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外泌体应用于肝细胞癌诊疗的研究进展

肿瘤 2016年第8期36卷 944-951页

作者：孙一帆唐石伏广西中医药大学第三附属医院检验科广西柳州545001

已知外泌体有多种生物学功能,包括参与免疫反应和抗原提呈,尤其是作为囊泡可以在细胞间运输蛋白、病毒、脂质和RNA。外泌体是一种重要的细胞间物质和信息交流的工具,它通过在细胞间传递基因和蛋白信号,调节肿瘤微环境,从而介导肝癌细胞... 详细信息

已知外泌体有多种生物学功能,包括参与免疫反应和抗原提呈,尤其是作为囊泡可以在细胞间运输蛋白、病毒、脂质和RNA。外泌体是一种重要的细胞间物质和信息交流的工具,它通过在细胞间传递基因和蛋白信号,调节肿瘤微环境,从而介导肝癌细胞的凋亡、分化、血管生成和转移。早期诊断对提高肝细胞癌患者的生存率极其重要。因此,有研究认为,外泌体可以作为一种新的分子标志物用于肝癌诊断,并且可以用作肝癌治疗的潜在靶标。本文即对外泌体在肝癌中的作用机制和临床应用做一综述。

关键词：癌,肝细胞外泌体早期诊断治疗

Hedgehog信号通路调控Twist高表达乳腺肿瘤干细胞样细胞的富集及迁移

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肿瘤 2017年第10期37卷 1024-1031,1046页

作者：周明莉唐石伏张海龙柳满然成都市第三人民医院检验科四川成都610031 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 广西中医药大学第三附属医院检验科广西壮族自治区柳州545001 安顺市人民医院检验科贵州安顺561000

目的 :探讨阻断Hedgehog信号通路对Twist高表达乳腺癌干细胞样细胞微球体富集及其迁移的影响。方法:分别采用蛋白质印迹法和微球体细胞形成实验检测正常乳腺上皮MCF-10A细胞、乳腺癌MCF-7和HS578T细胞中Twist蛋白的表达水平及微球体细... 详细信息

目的 :探讨阻断Hedgehog信号通路对Twist高表达乳腺癌干细胞样细胞微球体富集及其迁移的影响。方法:分别采用蛋白质印迹法和微球体细胞形成实验检测正常乳腺上皮MCF-10A细胞、乳腺癌MCF-7和HS578T细胞中Twist蛋白的表达水平及微球体细胞形成能力。蛋白质印迹法检测MCF-10A、MCF-7和HS578T微球体细胞中Twist、GLI1家族锌指蛋白(GLI family zincnger1,GLI1)和音猬因子(Sonic Hedgehog,SHh)蛋白的表达情况。采用不同浓度的Hedgehog信号通路特异性抑制剂GDC-0449(10、20和30μmol/L)处理Twist蛋白表达水平最高的乳腺癌HS578T微球体细胞96 h,分别采用微球体细胞形成实验和Transwell小室法检测GDC-0449对HS578T微球体细胞再成球能力和迁移能力的影响,并进一步采用蛋白质印迹法检测HS578T微球体细胞中GLI1、性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,SOX2)和八聚体绑定转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,OCT4)蛋白的表达情况。结果:乳腺癌HS578T细胞中Twist蛋白的表达水平明显高于MCF-10A和MCF-7细胞(P值均<0.05),且具有最强的微球体形成能力(P值均<0.05)。HS578T微球体细胞中Twist、GLI1和SHh蛋白水平均明显高于MCF-10A和MCF-7微球体细胞(P值均<0.05);经抑制剂GDC-0449处理后,乳腺癌HS578T微球体细胞的成球能力及迁移能力均明显降低(P值均<0.05),GLI1、SOX2和OCT4蛋白的表达水平明显下调(P值均<0.05)。结论:阻断Hedgehog信号通路的活化可抑制Twist高表达乳腺癌细胞微球体的形成及迁移能力。

关键词：乳腺肿瘤肿瘤干细胞 Twist转录因子 Hedgehog信号通路,细胞运动

结直肠癌循环血游离miRs分子诊断标志物研究进展

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重庆医科大学学报 2014年第3期39卷 277-280页

