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乙型脑炎病毒部分NS1基因假病毒的构建

中国人兽共患病学报 2024年第3期40卷 231-235,242页

作者：龙彩韵王瑞晨姚晓慧武婕慧付士红李樊殷启凯崔倩倩许松涛聂凯王环宇安徽理工大学医学院淮南232001 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的构建耐核酸酶的含乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)部分非结构蛋白1(Non-structural protein 1,NS1)基因的假病毒,为JEV的实验室核酸检测提供质控品,提高检测质量。方法将JEV部分NS1基因、蚊18S RNA基因和人GAPDH基... 详细信息

目的构建耐核酸酶的含乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)部分非结构蛋白1(Non-structural protein 1,NS1)基因的假病毒,为JEV的实验室核酸检测提供质控品,提高检测质量。方法将JEV部分NS1基因、蚊18S RNA基因和人GAPDH基因片段次序连接克隆到该质粒上,构建重组载体pET-MS2-JEV;转化大肠杆菌后表达纯化假病毒,并对其进行耐受性和稳定性评估。结果构建了重组载体pET-MS2-JEV,表达获得的假病毒具有耐核酸酶、耐物理化学因子的特性,可在4℃和-20℃条件下稳定保存。结论本研究获得了稳定性好的含JEV部分NS1基因的假病毒,可作为JEV实验室核酸检测的质控品。

关键词：乙型脑炎病毒 MS2噬菌体假病毒

我国动物源细菌中SXT/R391整合性接合元件的流行调查

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中国动物传染病学报 2024年

作者：马思原姚晓慧金耀忠马永国李琳李宗杰魏建超刘珂邵东华邱亚峰马志永李蓓蓓中国农业科学院上海兽医研究所上海市浦东新区畜牧水产技术推广中心甘肃省定西市安定区动物疫病预防控制中心

本研究旨在调查SXT/R391整合性接合元件在我国养殖动物源细菌中的流行状况及其主要宿主菌的耐药性特征。收集了我国21个省市自治区的猪源、鸡源和牛源粪便样本，总计1166份。提取粪便样本总DNA，利用PCR检测SXT/R391元件的特异性整合酶... 详细信息

本研究旨在调查SXT/R391整合性接合元件在我国养殖动物源细菌中的流行状况及其主要宿主菌的耐药性特征。收集了我国21个省市自治区的猪源、鸡源和牛源粪便样本，总计1166份。提取粪便样本总DNA，利用PCR检测SXT/R391元件的特异性整合酶基因，对该元件流行状况进行调查。选取阳性样本分离鉴定携带SXT/R391元件细菌，阐明其宿主菌菌属分布。利用琼脂稀释法测定携带SXT/R391元件的变形杆菌对9种抗菌药物的最小抑菌浓度（Minimum inhibitory concentrations，MICs），测试药物包括：氨苄西林、四环素、替加环素、环丙沙星、头孢西丁、美罗培南、庆大霉素、恩诺沙星和氟苯尼考。研究结果表明，SXT/R391元件在我国动物源细菌中的流行率总体达44.3%，其中猪源为50.4%（429/852），鸡源为33.6%（85/253）、牛源为4.9%（3/61）。对携带SXT/R391元件细菌的分离鉴定结果表明，携带该元件的主要为奇异变形杆菌（32.5%，118/363）和普通变形杆菌（31.4%，114/363），且在大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、解鸟氨酸拉乌尔菌、幼虫普罗威登斯菌、彭氏变形杆菌、摩根摩根菌和蜂房哈夫尼亚菌等细菌中均有发现。对携带SXT/R391元件的奇异变形杆菌和普通变形杆菌的药物敏感测试结果表明，对四环素、环丙沙星、庆大霉素、氟苯尼考等耐药率极高（＞60%），未发现美罗培南和替加环素耐药菌株。SXT/R391元件作为一个耐药基因捕获的重要载体，在养殖动物源细菌中的广泛流行表明其在动物源耐药性传播扩散中可能起到了重要作用，值得进一步的关注和研究。

关键词： SXT/R391 整合性接合元件动物源

不同基因型别乙型脑炎病毒在不同细胞系上的生长特点比较

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第1期38卷 15-20页

作者：张维嘉刘升辉姚晓慧郑宇珂武婕慧王瑞晨付士红殷启凯李樊聂凯崔倩倩许松涛王环宇中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、传染病溯源预警和智能决策全国重点实验室北京102206 中国疾病预防控制中心北京102206

