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云南烟草曲叶病毒LAMP快速检测体系的建立及初步应用

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农业生物技术学报 2024年第8期32卷 1949-1958页

作者：赵正婷盖晓彤张俊蕾夏振远刘弟刘雅婷姜宁云南省烟草农业科学研究院云南农业大学农学与生物技术学院云南农业大学植物保护学院云南农业大学烟草学院

云南烟草曲叶病毒（Tobacco leaf curl Yunnan virus, TbLCYnV）是在中国云南保山烟草（Nicotiana tabacum）上发现的菜豆金色花叶病毒属新病毒，是云南烟草曲叶病的重要病原之一。为快速检测TbLCYnV，本研究根据TbLCYnV的外壳蛋白（coa... 详细信息

云南烟草曲叶病毒（Tobacco leaf curl Yunnan virus, TbLCYnV）是在中国云南保山烟草（Nicotiana tabacum）上发现的菜豆金色花叶病毒属新病毒，是云南烟草曲叶病的重要病原之一。为快速检测TbLCYnV，本研究根据TbLCYnV的外壳蛋白（coat protein, CP）基因保守核苷酸序列，设计了5组引物进行筛选，并采用单一变量法对环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）反应温度、时间，体系中甜菜碱、dNTPs、Mg2+的体积摩尔浓度、内外引物比等进行逐一优化，同时与传统PCR平行对比以验证LAMP的特异性和灵敏度，应用田间采集样品验证LAMP体系的实用性，确立了Tb LCYnV的LAMP检测最佳体系。结果表明，最佳引物组为TbL-5，最适反应温度为60℃，甜菜碱、d NTPs、Mg2+的最佳终浓度分别为1.0、0.4和4.0 mmol/L，最佳内外引物浓度比为4∶1，最佳反应时间60 min。检测结果显示优化后的LAMP经SYBR GreenⅠ染色可通过肉眼直接判断结果，具有高度特异性，且灵敏度是常规PCR的10 000倍。本研究为TbLCYnV的检测提供了一种便捷、高效、可靠的方法，对于Tb LCYnV的早期快速诊断和防控具有重要意义。

关键词：云南烟草曲叶病毒(TbLCYnV) 外壳蛋白(CP)基因环介导等温扩增(LAMP) 特异性灵敏度

基于NP基因序列的云南烟草番茄环纹斑点病毒群体遗传多样性分析

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植物病理学报 2024年第3期54卷 512-521页

作者：赵正婷盖晓彤张俊蕾夏振远马俊红刘雅婷姜宁云南省烟草农业科学研究院昆明650021 云南农业大学农学与生物技术学院昆明650201 云南农业大学植物保护学院昆明650201 云南农业大学烟草学院昆明650201

为探明云南烟草上番茄环纹斑点病毒(tomato zonate spot virus,TZSV)的发病情况及群体遗传多样性特征,本研究使用核壳体蛋白(nucleocapsid protein,NP)基因的特异性引物对采自云南各烟区的560份烟草斑萎病样品进行检测,对部分阳性样本... 详细信息

为探明云南烟草上番茄环纹斑点病毒(tomato zonate spot virus,TZSV)的发病情况及群体遗传多样性特征,本研究使用核壳体蛋白(nucleocapsid protein,NP)基因的特异性引物对采自云南各烟区的560份烟草斑萎病样品进行检测,对部分阳性样本的NP基因进行克隆测序,并对获得的序列进行系统发育、遗传变异、群体多样性等分析。RT-PCR结果显示,560份样品中共有262个检出TZSV,平均阳性检出率为46.8%;重组分析在DX_LJHP_65分离物基因序列中检测到显著的重组信号;系统发育分析显示129个TZSV分离物在进化上可以分为6个组,相同地区来源的分离物倾向于相聚成簇,表明该病毒在进化上具有较强的地理特异性;错配分布分析结果,云南TZSV群体呈多峰分布,表明该群体近期未经历群体扩张事件;种群间遗传分化分析结果表明,滇西和滇东北与其他群体之间基因交流频率很低,其余种群间存在频繁的基因交流。本研究是对云南各烟区TZSV分离物群体遗传变异情况的首次报道,研究结果可为防控TZSV提供重要参考。