作者：杨得志唐石伏柳满然广西中医药大学第三附属医院病理科柳州545001 重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

微小RNAs(microRNAs,miRs)是一类非编码小分子单链RNA,主要在翻译水平负性调控基因表达。近年来研究发现,循环血游离miRs对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)具有潜在的诊断作用。CRC患者具有特异性的循环血游离miRs表达谱,其中,miR-18a... 详细信息

微小RNAs(microRNAs,miRs)是一类非编码小分子单链RNA,主要在翻译水平负性调控基因表达。近年来研究发现,循环血游离miRs对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)具有潜在的诊断作用。CRC患者具有特异性的循环血游离miRs表达谱,其中,miR-18a、miR-21、miR-29a和miR-92a等miRs均具有潜在的CRC诊断价值,而miR-7具有潜在的CRC早期诊断价值。这些研究结果表明,循环血游离miRs有可能成为新的CRC分子诊断标志物。

关键词：结直肠癌循环血游离miRs 诊断价值

Twist促进乳腺癌细胞BT-549乳腺细胞小球形成及其迁移

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第3期31卷 321-324页

作者：周明莉唐石伏张海龙杨丽杨佳佳柳满然重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的探讨Twist基因功能缺失对乳腺肿瘤干细胞样细胞富集及其迁移的影响。方法采用shRNA干扰技术构建Twist基因敲减的BT-549乳腺癌细胞株(BT-549-sh Twist细胞株)和阴性对照细胞株BT-549-sh Vec;采用实时荧光定量PCR和Western blot法验... 详细信息

目的探讨Twist基因功能缺失对乳腺肿瘤干细胞样细胞富集及其迁移的影响。方法采用shRNA干扰技术构建Twist基因敲减的BT-549乳腺癌细胞株(BT-549-sh Twist细胞株)和阴性对照细胞株BT-549-sh Vec;采用实时荧光定量PCR和Western blot法验证干扰效率;长程无血清悬浮培养方法富集具有干细胞特性的乳腺癌细胞小球(mammosphere);TranswellTM法检测乳腺癌细胞小球的迁移能力。结果采用shRNA干扰技术成功构建Twist基因敲减的BT-549乳腺癌细胞株BT-549-sh Twist细胞株;BT-549-sh Twist细胞株的mammosphere富集能力和迁移能力减弱。结论 Twist促进BT-549乳腺癌乳腺细胞小球形成及其迁移。

关键词： BT-549乳腺癌细胞 Twist 乳腺细胞小球(mammosphere) 细胞迁移

Hsa_circ_0001459在EB病毒感染者外周血单个核细胞中的表达水平及其临床意义

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中华微生物学和免疫学杂志 2023年第12期43卷 969-976页

作者：梁兴东闭婉英王万平龙涌文赵锦唐石伏柳州市人民医院检验科柳州545006 广西中医药大学研究生院南宁530200

目的检测hsa_circ_0001459在EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的表达水平,判断其对EBV感染者的诊断价值。方法全转录组测序获得EBV感染者PBMC中差异表达circRNAs表达谱,根据∣log2差异倍数∣≥1且P<0.05标准筛选出显著差异的circRNAs,再结合circRNAs组成、长度和引物特异性挑选出高表达的hsa_circ_0001459作为研究对象。采用实时荧光定量PCR方法检测60例EBV感染者和45例健康对照者PBMC中hsa_circ_0001459的相对表达量;受试者工作特征(ROC)曲线和Kappa分析其对EBV感染者的诊断价值。结果与健康对照组相比,hsa_circ_0001459在EBV感染者中表达上调趋势与测序结果一致;其曲线下面积为0.83(95%CI为0.75~0.91),敏感度为0.80(95%CI为0.66~0.89),特异度为0.77(95%CI为0.65~0.86)。Kappa分析结果表明,hsa_circ_0001459与EBV DNA对判断EBV感染有中度一致性(κ=0.51)。结论Hsa_circ_0001459在EBV感染者PBMC中高表达,可能成为EBV感染者的诊断标志物。