目的研究不同基因型别乙型脑炎病毒在不同细胞系上的生长特点, 为乙脑病毒的研究中细胞系的选择提供科学依据。方法选择BHK-21、Vero、C6/36、PK-15、DF-1、N2a、SH-sy5y和MDCK细胞系, 通过空斑测定法和RT-qPCR法评价基因1型(G1, NX1889... 详细信息

目的研究不同基因型别乙型脑炎病毒在不同细胞系上的生长特点, 为乙脑病毒的研究中细胞系的选择提供科学依据。方法选择BHK-21、Vero、C6/36、PK-15、DF-1、N2a、SH-sy5y和MDCK细胞系, 通过空斑测定法和RT-qPCR法评价基因1型(G1, NX1889株)、基因3型(G3, P3株)和基因5型(G5, XZ0934株)乙脑病毒在上述细胞系中的增殖能力。结果 3种基因型别乙脑病毒在BHK-21、Vero、C6/36、DF-1、N2a和PK-15细胞系中存在明显的细胞病变效应(CPE), 在同一种细胞系中引起CPE的特点并未观察到明显不同。病毒感染SH-sy5y和MDCK细胞系后没有明显的CPE出现, 但是在SH-sy5y细胞系中存在病毒的增殖, 而MDCK细胞系为非敏感细胞系。G1、G3和G5型乙脑病毒在BHK-21、Vero和SH-sy5y细胞系中的增殖曲线没有明显差异;在C6/36和PK-15细胞系中, G1型乙脑病毒的滴度高于其他两型乙脑病毒;在DF-1细胞系中, G5型高于其他两者, 在N2a细胞系中, G5型低于其他两者。结论 3种不同基因型别的乙脑病毒在不同细胞系中的增殖存在差异, 可为针对乙脑病毒不同方向的研究提供选择参考。

关键词：乙型脑炎病毒基因型别细胞系增殖特征

猪链球菌中携带optrA基因的新型整合性接合元件ICESsuDF712解析

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中国动物传染病学报 2024年

作者：聂万森宋强强姚晓慧徐卫兵李宗杰魏建超刘珂邵东华邱亚峰马志永李蓓蓓夏利宁上海市浦东新区大团镇经济发展服务中心中国农业科学院上海兽医研究所新疆农业大学动物医学院

在临床分离的猪链球菌中发现了一个新型的携带optrA基因整合性接合元件（Integrative and conjugative element，ICE），本研究对该ICE元件的遗传结构、转移能力及其携带的多重耐药基因进行解析。采用微量肉汤稀释法测定猪链球菌DF712... 详细信息

在临床分离的猪链球菌中发现了一个新型的携带optrA基因整合性接合元件（Integrative and conjugative element，ICE），本研究对该ICE元件的遗传结构、转移能力及其携带的多重耐药基因进行解析。采用微量肉汤稀释法测定猪链球菌DF712的最小抑菌浓度（Minimum inhibitory concentrations， MICs），利用PCR技术检测恶唑烷酮类耐药基因，通过Illumia二代测序平台获取DF712全基因组数据，采用生物信息学分析和PCR技术获取携带optrA基因的ICE元件完整核苷酸序列，利用反向PCR和接合转移试验探索新型ICE元件的转移能力。结果表明，猪链球菌DF712中的optrA基因定位于一个ICE元件，该ICE元件全长69，029 bp，插入rpIL与hpy基因之间，拥有ICESa2603家族的典型特征，但其遗传信息和结构特征具有独特性，因此将其命名为ICESsuDF712。除optrA基因外，ICESsuDF712还携带其它耐药基因，包括erm(B）、spw、tet(O)、aadE。optrA基因两端由重复序列IS1216E包围，形成一个典型的IS1216E-optrA-IS1216E转座子结构插入ICESsuDF712之中。反向PCR结果表明ICESsuDF712和IS1216E-optrA-IS1216E结构均可自我剪切并形成环状结构，提示二者均有潜在的转移能力，但接合转移未能成功。综上所述，ICE元件是optrA基因在猪链球菌中转移传播的重要载体，应持续关注并检测该基因在动物源细菌的流行状况和传播机制。