关键词：烟草番茄环纹斑点病毒 NP基因遗传变异遗传多样性

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烟田节肢动物群落生态学研究进展

中国农学通报 2024年第26期40卷 110-119页

作者：钟锦潘文泽蒋胜兰杨光源张轲户艳霞夏振远陈斌云南农业大学植物保护学院/云南生物资源保护与利用国家重点实验室昆明650201 云南省烟草农业科学研究院昆明650021 云南省烟草公司大理州公司云南大理671000

本研究旨在探讨生态系统中节肢动物群落的组成结构与多样性,这对于了解节肢动物群落的生态功能至关重要。烟田作为一种特殊的农田生态系统,其生物多样性和群落结构对农业生态系统的可持续发展具有显著影响。研究首先报告了烟田节肢动物... 详细信息

本研究旨在探讨生态系统中节肢动物群落的组成结构与多样性,这对于了解节肢动物群落的生态功能至关重要。烟田作为一种特殊的农田生态系统,其生物多样性和群落结构对农业生态系统的可持续发展具有显著影响。研究首先报告了烟田节肢动物群落组成的现状,包括中国不同烟区优势害虫和天敌的组成情况、动态、多样性及其测度方法;其次,对烟田节肢动物群落多样性的影响因素进行概述,如农业栽培管理措施、化学药剂使用、有机农业和生物防治等这些因素对烟田节肢动物群落的物种多样性和丰富度产生直接或间接的影响。最后,分析了当前研究中存在的问题和挑战,讨论了DNA条形码技术和人工智能在节肢动物种类快速准确鉴定中的应用,并展望了使用无人机高光谱影像实时动态测量等技术在节肢动物多样性调查中的未来应用。通过对烟田节肢动物群落生态学的综合分析和总结,为烟田生态系统的保护和管理提供科学依据和指导。

关键词：烟田烟田生态系统节肢动物群落生态学物种多样性农业管理生物防治有机农业

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低频振动挖掘系统设计及试验研究

低频振动挖掘系统设计及试验研究

作者：夏振远福建农林大学

学位级别：硕士

液压挖掘机应用范围广、创造价值高,在工程机械中占据着重要的地位,是土石方开挖的主要施工机械,在能源、交通、农田水利、城镇建设、现代化军事等领域中发挥着重要的作用。但是,挖掘机的工作环境恶劣,载荷变化大,造成挖掘功耗大,零件... 详细信息

液压挖掘机应用范围广、创造价值高,在工程机械中占据着重要的地位,是土石方开挖的主要施工机械,在能源、交通、农田水利、城镇建设、现代化军事等领域中发挥着重要的作用。但是,挖掘机的工作环境恶劣,载荷变化大,造成挖掘功耗大,零件损坏率高。寻求一种更为合理有效的方法,使挖掘机在作业过程中实现低能耗、高效率,对于提高其综合性能具有重要的意义。振动挖掘机是在普通挖掘机的基础上增设振动激励装置,使挖掘机的铲斗在工作时形成动态的振动挖掘力,从而大幅提升挖掘机入土和破土的能力,降低其在挖掘过程中的挖掘阻力,同时提升了挖掘机在硬质土壤、夹石地面等一系列复杂地况的工作效率。振动挖掘机在降低挖掘阻力,提高工作效率,减少能源消耗等方面具有突出的优势,大力研发振动挖掘机,使其尽早的进入市场,并投入到实际的生产建设中去,对于提高生产力,节约能源和保护环境来说都具有极其重要的意义。为此,本文将从以下几方面展开深入的研究:(1)以土壤的库仑定律为理论基础研究振动减阻的机理。以库仑定律为基础,分析振动能够减小刀具阻力的原因,并以挖掘机的铲斗为研究对象,分析振动挖掘的减阻机理,得到振动挖掘阻力模型和振动模型。(2)根据振动挖掘的研究机理,对普通挖掘机的挖掘臂进行振动设计改造。通过对不同激振方式的对比,设计本系统的激振装置,将普通的挖掘臂改造成振动参数可调的振动挖掘系统。(3)分别对振动挖掘系统及其主要零部件(动臂、斗杆、挖斗)进行模态分析和强度分析。模态分析为振动挖掘的合理激振提供参考,以避免系统出现共振现象,强度分析用来校验零部件设计的合理性。(4)以工作参数为试验因素,分别在红土和砂土中进行振动挖掘正交试验。通过设定频率、振幅和挖掘速度不同水平的参数组合进行挖掘试验,测得其在挖掘过程中的挖掘阻力,分析三因素的水平变化对挖掘阻力的影响,并得到不同工况下的最佳工作参数。(5)对普通挖掘和振动挖掘进行对比试验分析。通过分析普通挖掘和振动挖掘的挖掘阻力在整个挖掘过程中的大小和变化情况,得到振动挖掘在减小挖掘阻力上的量化优势。大力研发振动挖掘,对于提高挖掘机的整体性能、提高工程机械装备水平和节能减排都具有重要的意义。本文所设计的振动挖掘系统,在减小挖掘阻力上有着显著的优势,为振动挖掘后续研究和推广应用打下了良好的基础。

