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甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌临床分离株青霉素结合蛋白2a的克隆表达及鉴定

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中华烧伤杂志 2007年第2期23卷 100-103页

作者：董燕丁国富李斌和生琦颜伟周红王仙园第三军医大学基础部药理学教研室重庆400038 第三军医大学护理系重庆 400038

目的应用基因重组技术对编码甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）临床分离株青霉素结合蛋白2a（PBP2a）的mecA基因片段进行克隆、表达。方法从临床样本巾分离鉴定出MRSA，根据基因文库收录的mecA基因编码序列，针对编码PBP2a第25～66... 详细信息

目的应用基因重组技术对编码甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）临床分离株青霉素结合蛋白2a（PBP2a）的mecA基因片段进行克隆、表达。方法从临床样本巾分离鉴定出MRSA，根据基因文库收录的mecA基因编码序列，针对编码PBP2a第25～668位氨基酸的mecA基因片段设计引物，扩增目的基因片段，克隆至pQE30载体，经酶切鉴定、测序后，再转化***15（pREP4）。采用1mmol／L的异丙硫半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达及鉴定。结果重组表达质粒pQE30-mecA构建成功，基因测序结果显示，扩增的mecA基因DNA片段全长为1932bp，其巾有9个碱基突变。IPTG诱导后6h，聚丙烯酰胺凝胶电泳显示，M15（pQE30-mecA）出现一条相对分子质量约74×10^3的蛋白条带，且一部分以可溶性形式存在；M15（pQE30）未出现特异性蛋白条带。经诱导表达和鉴定证实，表达出的可溶性目的蛋白为PBP2a。结论利用本技术可成功表达MRSA临床分离株中的可溶性PBP2a。

关键词：青霉素结合蛋白质类克隆,分子基因表达甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌

以PBP2a为靶点应用生物传感器技术筛选拮抗MRSA的中药

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以PBP2a为靶点应用生物传感器技术筛选拮抗MRSA的中药

CpG ODN107增强人脑胶质瘤细胞放射敏感性的研究

全国危重病急救医学学术会议

作者：和生琦周红郑江龙宇鹏罗平张蓉刘昱竹第三军医大学药理学教研室

目的：应用生物传感器技术从传统抗炎中药中筛选具有拮抗细菌 PBP2a活性的中药并进行活性物质含量的排序。方法：将可溶性 PBP2a 包被于生物传感器的生物素化样品池以建立靶点,测定115种中药水煎液去鞣质后与 PBP2a 的亲和力;选择亲和... 详细信息

目的：应用生物传感器技术从传统抗炎中药中筛选具有拮抗细菌 PBP2a活性的中药并进行活性物质含量的排序。方法：将可溶性 PBP2a 包被于生物传感器的生物素化样品池以建立靶点,测定115种中药水煎液去鞣质后与 PBP2a 的亲和力;选择亲和力较高的25种药物水提液和醇提液与定量 PBP2a(50 ng·ml-1)37℃混合孵育30 min,再测定其与 PBP2a 的亲和力,以评价中药里活性物质的含量。结果：115种中药中,毛冬青、金荞麦、雷公藤等25种中药与 PBP2a 具有较高亲和力(大于100RU);黄药子、五倍子、半枝莲、山豆根、黄连、草果、核桃根等7种中药中与 PBP2a 特异性结合的活性物质含量较高。结论：应用生物传感器跟踪技术筛选具有结合 PBP2a 作用的中药具有可行性,筛选出的7种中药均含有非鞣质类能与 PBP2a 发生特异性结合作用的活性物质。

关键词： PBP2a MRSA 生物传感器中药亲和力

来源： cnki会议评论

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中华肿瘤防治杂志 2007年第7期14卷 481-484页

作者：颜伟丁国富李斌董燕李军和生琦罗平周红庞学利第三军医大学基础部药理教研室重庆400038 第三军医大学西南医院肿瘤科重庆400038

目的探讨CpG ODN107增加人脑胶质瘤细胞(CHG-5)放射敏感性的作用及可能机制。方法用不同浓度CpG ODN107处理CHG-5细胞,然后经放射线照射,MTT法检测细胞的增殖情况,体外培养集落形成率与细胞划痕法观察细胞的集落形成和迁移能力,ELISA法... 详细信息

目的探讨CpG ODN107增加人脑胶质瘤细胞(CHG-5)放射敏感性的作用及可能机制。方法用不同浓度CpG ODN107处理CHG-5细胞,然后经放射线照射,MTT法检测细胞的增殖情况,体外培养集落形成率与细胞划痕法观察细胞的集落形成和迁移能力,ELISA法检测细胞TNF-α的分泌水平。结果CpG ODN107抑制CHG-5细胞的增殖,并呈量效关系。CpG ODN107(10μg/mL)联合放射线照射,抑制CHG-5细胞的增殖作用最强(0.52±0.76)。CpG ODN107(10μg/mL)同样能抑制CHG-5细胞增殖和迁移,并且增加了TNF-α的分泌,在联合照射后作用更加显著(193±0.58)pg/mL。结论CpG ODN107对CHG-5有明显的放射增敏作用,其机制可能与CpG ODN107增强肿瘤细胞TNF-α的分泌有关。

