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畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3383-3394页

作者：周婷孙梦坤余四九崔燕甘肃农业大学动物医学院兰州730070 西北农林科技大学动物医学院杨凌712100

病原体灭活是生产灭活疫苗最关键和最基本的技术。理想的灭活方式是彻底灭活病原体并保持抗原的免疫原性,且无化学残留。与传统灭活方式相比,辐照技术在疫苗研发中的主要优势是它能够穿透病原体,但对病原体表面抗原蛋白造成的损伤较小,... 详细信息

病原体灭活是生产灭活疫苗最关键和最基本的技术。理想的灭活方式是彻底灭活病原体并保持抗原的免疫原性,且无化学残留。与传统灭活方式相比,辐照技术在疫苗研发中的主要优势是它能够穿透病原体,但对病原体表面抗原蛋白造成的损伤较小,且灭活后不需要去除任何化学残留物,因此更适合用于研发安全有效的灭活疫苗。本文简要回顾和总结了辐照技术应用于疫苗研发的历史和进展,讨论了辐照技术在疫苗研发中的应用的潜在策略。

关键词：辐照技术电子束 γ射线 X射线疫苗

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瘦素及其受体在牦牛附睾的时空表达特性

农业生物技术学报 2024年第2期32卷 334-343页

作者：王晓艳崔燕余四九马睿何俊峰张虔龙敏甘肃农业大学动物医学院甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心

瘦素(leptin)及瘦素受体(leptin receptor, LEPR)在雄性动物生殖调控中发挥重要作用。为探究Leptin及LEPR在性成熟前后牦牛(Bos grunniens)附睾头、体、尾中的分布特点及表达动态，本研究采集性成熟前(幼年)及性成熟后(成年,老年)牦牛... 详细信息

瘦素(leptin)及瘦素受体(leptin receptor, LEPR)在雄性动物生殖调控中发挥重要作用。为探究Leptin及LEPR在性成熟前后牦牛(Bos grunniens)附睾头、体、尾中的分布特点及表达动态，本研究采集性成熟前(幼年)及性成熟后(成年,老年)牦牛附睾不同部位(头,体,尾)，利用qPCR、Western blot和免疫组织化学染色方法检测Leptin及LEPR在不同年龄牦牛附睾头、体、尾中的分布及表达水平。免疫组化结果显示，Leptin和LEPR主要表达在附睾上皮、基底细胞和平滑肌细胞，其中附睾上皮呈强阳性表达；q PCR结果显示，Leptin及LEPR在幼年牦牛附睾头、体和尾的基因表达量显著高于成年和老年(P0.05);Western blot结果显示，Leptin及LEPR蛋白在不同年龄牦牛附睾中均有表达，其表达量在幼年组最高，从幼年、成年及老年，依次呈递减趋势，且各年龄之间差异显著(P0.05);Leptin及LEPR蛋白在成年和老年附睾中的表达量为附睾尾>附睾头>附睾体，且各部位之间差异显著(P<0.05)。结果表明，牦牛性成熟前后附睾中的Leptin及LEPR表达量发生显著变化，并且性成熟后维持在一定水平持续表达至老年，在附睾不同区段的表达也存在差异，附睾尾表达相对最高，说明尾部环境具有较高的Leptin浓度。Leptin及LEPR在牦牛附睾中的时空表达差异提示二者对于牦牛精子的成熟、存储和能量保存方面具有重要意义，本研究为探究高原环境下雄性牦牛的生殖调控机制提供研究资料。

关键词：牦牛附睾瘦素(leptin) 瘦素受体(LEPR)

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奶牛乳源外泌体提取方法的优化及效果评价

动物营养学报 2024年第2期36卷 1265-1276页

作者：赵莹王靖雷王萌王立斌张倩李志杰马鑫余四九潘阳阳甘肃农业大学动物医学院兰州730070 甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心兰州730070

乳源外泌体在疾病治疗及载体效应等领域应用颇为广泛,但目前乳源外泌体的提取方法仍步骤繁琐,耗时长,难以推广应用。为建立省时、高效和稳定的乳源外泌体提取方法,本试验在前期已建立的差速超速离心法、凝乳酶法、乙酸法及蔗糖密度梯度... 详细信息