关键词： EB病毒 Hsa_circ_0001459 外周血单个核细胞诊断

耐药铜绿假单胞菌获得性耐药基因与可移动遗传元件检测的指标聚类分析

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中华医院感染学杂志 2012年第22期22卷 4934-4936,4939页

作者：刘春明韦柳华朱胜波唐石伏孙一帆马兴璇柳州市中医院检验科广西柳州545001 柳州市工人医院检验科广西柳州545005

目的调查多耐药铜绿假单胞菌(MDRPA)中获得性耐药基因和可移动遗传元件遗传标记存在状况及两者的相关性。方法收集柳州市三级医院2011年1-12月标本中分离的MDRPA共20株,采用聚合酶链反应(PCR)法分析33种β-内酰胺酶基因、15种氨基糖苷... 详细信息

目的调查多耐药铜绿假单胞菌(MDRPA)中获得性耐药基因和可移动遗传元件遗传标记存在状况及两者的相关性。方法收集柳州市三级医院2011年1-12月标本中分离的MDRPA共20株,采用聚合酶链反应(PCR)法分析33种β-内酰胺酶基因、15种氨基糖苷类修饰酶基因、6种16SrRNA甲基化酶基因和15种可移动遗传元件标记基因,并对检测结果作了指标聚类分析。结果 20株MDRPA中共检出4种β-酰胺类获得性耐药基因、4种氨基糖苷类获得性耐药基因,5种可移动遗传元件遗传标记;指标聚类分析显示,获得性耐药基因与多种可移动遗传元件相关联;aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅱ与Tn 21/merA、ISpa7、intⅠ1、trbC高度关联,IMP、aph3′-Ⅱb、DHA、aac(6′)-Ⅰb与之也有不同程度的关联。结论 20株MDRPA携带获得性耐药基因可导致对相关抗菌药物耐药,且可移动遗传元件的水平转移使细菌的耐药性在同种细菌菌株之间甚至不同种细菌菌株之间得以快速传播。

关键词：铜绿假单胞菌获得性耐药基因可移动遗传元件指标聚类分析多药耐药

化学致癌物诱导人胚肾上皮细胞转化模型的构建

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环境与健康杂志 2010年第5期27卷 399-403页

作者：唐石伏王庆庞雅琴赖延东肖勇梅张波李道传陈丽萍杨萍陈雯中山大学公共卫生学院预防医学系广东广州510080

目的探讨DNA修复缺陷和癌基因高表达人胚肾上皮细胞转化模型在化学致癌物筛查中的应用价值。方法利用siRNA技术构建DNA损伤修复基因缺陷人胚肾上皮细胞(human embryonic kidney epithelial cell,HEK),采用微核实验检测DNA修复基因缺陷和... 详细信息

目的探讨DNA修复缺陷和癌基因高表达人胚肾上皮细胞转化模型在化学致癌物筛查中的应用价值。方法利用siRNA技术构建DNA损伤修复基因缺陷人胚肾上皮细胞(human embryonic kidney epithelial cell,HEK),采用微核实验检测DNA修复基因缺陷和H-rasV12癌基因高表达对DNA损伤修复功能的影响,并测定已知致癌物[硫酸镍(NiSO4)、N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)]和促癌剂佛波酯(TPA)诱导上述细胞的转化活性,比较两种类型的HEK细胞模型筛查化学致癌物的应用价值。结果应用慢病毒介导的siRNA干扰技术成功构建了HEK-shERCC1、HEK-shERCC2、HEK-shATM和HEK-shMLH1等DNA损伤修复基因缺陷细胞株。与对照细胞HEK-shGFP相比,各DNA修复缺陷HEK细胞的生长速度、细胞形态和琼脂糖克隆的克隆形成率均没有差异,但HEK-sh ERCC2和HEK-shATM细胞对MMC(mitomycin C,MMC)所致遗传损伤的修复能力显著降低,1.0μg/ml MMC处理后,HEK-shERCC2和HEK-shATM细胞的微核率比对照细胞HEK-shGFP分别增加了34‰和30‰(P<0.05)。2μmol/L MNNG、400μmol/L NiSO4和800ng/ml TPA诱导HEKR细胞转化的时间分别是8周、8周和11周,但在染毒后20周均未能诱导各DNA损伤修复缺陷HEK细胞发生转化。结论癌基因高表达转化模型用于化学物质致癌活性的筛查,其灵敏性高于DNA修复基因缺陷细胞转化模型。