关键词： CpG ODN107 人脑胶质瘤细胞放射敏感性研究

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电动公交车队置换与充电设施布局协同优化

中国公路学报 2024年第4期37卷 72-83页

作者：王玉生罗欣欣单香琦南京信息工程大学管理工程学院江苏南京210044

城市公交电动化可以有效缓解燃油车带来的空气污染和对化石能源的依赖,是公交行业发展的必然趋势。为此,将电动公交车队置换与充电设施布局进行统筹优化,以公交车队全生命周期成本和充电设施布局成本之和最小化为目标,基于时间和空间维... 详细信息

城市公交电动化可以有效缓解燃油车带来的空气污染和对化石能源的依赖,是公交行业发展的必然趋势。为此,将电动公交车队置换与充电设施布局进行统筹优化,以公交车队全生命周期成本和充电设施布局成本之和最小化为目标,基于时间和空间维度,构建电动公交车队置换与充电设施布局协同优化模型。根据模型特点,通过等价线性变换,将协同优化模型转换为混合整数线性规划模型。为验证协同优化模型的有效性,以江苏省江阴市公交网络为例,设计不同参数值情形下的数值试验。研究结果表明:在本案例参数设置下,协同优化决策获得的公交车队置换方案和充电设施布局方案比单独优化方案的总成本减少467 044.3元,具有较好的成本效益。在预算有限且排放限制要求不严格的情况下,公交运营商通常会购买更有价格优势的燃油公交车。随着电池技术的进步,电动公交车的采购价格有望下降,公交运营商会逐渐减少燃油车和混合动力车的购买,转而选择更环保的电动公交车。此外,公交车队的电动化进程需要与充电设施的建设相协调匹配,确保充电设施能够满足电动公交车的充电需求。政府可以通过增加CO_(2)的社会成本,促使运营商加速公交车队的电动化进程。研究成果为城市公交车队运营管理和充电基础设施建设提供了决策支持,为推进城市公交电动化进程提供了政策建议。

关键词：交通工程公交电动化协同优化模型公交车队置换充电设施布局

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青蒿琥酯对细菌脓毒症模型小鼠的保护作用

青蒿琥酯对细菌脓毒症模型小鼠的保护作用

青霉素结合蛋白2a C-末端在大肠杆菌M15中的表达、纯化及鉴定

全国危重病急救医学学术会议

作者：周红张蓉张乐之李军丁国富和生琦罗平第三军医大学药理学教研室

目的：观察抗疟药青蒿琥酯对脓毒症模型小鼠的保护作用,探讨其保护作用可能的机制。方法：采用热灭活大肠杆菌建立脓毒症小鼠模型,观察青蒿琥酯对小鼠生存率的影响;采用 ELISA 法和鲎试剂动态浊度法在体研究青蒿琥酯对脓毒症小鼠血清 T... 详细信息

目的：观察抗疟药青蒿琥酯对脓毒症模型小鼠的保护作用,探讨其保护作用可能的机制。方法：采用热灭活大肠杆菌建立脓毒症小鼠模型,观察青蒿琥酯对小鼠生存率的影响;采用 ELISA 法和鲎试剂动态浊度法在体研究青蒿琥酯对脓毒症小鼠血清 TNF-α及内毒素水平的影响;采用小鼠腹腔巨噬细胞和 RAW264．7细胞从离体水平观察青蒿琥酯对不同致炎因子 LPS、CpG ODN 和热灭活大肠杆菌诱导细胞因子 TNF-α和 IL-6 释放的影响;采用生物传感器技术、流式细胞技术及 RT-PCR 分别研究青蒿琥酯与 LPS 和 CpG ODN 的直接结合、对细胞表面结合及内吞及 TLR4和 TLR9 mRNA 表达的影响。结果：青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌脓毒症小鼠具有明显保护作用,可明显降低血清 TNF-α及内毒素水平;青蒿琥酯在体外不能直接中和或结合 LPS 和 CpG ODN,但可抑制抑制热灭活大肠杆菌、LPS 和 CpG ODN1826诱导的促炎细胞因子 TNF-、IL-6 的释放;青蒿琥酯对细胞内吞或表面结合没有影响,但可抑制热灭活大肠杆菌、LPS 和 CpG ODN1826诱导的 RAW264．7细胞 TLR4和 TLR9 mRNA 高表达。结论：青蒿琥酯可通过降低血清 TNF-α释放及内毒素水平保护大肠杆菌脓毒症模型小鼠,其作用可能与降低 TLR4和 TLR9mRNA 表达有关。

关键词：青蒿琥酯热灭活大肠杆菌 CpG ODN LPS 脓毒症 TLR4 TLR9 细胞因子

来源： cnki会议评论

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创伤外科杂志 2007年第1期9卷 28-31页

作者：和生琦丁国富李斌李军罗平董燕张蓉颜伟周红第三军医大学药理教研室重庆400038

目的构建含目的基因mecA C末端的重组子并在大肠杆菌M15中进行蛋白表达。方法采用PCR方法扩增mecA C末端DNA,将其与表达载体pQE30连接;再通过PCR及双酶切鉴定连接产物。将含目的基因片段的阳性重组质粒转化大肠杆菌M15后,用1mmol／L的I... 详细信息