乳源外泌体在疾病治疗及载体效应等领域应用颇为广泛,但目前乳源外泌体的提取方法仍步骤繁琐,耗时长,难以推广应用。为建立省时、高效和稳定的乳源外泌体提取方法,本试验在前期已建立的差速超速离心法、凝乳酶法、乙酸法及蔗糖密度梯度离心法的基础上,通过增加离心速度、改变乙酸或凝乳酶用量、调整蔗糖密度梯度、减少离心步骤进行逐一优化。通过透射电子显微镜、纳米粒子跟踪分析、蛋白浓度检测、免疫印迹鉴定比较乳源外泌体形态结构、粒径大小、蛋白浓度、粒子浓度、特异性标记蛋白的差异,筛选出最优提取方法。结果显示:4种优化后提取方法均可分离获得具有典型“茶托”形状,介于30~200 nm的细胞外囊泡,但优化后的乙酸法提取乳源外泌体最多,视野密度高达80%以上,粒径大小为(151.0±47.2)nm,粒子浓度为6.2×10^(12)个/mL,均高于其他优化方法;优化后的乙酸法提取乳源外泌体的特异性标记蛋白[肿瘤易感基因101(TSG101)、热休克蛋白70(HSP70)、CD81和CD9]均表达量较高,其他3种优化方法提取到的乳源外泌体特异性标记蛋白发生不同程度降解,且提取乳源外泌体所得样品蛋白浓度均显著高于优化的乙酸法(P<0.05)。结果表明,优化后奶牛乳源外泌体乙酸提取法具有方法简单、耗时短、纯度高、特异性标记蛋白稳定等优点,该方法为外泌体需求量大的试验、医疗、工业生产等奠定一定基础。

关键词：乳源外泌体差速超速离心法乙酸凝乳酶提取鉴定

脂联素及其受体在不同年龄牦牛附睾中的表达与分布

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中国兽医科学 2024年第6期54卷 824-832页

作者：祁正满崔燕余四九张虔马睿牛悦悦卢凯翟国亮甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省牛羊胚胎技术研究中心甘肃兰州730070

为研究脂联素(APN)及其受体在不同年龄牦牛附睾中的表达与定位,笔者采集幼年(0.5~1岁)、成年(4~5岁)、老年(7岁)牦牛附睾(头、体、尾),通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western-blotting)和免疫组织化学(IHC)方法检测APN及... 详细信息

为研究脂联素(APN)及其受体在不同年龄牦牛附睾中的表达与定位,笔者采集幼年(0.5~1岁)、成年(4~5岁)、老年(7岁)牦牛附睾(头、体、尾),通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western-blotting)和免疫组织化学(IHC)方法检测APN及其受体1(APNR1)和受体2(APNR2)在附睾(头、体、尾)中的表达与定位。qRT-PCR结果显示,APN和APNR1在老年牦牛附睾尾中的m RNA转录水平显著高于幼年和成年(P<0.05);APNR2在成年和老年牦牛附睾头、体、尾中的转录水平均呈上升趋势,并且APNR2在老年牦牛附睾尾中的转录水平最高(P<0.05)。Western-blotting结果显示,APN蛋白在幼年牦牛附睾头、体、尾中的表达量呈下降趋势(P<0.05),而在成年和老年牦牛的表达趋势相反(P<0.05),且在老年牦牛附睾尾表达量最高(P<0.05);老年牦牛附睾中APNR1的蛋白表达量显著高于幼年和成年牦牛(P<0.05),且在老年牦牛附睾尾表达量最高;APNR2蛋白在幼年牦牛附睾头中表达量最高,而在成年和老年牦牛附睾头、体、尾中均呈上升趋势,且在老年牦牛附睾尾中表达量最高(P<0.05)。IHC结果显示,APN、APNR1及APNR2分布于牦牛附睾上皮细胞、纤毛、间质和精子中。研究结果表明,APN及其受体在牦牛性成熟前后的表达差异显著,推测其对于牦牛附睾中精子成熟、转运和储存等方面具有重要的意义,本实验为高原环境下对于雄性牦牛生殖调控的研究提供了一定的理论依据。

关键词：牦牛附睾脂联素脂联素受体

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牦牛HMGN1多克隆抗体制备及应用

核农学报 2024年第11期38卷 2106-2115页

作者：李玉平王立斌潘阳阳王萌张晖张瑞贾利毅余四九甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心甘肃兰州730070

为了克隆牦牛高迁移率族核小体结合蛋白1(HMGN1)基因并制备牦牛HMGN1多克隆抗体,探究HMGN1在牦牛生殖生理研究过程中的作用,本研究通过基因克隆获得牦牛HMGN1基因序列并对其进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HMGN1... 详细信息