关键词：猪链球菌耐药性整合性接合元件 optrA基因

脂多糖生物探针法与传统培养法检测水中嗜肺军团菌的比较

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环境卫生学杂志 2024年第9期14卷 788-792页

作者：张雅婕林华周少磊田竞贾予平曹文婧何立伟姚晓慧刘晋源高斌张永沈凡北京市疾病预防控制中心北京100013 北京市房山区疾病预防控制中心北京市通州区疾病预防控制中心

目的比较脂多糖生物探针法和传统培养法(包括ISO 11731-2017法即“ISO法”、GB/T 18204.5-2013法即“国标法”)对水中嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)的检测能力。方法分别采用脂多糖生物探针法和传统培养法对58份加标水样(其中50... 详细信息

目的比较脂多糖生物探针法和传统培养法(包括ISO 11731-2017法即“ISO法”、GB/T 18204.5-2013法即“国标法”)对水中嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)的检测能力。方法分别采用脂多糖生物探针法和传统培养法对58份加标水样(其中50份为实际水样加标用于以上两类方法比对测试,8份为纯水加标用于脂多糖生物探针法的方法学性能测试)和50份实际水样进行检测,确定脂多糖生物探针法的检出限、准确度、精密度、特异性和灵敏度,并比较两类方法对50份实际水样加标前的定性结果和50份实际水样加标前后的定量结果。结果脂多糖生物探针法检出限为1.55 CFU/L,准确度为102.10%~139.29%,精密度为0.14%~1.78%,特异性为95.12%,灵敏度为88.89%。50份实际水样加标前脂多糖生物探针法和国标法两种方法(检出或未检出)的定性结果无统计学差异(P>0.05);50份实际水样加标前后脂多糖生物探针法定量结果的中位数(M)高于ISO法测定结果,差异具有统计学差异(P<0.001),两类方法测定结果存在相关(r=0.981)。脂多糖生物探针法检出限(1.55 CFU/L)低于ISO法的(15.74 CFU/L),检测时间(2 d)短于ISO法(10 d)。结论与传统培养法相比,脂多糖生物探针法耗时短,检测性能更优。

关键词：水嗜肺军团菌脂多糖生物探针法

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大卫·珀金斯的理解性教学思想透视

外国教育研究 2011年第1期38卷 13-17页

作者：姚晓慧中国人民大学附属中学北京100080

促进学生理解是实施素质教育、培养创新人才的关键所在。怎样促进学生理解一直是困扰教育者的一个难题。然而这一问题在国内的研究明显滞后,也未引起足够的重视。大卫.珀金斯的理解性教学思想是在"零点项目"中历经十多年的一些研究成果... 详细信息

促进学生理解是实施素质教育、培养创新人才的关键所在。怎样促进学生理解一直是困扰教育者的一个难题。然而这一问题在国内的研究明显滞后,也未引起足够的重视。大卫.珀金斯的理解性教学思想是在"零点项目"中历经十多年的一些研究成果基础上,对理解性教学的一些基本问题进行的系统的归理。"理解"就是能够展开各种各样关于主题特征的思维活动,学生应该被给予充分的机会参与到这些活动中去,使学习成为一种长期的以思考为中心的过程。在此过程中,教师要引导学生明确学科的基本结构,以强有力的讲述来支持学习,同时要留意发展性因素,设计持续的学习评估,并教会学生广泛地应用所学知识。

关键词：理解理解性教学表现形式

无锡市滨湖区中小学信息技术应用现状的调查分析

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中国教育信息化（高教职教） 2007年第1X期 33-36页

作者：姚晓慧江南大学教育学院

本文对无锡市滨湖区中小学教师应用信息技术情况进行了调查、统计,对结果进行了详细的分析,并在此基础上围绕师资培训和资源建设提出了相应的建议。

关键词：中小学教师信息技术师资培训资源建设

BMP-2通过p38MAPK信号通路抑制VEGF表达的研究

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BMP-2通过p38MAPK信号通路抑制VEGF表达的研究

作者：姚晓慧中国医科大学

学位级别：硕士

目的乳腺癌是女性最普遍的恶性肿瘤之一,在发达国家,它位于所有死亡原因的第二位。与前列腺癌相似,乳腺癌也有易发生骨转移的倾向。有研究表明,骨形成蛋白(BMP)在骨肿瘤的发病和转移中起重要作用,其中BMP-2作用尤其明显。肿瘤新生血管... 详细信息