关键词： DNA损伤修复基因癌基因人胚肾上皮细胞 N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍硫酸镍佛波酯细胞转化

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多药耐药铜绿假单胞菌的菌株亲缘性分析

中华医院感染学杂志 2012年第24期22卷 5434-5436,5440页

作者：刘春明孙一帆韦柳华朱胜波唐石伏马兴璇柳州市中医院检验科广西柳州545001 柳州市工人医院检验科广西柳州545005

目的分析20株多药耐药铜绿假单胞菌(MDRPA)的药敏率及菌株亲缘性关系,为医院感染实时监测提供参考依据。方法收集柳州市三级医院2011年1-12月标本中分离的MDRPA共20株,采用聚合酶链反应(PCR)的方法分析33种β-内酰胺酶基因、15种氨基糖... 详细信息

目的分析20株多药耐药铜绿假单胞菌(MDRPA)的药敏率及菌株亲缘性关系,为医院感染实时监测提供参考依据。方法收集柳州市三级医院2011年1-12月标本中分离的MDRPA共20株,采用聚合酶链反应(PCR)的方法分析33种β-内酰胺酶基因、15种氨基糖苷类修饰酶基因、6种16SrRNA甲基化酶基因、15种可移动遗传元件标记基因、oprD2膜孔蛋白基因,并对检测结果作样本聚类分析。结果 20株多药耐药铜绿假单胞菌对庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率均为60.00%,敏感率均为40.00%;样本聚类分析示存在7个克隆传播。结论 MDRPA携带获得性耐药基因可导致对相关抗菌药物耐药,且可移动遗传元件的水平转移,使细菌的耐药性在同种细菌之间甚至不同种细菌之间得以快速传播。

关键词：多药耐药铜绿假单胞菌亲缘性分析

高表达Twist基因促进人乳腺癌细胞MCF-7干细胞样细胞富集和迁移

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第三军医大学学报 2014年第20期36卷 2083-2086页

作者：周明莉杨佳佳唐石伏杨丽张海龙杜燕娥文思阳柳满然重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的探讨人乳腺癌细胞系MCF-7中高表达Twist基因对MCF-7干细胞特性细胞的影响。方法构建重组质粒pBABE-puro-myc-Twist,HEK293T细胞包装逆转录病毒,并感染MCF-7细胞,通过筛选获得成功转入Twist的MCF-7/Twist细胞和MCF-7/Vector对照细胞... 详细信息

目的探讨人乳腺癌细胞系MCF-7中高表达Twist基因对MCF-7干细胞特性细胞的影响。方法构建重组质粒pBABE-puro-myc-Twist,HEK293T细胞包装逆转录病毒,并感染MCF-7细胞,通过筛选获得成功转入Twist的MCF-7/Twist细胞和MCF-7/Vector对照细胞,再通过长程无血清悬浮培养方法富集具有干细胞特性的乳腺细胞小球(Mammosphere),并通过Western blot法检测myc-Twist及Twist诱导后富集的Mammosphere相关CSC蛋白标记的表达,Transwell法检测细胞的迁移能力。结果成功构建逆转录病毒质粒pBABE-puro-myc-Twist;Twist基因在靶细胞内稳定表达;长程无血清悬浮培养富集出具有干细胞特性的Mammosphere;MCF-7/Twist细胞肿瘤干细胞样细胞富集能力增强(P<0.05);myc-Twist、Twist及SOX2、OCT4蛋白在MCF-7/Twist Mammosphere细胞中表达上调;MCF-7/Twist Mammosphere细胞迁移能力增加(P<0.05)。结论 Twist促进MCF-7肿瘤干细胞样细胞富集能力增强,并促进其迁移。

关键词： Twist 乳腺细胞小球人乳腺癌细胞MCF-7