为了克隆牦牛高迁移率族核小体结合蛋白1(HMGN1)基因并制备牦牛HMGN1多克隆抗体,探究HMGN1在牦牛生殖生理研究过程中的作用,本研究通过基因克隆获得牦牛HMGN1基因序列并对其进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HMGN1在牦牛子宫、卵巢、输卵管中的相对表达量。利用原核表达、亲和层析法纯化牦牛HMGN1重组蛋白,免疫10月龄新西兰大白兔,亲和层析法纯化所制备的牦牛HMGN1多克隆抗体;分别利用蛋白免疫印迹(WB)、免疫组织化学技术(IHC)检测HMGN1在牦牛生殖器官中的表达和定位;利用免疫荧光技术(IF)检测HMGN1蛋白在颗粒细胞中的表达。本试验成功克隆了牦牛HMGN1基因并制备了牦牛HMGN1多克隆抗体。WB结果显示,HMGN1蛋白在黄体期和卵泡期牦牛子宫的表达量高,妊娠期的表达量最低(P<0.05);卵巢组织中,妊娠期的表达量最高,卵泡期的表达量最低(P<0.05);输卵管中妊娠期的表达量最高,黄体期和卵泡期的表达量较低(P<0.05)。IHC结果显示,HMGN1主要分布在子宫内膜和子宫腺、卵泡膜和卵泡颗粒层、输卵管黏膜上皮等部位。IF结果显示,HMGN1主要表达在卵巢颗粒细胞的细胞质中。综上,HMGN1在牦牛发情周期和妊娠过程中均参与调节。本研究结果为进一步研究HMGN1蛋白在调节牦牛生殖生理机制提供了基础资料。

关键词：牦牛 HMGN1 原核表达多克隆抗体

HIF-2α、LP及LEPR在不同年龄牦牛肺组织中的表达

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中国兽医科学 2024年第9期54卷 1259-1266页

作者：翟国亮崔燕余四九赵鹏飞魏鹏强卢凯祁正满卢增华甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省牛羊胚胎技术研究中心甘肃兰州730070

本研究旨在探究低氧诱导因子2α(HIF-2α)、瘦素(LP)及其受体(LEPR)在不同年龄牦牛肺组织中的分布特点,以及在牦牛肺组织生长发育过程中可能发挥的作用。本试验采用免疫组织化学染色、qRT-PCR和Western-blot法,对HIF-2α、LP及LEPR在不... 详细信息

本研究旨在探究低氧诱导因子2α(HIF-2α)、瘦素(LP)及其受体(LEPR)在不同年龄牦牛肺组织中的分布特点,以及在牦牛肺组织生长发育过程中可能发挥的作用。本试验采用免疫组织化学染色、qRT-PCR和Western-blot法,对HIF-2α、LP及LEPR在不同年龄牦牛肺中的分布及表达水平进行探究。免疫组化结果显示,HIF-2α主要表达在不同年龄牦牛肺终末细支气管上皮及伴行的肺动脉内皮;LP和LEPR表达部位相似,主要分布在不同年龄牦牛肺的各级支气管上皮、肺动脉内皮及肺泡上皮。qRT-PCR结果显示,HIF-2α基因在3日龄牦牛肺中的表达量显著高于6月龄、3岁和6岁的牦牛(P0.05)。结果表明,HIF-2α、LP及LEPR在牦牛肺发育过程中可能发挥重要作用,本研究为进一步探究低氧环境下牦牛肺的适应机制提供一定的基础资料。

关键词：牦牛肺瘦素(LP) 瘦素受体(LEPR) 低氧诱导因子(HIF-2α)

地西泮结合抑制剂在牦牛不同大小卵泡中的表达与定位

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2024年第8期52卷 11-17页

作者：王立斌王强龙潘阳阳黄振华赵天丁天翊刘敏清崔燕余四九甘肃农业大学动物医学院甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心甘肃兰州730070

【目的】研究地西泮结合抑制剂(diazepam binding inhibitor, DBI)在牦牛不同大小卵泡中的表达水平与定位,探讨DBI蛋白在牦牛卵泡发育过程中的调控作用。【方法】采集牦牛卵巢组织,分离不同大小(直径8 mm)的卵泡。采用实时荧光定量方法(... 详细信息

【目的】研究地西泮结合抑制剂(diazepam binding inhibitor, DBI)在牦牛不同大小卵泡中的表达水平与定位,探讨DBI蛋白在牦牛卵泡发育过程中的调控作用。【方法】采集牦牛卵巢组织,分离不同大小(直径8 mm)的卵泡。采用实时荧光定量方法(qRT-PCR)检测DBI基因mRNA在牦牛不同大小卵泡中的相对表达量,并利用蛋白免疫印迹技术(Western-blotting, WB)检测DBI蛋白的表达情况。采用免疫组织化学方法(immunohisto chemistry, IHC)定位DBI蛋白在雌性牦牛完整成熟卵泡中的分布情况。采用免疫荧光技术(immunofluorescence, IF)检测DBI在牦牛卵母细胞中的定位。【结果】DBI基因mRNA和DBI蛋白在牦牛不同大小卵泡中均表达,但表达水平存在显著差异(P<0.05),表达量随着牦牛卵泡直径的增大而显著上升。DBI蛋白在牦牛成熟卵泡中的颗粒细胞、卵丘细胞均有分布;在卵母细胞中主要定位于细胞质、细胞核。【结论】DBI在类固醇激素合成与卵母细胞成熟过程中具有重要作用。