目的乳腺癌是女性最普遍的恶性肿瘤之一,在发达国家,它位于所有死亡原因的第二位。与前列腺癌相似,乳腺癌也有易发生骨转移的倾向。有研究表明,骨形成蛋白(BMP)在骨肿瘤的发病和转移中起重要作用,其中BMP-2作用尤其明显。肿瘤新生血管的形成是肿瘤发生侵袭和转移的重要因素,许多血管生长因子在肿瘤中均有不同程度的表达。血管内皮生长因子(Vascular endothelial growthfactor,VEGF)是其中效力最强的因子之一,它可直接或间接地参与血管新生的每一个过程。p38MAPK是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,,MAPK)家族的重要成员,p38MAPK信号通路因以正性调节的方式参与肿瘤的侵袭转移过程而倍受关注。有研究表明,BMP-2可能在VEGF介导的血管生成机制中起重要作用,也有人报道p38MAPK信号传导通路可能调节VEGF上调。因此,本研究检测了p-p38,BMP-2及VEGF在乳腺癌组织中的表达情况,并进一步在体外研究p38MAPK通路与BMP-2的关系,为乳腺癌治疗提供相应的理论依据。材料与方法 1、材料 68例乳腺癌组织蜡块取自中国医科大学第一临床学院病理科,为2003年～2006年手术切除标本。依据WHO2003年所推荐的乳腺癌组织学分类标准进行分类,68例均为浸润性导管癌。人乳腺癌细胞系MDA-MB-435s、MCF-7及人正常乳腺细胞系10A购自中国协和医科大学细胞库。 2、主要试剂兔抗人BMP-2单克隆抗体、兔抗人VEGF多克隆抗体、鼠抗人p-p38单克驴固?#9216)购自Cell Signaling公司,辣根过氧化物酶标记的羊抗兔(IE-0031)、羊抗鼠(IE-0141)二抗、兔抗人β-actin多克隆抗体(PR-0255)、S-P超敏免疫组化试剂盒、DAB酶底物显色试剂盒、p-p38特异性抑制剂SB203580、BMP-2特异性抑制剂Nogin、Matrigel胶均自北京中山生物技术有限公司。 3、方法 (1)免疫组织化学步骤:(采用SP法)以PBS代替一抗设立空白对照,以已知乳腺癌阳性片作为阳性对照。结果判定:在双盲法下进行,BMP-2、VEGF以肿瘤细胞胞浆内出现黄色或棕黄色颗粒为阳性表达,p-p38以肿瘤细胞胞核内出现黄色或棕黄色颗粒为阳性表达。每张切片在光镜下随机选取5个视野,每个视野计数100个瘤细胞。着色强度分为无色(-)为0分,浅黄色(+)为1分,黄色及棕黄色(++)为2分。阳性细胞数分为＜10%为0分,10%-50%为1分,＞50%为2分。两项得分相乘结果≥2记为阳性。 (2)Western印迹法:RIPA buffer裂解液,超声处理,高速低温离心提取总蛋白,用Bradford法进行蛋白浓度测定。SDS-PAGE电泳,转印,封闭后加相应一抗、二抗及DAB显色,观察拍照,进行灰度值测定。 (3)Transwel法:步骤:用无血清1640以1:3稀释Matrigel,每上室加入Matrigel100微升,37度孵箱中放置了24小时。胰酶消化细胞,细胞计数后稀释至2.5×10cells/ml,取100微升加入上室中,下室加入600微升10%FBS 1640。5%CO37度中培养24小时。固定及染色,切片制作,显微镜下照相并进行细胞计数。 4、统计学分析采用SPSS10.0统计学软件,进行x检验和t检验,确定p＜0.05有统计学意义。结果 1、BMP-2、p-p38、VEGF蛋白在乳腺癌组织中的表达与淋巴结转移的关系应用免疫组织化学染色显示,BMP-2蛋白主要分布于乳腺癌细胞的胞浆内;VEGF蛋白主要分布于乳腺癌细胞与正常乳腺上皮细胞的胞浆内,乳腺癌细胞浓染,正常乳腺细胞淡染;p-p38蛋白主要位于乳腺癌细胞核内,呈棕黄色颗粒。31例有淋巴结转移的乳腺癌患者中23例BMP-2表达阳性,阳性率为74.2%,37例无淋巴结转移的患者15例表达阳性,阳性率为40.5%,差异有显著性(p＜0.01)。VEGF在有淋巴结转移的患者中阳性率为67.7%,在无淋巴结转移的患者中阳性表达率为35.1%,差异有显著性(p＜0.05)。p-p38在有淋巴结转移的患者中阳性率为61.3%,在无淋巴结转移的患者中阳性表达率为37.8%,差异有显著性(p＜0.05)。 2、BMP-2、p-p38、VEGF蛋白在乳腺癌细胞系中的表达 Western Blot结果显示BMP-2、p-p38、VEGF在高转移细胞系MDA-MB-435s中的表达高于低转移细胞系MCF-7中的表达高于正常乳腺细胞的表达(p＜0.05)。 3、加入BMP-2特异性抑制剂Noggin后p-p38、VEGF蛋白在乳腺癌细胞系中的表达 Western Blot结果显示加入BM