目的构建含目的基因mecA C末端的重组子并在大肠杆菌M15中进行蛋白表达。方法采用PCR方法扩增mecA C末端DNA,将其与表达载体pQE30连接;再通过PCR及双酶切鉴定连接产物。将含目的基因片段的阳性重组质粒转化大肠杆菌M15后,用1mmol／L的IPTG进行诱导表达。应用Ni-NTA琼脂糖进行亲和层析纯化目的蛋白,并用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行鉴定。结果成功构建pQE30-mecA重组表达质粒,转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达,亲和层析纯化获得分子量为39．7kDa的蛋白;Western blotting和肽指纹图谱证实该蛋白为带有多聚组氨酸标签的融合蛋白。结论在大肠杆菌内成功表达具有活性的PBP2a,为后期研究和开发抗MRSA药物奠定了基础。

关键词：金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2a 大肠杆菌 mecA基因

MRSA临床分离株青霉素结合蛋白2a的克隆、表达及鉴定

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MRSA临床分离株青霉素结合蛋白2a的克隆、表达及鉴定

青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用

第五届全国烧伤救治专题研讨会

作者：董燕丁国富李斌和生琦颜伟周红王仙园重庆第三军医大学基础部药理教研室

目的对编码耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)临床分离株青霉素结合蛋白2a(PBP2a)的 mecA 基因片段进行克隆、表达。方法从临床上分离鉴定出 MRSA,根据基因文库收录的 mecA 基因的编码序列,针对编码 PBP2a 25～668位氨基酸的 mecA 基因片...

目的对编码耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)临床分离株青霉素结合蛋白2a(PBP2a)的 mecA 基因片段进行克隆、表达。方法从临床上分离鉴定出 MRSA,根据基因文库收录的 mecA 基因的编码序列,针对编码 PBP2a 25～668位氨基酸的 mecA 基因片段设计引物,扩增目的基因片段,

关键词：

来源： cnki会议评论

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中国临床药理学与治疗学 2007年第2期12卷 156-158页

作者：张蓉李斌张乐之李军丁国富和生琦罗平周红第三军医大学基础部药理教研室重庆400038

目的:观察青蒿琥酯(Artesunate,AS)对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用以及对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6的影响。方法:采用尾静脉注射LD90剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠,于注射热灭活大肠杆菌后0、4、24、48... 详细信息

目的:观察青蒿琥酯(Artesunate,AS)对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用以及对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6的影响。方法:采用尾静脉注射LD90剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠,于注射热灭活大肠杆菌后0、4、24、48h重复肌肉注射AS,观察给药后7d内小鼠的死亡率;体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,培养体系中预先加入不同浓度AS2h后,观察AS对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6情况。结果:AS可明显推迟热灭活大肠杆菌攻击小鼠的死亡时间,并降低小鼠死亡率,死亡率由100%降低至50%(P<0.05)。预先加入的AS能明显抑制热灭活大肠杆菌诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6,并呈明显量效关系。MTT实验结果显示24h内AS对细胞活力无影响。结论:AS对热灭活大肠杆菌攻击小鼠具有显著保护作用,该保护作用可能与其明显抑制促炎细胞因子释放有关。

关键词：青蒿琥酯热灭活大肠杆菌小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-6

应用生物传感器技术筛选拮抗细菌肽聚糖的中药

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重庆医学 2007年第3期36卷 230-232页

作者：龙宇鹏和生琦陈益国张向武郭毅斌伏建峰郑江第三军医大学西南医院综合实验研究中心重庆400038

目的应用生物传感器技术从传统抗炎中药中筛选具有拮抗细菌肽聚糖(peptidoglycan,PGN)活性的中药并对其进行活性物质含量的排序。方法将可溶性PGN包被于生物传感器的生物素化样品池以建立靶点,测定114种中药水提液去鞣质后与PGN的亲和力... 详细信息

目的应用生物传感器技术从传统抗炎中药中筛选具有拮抗细菌肽聚糖(peptidoglycan,PGN)活性的中药并对其进行活性物质含量的排序。方法将可溶性PGN包被于生物传感器的生物素化样品池以建立靶点,测定114种中药水提液去鞣质后与PGN的亲和力;选择亲和力较高的26种药物与定量PGN(50ng/ml)37℃混合孵育30min,再测定其与PGN的亲和力,以评价药物水提液中活性物质的含量。结果114种中药中,侧柏叶、黄连、牡丹皮等26种中药与PGN具有较高亲和力(>100RU);侧柏叶、地骨皮、毛冬青等9种中药中与PGN特异性结合的活性物质含量较高。结论生物传感器跟踪技术快速、高效、客观,应用其筛选具有结合PGN作用的中药具有可行性,筛选出的9种中药均含有非鞣质类能与PGN发生特异性结合作用的活性物质。

关键词：肽聚糖生物传感器中药亲和力