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卡洛芬注射液安全性研究

中兽医医药杂志 2024年第4期43卷 67-72页

作者：任丽花吕让刘冬李卓伟李红园瞿红颖张沛杨国辉王德功河北远征药业有限公司、河北省兽药技术创新中心、石家庄市兽药技术创新中心河北石家庄050041

为了研究卡洛芬注射液的安全性,选用新西兰白兔,采用皮下注射方法进行刺激试验,选用豚鼠进行皮肤致敏试验和全身致敏试验,观察卡洛芬注射液对白兔和豚鼠的安全性。结果表明,白兔每天皮下注射卡洛芬注射液(10 mg/kg)1次,连续7 d,受试物... 详细信息

为了研究卡洛芬注射液的安全性,选用新西兰白兔,采用皮下注射方法进行刺激试验,选用豚鼠进行皮肤致敏试验和全身致敏试验,观察卡洛芬注射液对白兔和豚鼠的安全性。结果表明,白兔每天皮下注射卡洛芬注射液(10 mg/kg)1次,连续7 d,受试物组和参比品组注射部位均出现发红和溃烂,组织病理学观察可见注射部位溃疡、真皮/皮下/肌肉炎症伴纤维化、表皮增生,恢复期末未见完全恢复,但受试物组恢复程度比参比品组略好;受试物组和参比品组的卡洛芬注射液激发豚鼠皮肤致敏试验和全身致敏试验中均未引起蓝斑等过敏症状。综上所述,受试物和参比品的卡洛芬注射液对动物注射部位均有明显的刺激性,但不会产生皮肤过敏反应,两者安全性基本一致。

关键词：卡洛芬注射液安全性刺激性试验致敏试验

稳定表达TMPRSS2的MDCK细胞系的建立及流感病毒在该细胞系上的增殖特性研究

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稳定表达TMPRSS2的MDCK细胞系的建立及流感病毒在该细胞系上的增...

作者：吕让中国农业科学院

学位级别：硕士

流感病毒表面糖蛋白血凝素(hemagglutinin, HA)在流感病毒感染过程中发挥着重要作用。HA最初以前体蛋白HA0的形式合成,在病毒感染宿主细胞时,HA0首先被宿主蛋白酶切割,形成HA1和HA2亚基,并由此获得膜融合的能力,从而介导流感病毒感染宿... 详细信息

流感病毒表面糖蛋白血凝素(hemagglutinin, HA)在流感病毒感染过程中发挥着重要作用。HA最初以前体蛋白HA0的形式合成,在病毒感染宿主细胞时,HA0首先被宿主蛋白酶切割,形成HA1和HA2亚基,并由此获得膜融合的能力,从而介导流感病毒感染宿主细胞。因此,HA被宿主细胞蛋白酶切割活化是流感病毒感染和扩散的关键步骤,同时也是流感病毒致病性的决定性因素。有研究表明,Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶(TTSPs)成员之一的跨膜丝氨酸蛋白酶2(transmembrane protease serine S1member2, TMPRSS2)具有切割活化流感病毒HA的作用。MDCK细胞是培养流感病毒的理想细胞系,具有易于培养、病毒产量高、对不同亚型流感病毒敏感等优点,并且在细胞表面同时存在着对人流感病毒敏感的a-2,6连接型受体和对禽流感病毒敏感的α-2,3连接型受体。然而,MDCK细胞本身并不合成可以切割活化流感病毒HA的蛋白酶,因此,在培养流感病毒特别是低致病性禽流感病毒(Low Pathogenic Avian Influenza Virus, LPAIV)时,需要添加适量胰酶。但是各批次胰酶质量上的差异以及在添加胰酶的操作过程中可能造成的细胞污染给进一步的研究以及流感疫苗的大规模生产带来了不同程度的困难,因此,对MDCK细胞进行改造,使其自身能够合成胰酶样蛋白酶,可以在很大程度上解决这一问题。为此,本研究从Calu-3细胞中克隆TMPRSS2基因,克隆于逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒pLXSN-TMPRSS2。将重组质粒pLXSN-TMPRSS2与辅助质粒pGP和pE-ampho共转染293T细胞,获得逆转录病毒颗粒。将逆转录病毒颗粒感染MDCK细胞,通过G418压力筛选,获得了工程细胞系MDCK-TMPRSS2。对第15代细胞进行RT-PCR以及间接免疫荧光(IFA)鉴定,结果显示,该细胞系可以稳定表达TMPRSS2基因。H9N2及H5N1亚型禽流感病毒感染实验表明,该细胞系支持流感病毒在无外源性胰酶添加条件下的增殖。红细胞凝集试验以及IFA结果表明,在培养流感病毒时,TMPRSS2基因的表达并没有影响MDCK细胞对流感病毒的敏感性,由MDCK-TMPRSS2细胞系培养的流感病毒与采用传统方法培养的流感病毒具有相同的滴度,进一步表明MDCK-TMPRSS2细胞系具有应用于规模化流感病毒生产的潜力。传统的鸡胚培养系统生产流感疫苗的方法已经被证明存在诸多弊端,细胞培养型流感疫苗受到越来越多的关注,微载体技术以及细胞悬浮培养技术已经应用于流感疫苗的生产,且制备工艺均取得了创新和突破。对细胞进行改造使其更适合应用于流感疫苗的大规模生产同样是对疫苗制备工艺的改进。本研究建立的稳定表达TMPRSS2基因的MDCK细胞系,充分支持在无外源胰酶条件下流感病毒的增殖和扩散,为体外培养流感病毒提供了一个改良的细胞系,为大规模生产流感疫苗提供了一个可靠的备选细胞株。