关键词：牦牛地西泮结合抑制剂卵泡发育卵母细胞表达与定位

促红细胞生成素对牦牛肾间质成纤维细胞凋亡因子表达的影响

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畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3460-3471页

作者：卢增华崔燕余四九白雪峰卢鸿琴何俊峰卢凯翟国亮祁正满甘肃农业大学动物医学院兰州730070 甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心兰州730070

旨在探讨促红细胞生成素(EPO)对牦牛肾间质成纤维细胞(RIFs)中凋亡因子的影响。本研究首先分别采集3头4岁龄的健康牦牛和黄牛的肾脏组织,采用免疫组织化学方法和Western blot检测牦牛和黄牛肾脏中EPO的准确分布及其表达量。同时对牦牛R... 详细信息

旨在探讨促红细胞生成素(EPO)对牦牛肾间质成纤维细胞(RIFs)中凋亡因子的影响。本研究首先分别采集3头4岁龄的健康牦牛和黄牛的肾脏组织,采用免疫组织化学方法和Western blot检测牦牛和黄牛肾脏中EPO的准确分布及其表达量。同时对牦牛RIFs进行原代培养鉴定,并对其进行不同药物处理来调控RIFs中EPO表达水平,检测EPO对凋亡相关基因Bax,Bcl-2,PCNA在mRNA和蛋白表达水平的影响。免疫组化学检测结果显示,EPO在牦牛和黄牛肾脏中集合管上皮细胞、肾小管上皮细胞和小管周间质成纤维样细胞中均呈阳性表达。qRT-PCR和Western blot结果显示,EPO在牦牛肾脏中的表达量显著高于黄牛(P<0.001)。随后对生成EPO的RIFs进行原代培养并调控EPO的表达,结果表明:激活组显著升高RIFs中Bcl-2和PCNA的表达,降低Bax的表达(P<0.001)。EPO抑制组显著降低RIFs中Bcl-2、PCNA的表达,上调Bax的表达(P<0.001)。综上表明,EPO在牦牛和黄牛肾脏中集合管上皮细胞、肾小管上皮细胞和小管周间质成纤维样细胞中均呈阳性表达,牦牛肾脏中的EPO高表达能够促进RIFs中Bcl-2和PCNA的表达,并降低Bax的表达,说明EPO可以在牦牛肾脏中起到抗凋亡的作用。

关键词：牦牛促红细胞生成素(EPO) 肾间质成纤维细胞(RIFs) 凋亡

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2015—2020年黄山市疑似预防接种异常反应监测结果分析

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职业与健康 2024年第2期40卷 215-219页

作者：张向阳史四九方杰敏何江琴黄山市疾病预防控制中心免疫和结核病防治科安徽黄山245000 安徽省结核病防治研究所卡介苗科安徽合肥230022

目的分析2015—2020年黄山市疑似预防接种异常反应(adverse events following immunization,AEFI)的特征。方法通过中国AEFI监测信息系统收集2015—2020年黄山市AEFI个案数据,采用描述流行病学方法进行分析。结果 2015—2020年黄山市... 详细信息

目的分析2015—2020年黄山市疑似预防接种异常反应(adverse events following immunization,AEFI)的特征。方法通过中国AEFI监测信息系统收集2015—2020年黄山市AEFI个案数据,采用描述流行病学方法进行分析。结果 2015—2020年黄山市共报告AEFI 727例,报告发生率为34.44/10万,其中严重AEFI 7例,报告发生率为0.33/10万。一般反应、异常反应分别占89.00%和10.45%,报告发生率分别为30.65/10万和3.60/10万,一般反应以发热、红肿、硬结为主,异常反应以过敏性皮疹和荨麻疹为主;县报告发生率(38.45/10万)高于城区(28.93/10万),差异有统计学意义(χ^(2)=13.534,P<0.01)。结论 2015—2020年黄山市AEFI发生率在预期范围内,以一般反应为主,严重反应罕见,应重点加强城区AEFI监测。

关键词：疑似预防接种异常反应监测疫苗