关键词：乳腺癌 BMP-2 p-p38 VEGF 淋巴结转移

鹿蹄草中两种主要黄酮苷的提取工艺及抗氧化活性研究

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鹿蹄草中两种主要黄酮苷的提取工艺及抗氧化活性研究

作者：姚晓慧东北林业大学

学位级别：硕士

本文建立了对鹿蹄草中两种主要黄酮苷类化合物的高效液相检测方法,并首次对鹿蹄草中两种黄酮苷类化合物金丝桃苷和2"-O-没食子酰基金丝桃苷的负压空化-微波提取工艺进行了研究。同时,对鹿蹄草粗提物以及各层提取物进行了系统的抗氧化活... 详细信息

本文建立了对鹿蹄草中两种主要黄酮苷类化合物的高效液相检测方法,并首次对鹿蹄草中两种黄酮苷类化合物金丝桃苷和2"-O-没食子酰基金丝桃苷的负压空化-微波提取工艺进行了研究。同时,对鹿蹄草粗提物以及各层提取物进行了系统的抗氧化活性评估。 1、确定了高效液相分析检测鹿蹄草中两种主要黄酮苷类成分的色谱条件：色谱柱：HIQ Sil C18W(250mm×4.6mm,5μm),流速：1mL/min,柱温：30℃,检测波长：254nm和265nm,进样量：10μL。流动相体系为(A)乙腈-(B)含0.5%的甲酸水溶液(v/v),梯度洗脱为：0-8min3%-5%A,8-10min5%-18%A,10-32min18%-25%A。 2、对负压空化-微波提取鹿蹄草中金丝桃苷和2"-O-没食子酰基金丝桃苷的条件进行了优化,对影响提取率的各因素进行了考察,确定了最优负压空化-微波提取工艺参数：提取溶剂：体积分数50%乙醇溶液原料粒径：50目液固比：30：1 提取温度：55℃ 负压压力：0.06MPa 提取功率：500W 提取时间：15min 在上述优化的条件下对鹿蹄草进行提取,金丝桃苷和2"-O-没食子酰基金丝桃苷的平均提取率分别为：1.258和4.911mg/g。 3、研究了鹿蹄草粗提物及各层提取物的抗氧化活性并进行了皮尔森相关性分析：在DPPH自由基清除实验中,鹿蹄草粗提物和乙酸乙酯层的DPPH自由基清除能力较为突出,粗提物和乙酸乙酯层的IC50值分别为0.063和0.122mg/mL;ABTS自由基清除能力最强的是鹿蹄草粗提物,相当于0.627mmol/gTrolox,其次是乙酸乙酯层、正丁醇层、石油醚层和水层;还原能力结果表明乙酸乙酯层IC50值为0.066mg/mL,是对照BHT的两倍,说明乙酸乙酯层具有相当强的还原能力;β-胡萝卜素漂白能力测定结果为粗提物和乙酸乙酯层的IC50值分别为0.029和0.027mg/mL,与对照品BHT的IC50值(0.021mg/mL)接近。皮尔森相关性分析表明鹿蹄草的抗氧化能力与其总黄酮含量相关,四种抗氧化活性(DPPH、ABTS、还原能力、p-胡萝卜素漂白)之间有显著的相关性(p值大于0.08)。

关键词：鹿蹄草黄酮苷负压空化-微波提取抗氧化活性皮尔森相关性分析