关键词：流感病毒血凝素跨膜丝氨酸蛋白酶2 MDCK细胞系流感疫苗

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胍基乙酸在反刍动物应用上的研究进展

北方牧业 2024年第9期 19-19页

作者：李卓伟杨国辉张沛王德功刘冬任丽花吕让瞿红颖河北远征药业有限公司河北石家庄050000 河北省兽药工程技术研究中心河北石家庄050000 石家庄市兽药工程技术研究中心河北石家庄050000

胍基乙酸(Guanidinoacetic acid,GAA),又称乙酸胍,是一种存在于动物体内的天然的氨基酸衍生物,具有增强肌肉以及神经等组织功能的作用。胍基乙酸具有稳定性好,可溶于水的特征,因此在临床使用较方便。胍基乙酸在动物机体内,作为肌酸的唯... 详细信息

胍基乙酸(Guanidinoacetic acid,GAA),又称乙酸胍,是一种存在于动物体内的天然的氨基酸衍生物,具有增强肌肉以及神经等组织功能的作用。胍基乙酸具有稳定性好,可溶于水的特征,因此在临床使用较方便。胍基乙酸在动物机体内,作为肌酸的唯一前体物质来合成肌酸,同时胍基乙酸还可以通过转移到肌肉等组织器官内合成磷酸肌酸来为组织器官提供能量,帮助动物健康成长。农业农村部已于2014年将胍基乙酸正式批准为新型营养性饲料添加剂。胍基乙酸作为一种饲料添加剂,因为在动物养殖生产中有较好的促生长作用,同时具有临床使用安全性,因而被广泛应用。现对胍基乙酸在反刍动物上的应用近况综述如下。

关键词：胍基乙酸饲料添加剂反刍动物动物养殖促生长作用氨基酸衍生物组织器官磷酸肌酸

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初家镇大樱桃栽培经验

烟台果树 1997年第4期 41-42页

作者：吕让庄莱山区初家镇果树站 264003

莱山区初家镇地处烟台市东郊,辖46个自然村,面积72km^2,5.5万人口。大樱桃栽培面积6000亩,年产80万kg,栽培品种40多个。有的村仅大樱桃一项,户均年收入超万余元,人均三千多元。

关键词：樱桃品种大樱桃栽培初家镇

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试论活跃初中语文课堂氛围的策略

学周刊 2017年第15期 174-175页

作者：吕让天甘肃省会宁县太平店镇教育管理中心甘肃会宁730700

在语文教学中,课堂气氛是极其重要的教学基调,有了良好的课堂氛围,学生就能积极地参与到教学中来,勇于表达自己的想法和见解,并在这个过程中获得自身水平的提高。活跃课堂气氛的方法有很多,教师要结合学生的实际需求进行精心创设。

关键词：初中语文课堂氛围教学方法

稳定表达跨膜丝氨酸蛋白酶2基因的MDCK细胞系的建立与应用

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稳定表达跨膜丝氨酸蛋白酶2基因的MDCK细胞系的建立与应用

H3N8亚型马流感病毒HA基因重组腺病毒的构建及其生物学特性的研究

中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：吕让刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

引言流感病毒血凝素(HA)被宿主蛋白酶切割活化是流感病毒复制和扩散的关键步骤。TMPRSS2属于Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶成员,能够参与流感病毒HA0的切割活化。TMPRSS2能够在无胰酶条件下支持流感病毒在MDCK细胞中的扩散,TMPRSS2切割活化H1、H...