关键词：振动挖掘机液压频率振幅挖掘阻力

防治烟草黑胫病有益内生细菌的筛选及其抑菌作用

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中国烟草学报 2013年第5期19卷 112-117页

作者：陈泽斌夏振远雷丽萍陈海如云南省烟草农业科学研究院玉溪653100 昆明学院农学院云南昆明650214 云南农业大学植物保护学院昆明650201

为筛选具有防病作用的植物内生细菌,采用常规分离方法从不同生长期的健康烟株的根、茎、叶中分离得到内生细菌127株,平板对峙培养法从中筛选出12株对烟草黑胫病菌具有明显拮抗作用的菌株,它们的抑菌带宽度达到5mm以上。对其进行了皿内... 详细信息

为筛选具有防病作用的植物内生细菌,采用常规分离方法从不同生长期的健康烟株的根、茎、叶中分离得到内生细菌127株,平板对峙培养法从中筛选出12株对烟草黑胫病菌具有明显拮抗作用的菌株,它们的抑菌带宽度达到5mm以上。对其进行了皿内拮抗试验、发酵液抑菌试验和温室防病试验。有8个菌株培养液滤液中存在具有抑菌作用的活性成分。其中wy2、wy11、wy4培养滤液的抗菌活性最强(>30%),它们的细菌培养滤液能破坏病原菌菌丝形态,使烟草黑胫病菌菌丝细胞膨大、细胞壁破损、原生质外渗、菌体崩溃、生长缓慢。温室盆栽试验表明wy11对烟草黑胫病的防效最好,为51.7%。此外,内生细菌wy11和cj17发酵液灌根对烟株具有一定促生作用,能提高烟株茎围、叶长、叶宽。以细菌16S rDNA同源性为基础的系统发育分析表明防病促生内生细菌wy11与***(AB255669)处于同一分支,相似性为99%,初步将菌株wy11鉴定为解淀粉芽孢杆菌***。

关键词：烟草黑胫病菌内生细菌生物防治促生作用

烟草内生促生细菌的筛选及在漂浮育苗中的应用效果

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中国烟草学报 2013年第1期19卷 70-75页

作者：陈泽斌杨跃华夏振远雷丽萍陈海如云南省烟草农业科学研究院玉溪653100 云南农业大学植物保护学院昆明650201 云南省烟草公司玉溪市公司玉溪653100

通过培养皿发芽试验,从127株烟草内生细菌中初步筛选出4株能提高烟草种子发芽率、根长、根体积的内生细菌。对这4个菌株进行了漂浮育苗试验复筛,发现它们对烟苗的生长具有明显促进作用。其中促生作用最好的wy2菌株使烟苗茎直径增加了33.... 详细信息

通过培养皿发芽试验,从127株烟草内生细菌中初步筛选出4株能提高烟草种子发芽率、根长、根体积的内生细菌。对这4个菌株进行了漂浮育苗试验复筛,发现它们对烟苗的生长具有明显促进作用。其中促生作用最好的wy2菌株使烟苗茎直径增加了33.3%,根长增加了49.2%,与对照相比差异显著。通过16S rDNA序列同源性分析将wy2菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。

