于骨髓、肌肉、骨、软骨等部位 ,可分化为中胚层的细胞 ,如成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞等 ,亦可分化为内胚层、外胚层的细胞 ,如神经细胞、肝脏细胞、肾脏细胞等 ,同时由于来源广、易于分离扩增和基因转染 ,在临床、科研上有很大的潜在应用价值。

关键词：间质干细胞细胞分化细胞可塑性