引言流感病毒血凝素(HA)被宿主蛋白酶切割活化是流感病毒复制和扩散的关键步骤。TMPRSS2属于Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶成员,能够参与流感病毒HA0的切割活化。TMPRSS2能够在无胰酶条件下支持流感病毒在MDCK细胞中的扩散,TMPRSS2切割活化H1、H3和H5亚型流感病毒的HA蛋白。本研究通过构建重组逆转录病毒表达质粒pLXSN-TMPRSS2并转染MDCK细胞,从而建立了稳定表达

关键词：

来源： cnki会议评论

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中国兽医科学 2014年第4期44卷 362-366页

作者：刘春国刘明刘飞王伟刘大飞刘彦云吕让相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院黑龙江哈尔滨150001 上海兽医研究所上海200241

为了构建表达H3N8亚型马流感病毒HA蛋白的重组腺病毒,把A/Equine/Xinjiang/3/2007(H3N8)的HA基因克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,将重组穿梭质粒pShuttle-XJ3HA电转化至BJ5183感受态细胞中,与人5型腺病毒骨架质粒同源重组,获得了... 详细信息

为了构建表达H3N8亚型马流感病毒HA蛋白的重组腺病毒,把A/Equine/Xinjiang/3/2007(H3N8)的HA基因克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,将重组穿梭质粒pShuttle-XJ3HA电转化至BJ5183感受态细胞中,与人5型腺病毒骨架质粒同源重组,获得了重组腺病毒质粒pAd-XJ3HA。该质粒线性化后转染AD293细胞,包装重组腺病毒rAd-XJ3HA。通过PCR、间接免疫荧光试验(IFA)和Western-blot鉴定,证明HA基因已整合到腺病毒载体基因组中,并能够有效表达。该重组腺病毒在AD293细胞上连续传15代后仍表现出良好的遗传稳定性。马流感病毒HA基因重组腺病毒的成功构建为我国马流感重组病毒活载体疫苗的研究提供了技术储备。

关键词：马流感病毒 H3N8亚型 HA基因重组腺病毒生物学特性

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LJK6105CH型团体客车

LJK6105CH型团体客车

稳定表达跨膜丝氨酸蛋白酶2基因的MDCK细胞系的建立

2004年中国客车行业发展论坛暨中国客车学术年会

作者：吕让杰高凤志黑龙江客车厂黑龙江客车厂

简要介绍LJK6105CH机关团体客车的整车造型.结构设计,工艺特点及主要性能参数。

关键词：团体客车造型性能参数

来源： cnki会议评论

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中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 704-707页

作者：吕让王丹宋彩玲齐宾宾刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省医院黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为建立稳定表达跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)基因的MDCK细胞系,本研究采用RT-PCR扩增TMPRSS2基因,克隆于逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒pLXSN-TMPRSS2。采用脂质体转染的方式将重组质粒pLXSN-TMPRSS2、pGP和pE-ampho共转染293T细胞... 详细信息

为建立稳定表达跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)基因的MDCK细胞系,本研究采用RT-PCR扩增TMPRSS2基因,克隆于逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒pLXSN-TMPRSS2。采用脂质体转染的方式将重组质粒pLXSN-TMPRSS2、pGP和pE-ampho共转染293T细胞,获得逆转录病毒样颗粒。将逆转录病毒样颗粒感染MDCK细胞,经G418加压筛选和有限稀释法克隆及RT-PCR和间接免疫荧光(IFA)等试验的鉴定,建立了稳定表达TMPRSS2基因的MDCK细胞系。此外,红细胞凝集试验和IFA结果还显示,流感病毒可以在无外源胰酶存在的条件下在该细胞系中增殖,从而为流感细胞培养型病毒株的大规模生产奠定了基础。

关键词：跨膜丝氨酸蛋白酶2 逆转录病毒 MDCK细胞系 TMPRSS2