关键词：烟草内生细菌促生育苗解淀粉芽孢杆菌

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烟草花叶病毒快速检测方法的建立及应用

云南大学学报（自然科学版） 2012年第S1期34卷 110-115,121页

作者：吴峰吕琦袁航谭仲夏秦西云夏振远莫笑晗马岚清华大学深圳研究生院生命与健康学部广东深圳518005 云南大学生命科学学院云南昆明650091 云南省烟草农业科学研究院云南玉溪653100

应用单克隆抗体技术获得抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)单克隆抗体,并通过胶体金标记技术,免疫层析快速检测技术和SQUID磁学定量测定技术建立起烟草花叶病毒的快速检测方法,并开发出用于定性检测的TMV胶体金快速检测试纸及... 详细信息

应用单克隆抗体技术获得抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)单克隆抗体,并通过胶体金标记技术,免疫层析快速检测技术和SQUID磁学定量测定技术建立起烟草花叶病毒的快速检测方法,并开发出用于定性检测的TMV胶体金快速检测试纸及用于定量检测的TMV纳米磁珠快速检测试纸,其检测灵敏度分别为1 ng/mL和0.1 ng/mL.所建立的方法操作简单,快速,灵敏度高,特异性好,是作为烟草育苗中各种TMV无症和有症烟株现场筛查的有效手段.

关键词：烟草花叶病毒胶体金纳米磁珠免疫层析检测

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烟草花叶病毒单克隆抗体的制备和鉴定

云南大学学报（自然科学版） 2013年第1期35卷 93-98页

作者：吕琦吴峰林洁谭仲夏秦西云夏振远莫笑晗马岚云南大学生命科学学院云南昆明650091 清华大学深圳研究生院生命与健康学部广东深圳518005 云南省烟草农业科学研究院云南玉溪653100

经工程菌表达与纯化,得到了纯度95%以上的TMV-CP-F重组蛋白,配合提取的TMV天然病毒颗粒作为免疫原.通过杂交瘤技术获得了14株能分泌特异针对TMV外壳蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株.经鉴定14株细胞所分泌的抗体亚类为IgG1型,抗体轻链均为... 详细信息

经工程菌表达与纯化,得到了纯度95%以上的TMV-CP-F重组蛋白,配合提取的TMV天然病毒颗粒作为免疫原.通过杂交瘤技术获得了14株能分泌特异针对TMV外壳蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株.经鉴定14株细胞所分泌的抗体亚类为IgG1型,抗体轻链均为κ型.经ProteinA一步法亲和层析纯化所得抗体经鉴定相对分子质量在149.36～157.23 ku之间,抗体纯度在80%以上.经间接ELISA测定,14株抗体均与TMV-CP重组蛋白和TMV病毒有良好特异性反应.所制备的抗TMV抗体的特异性高,可用于与其相关的免疫检测研究和应用.

关键词：烟草花叶病毒单克隆抗体间接法ELISA

对氯苯酚提取-液相色谱法分析烟草中的磷酸腺苷

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分析试验室 2014年第3期33卷 296-299页

作者：林小峰吴玉萍夏振远孔光辉郑保忠云南省烟草农业科学研究院玉溪653100 云南大学材料科学与工程系昆明650091

建立了新鲜烟叶中三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）和单磷酸腺苷（AMP）3种磷酸腺苷同时测定的方法。烟草样品经过对氯苯酚提取、纯化后，采用三乙胺缓冲液作为流动相洗脱，经C18色谱柱分离，在259nm波长对样品进行检测。与高氯酸... 详细信息

建立了新鲜烟叶中三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）和单磷酸腺苷（AMP）3种磷酸腺苷同时测定的方法。烟草样品经过对氯苯酚提取、纯化后，采用三乙胺缓冲液作为流动相洗脱，经C18色谱柱分离，在259nm波长对样品进行检测。与高氯酸（PCA）法，以及DNA常用的苯酚提取法进行了比较，结果均表明：低温下以对氯苯酚提取的效果较佳，使用三乙胺缓冲液流动相具有分离效率高、检出灵敏的优点。在线性范围（5～200μg/mL）内，磷酸腺苷浓度与峰面积具有很好的相关系数（r〉0．9999），检出限达到纳克级水平，氯苯酚法对ATP，ADP和AMP的平均回收率分别为96．8％，97．2％和93．3％，RSD均小于5％。

关键词：高效液相色谱 ATP ADP AMP 对氯苯酚烟草