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EgM9免疫犬产生抗体变化规律的观察

中国人兽共患病学报 2010年第4期26卷 325-329页

作者：郭宝平张壮志古努尔.吐尔逊吐尔洪.依米提石保新哈斯也提.艾力王进成刘斌张文宝张玲阿依努尔阿布里米提新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐830000 新疆疾病预防控制中心乌鲁木齐830011 新疆实验动物研究中心乌鲁木齐830002 乌鲁木齐市动物卫生监督所乌鲁木齐830000

目的用重组表达蛋白EgM9免疫实验犬,观察免疫犬的抗体变化及EgM9的免疫效果。方法用100μgEgM9及5mg的GST并辅以佐剂QuilA分别免疫实验犬,定期收集血清,以间接ELISA法检测血清中IgG及其亚类、IgM、IgA与IgE;感染45d后剖检实验犬,统计犬... 详细信息

目的用重组表达蛋白EgM9免疫实验犬,观察免疫犬的抗体变化及EgM9的免疫效果。方法用100μgEgM9及5mg的GST并辅以佐剂QuilA分别免疫实验犬,定期收集血清,以间接ELISA法检测血清中IgG及其亚类、IgM、IgA与IgE;感染45d后剖检实验犬,统计犬体内虫体数量。结果免疫组和对照组血清IgG与IgA差异显著(P0.05);相对于对照组,免疫组的保护率达86%。结论用重组蛋白EgM9免疫犬后能产生很高的抗体水平,可以抑制细粒棘球绦虫的发育,EgM9或许有望作为一种有效的候选疫苗成分用于包虫病的防治。

关键词： EgM9 免疫机理抗体细粒棘球绦虫犬

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细粒棘球绦虫成虫表膜糖抗原的免疫性分析

中国农业科学 2012年第22期45卷 4713-4719页

作者：古努尔·吐尔逊米晓云张壮志石保新吐尔洪.依米提金映红张妹程小波张旭赵莉张文宝新疆畜牧科学院兽医研究所新疆农业大学

【目的】探索细粒棘球绦虫成虫表膜糖抗原的免疫性。【方法】细粒棘球绦虫成虫虫体冻融产物,经蛋白酶K消化,离心上清作为粗提表膜糖抗原,SDS-PAGE鉴定糖抗原成分,硫酸-蒽酮法测定多糖浓度,ELISA、Western-blot和IFA法分别检测免疫小鼠... 详细信息

【目的】探索细粒棘球绦虫成虫表膜糖抗原的免疫性。【方法】细粒棘球绦虫成虫虫体冻融产物,经蛋白酶K消化,离心上清作为粗提表膜糖抗原,SDS-PAGE鉴定糖抗原成分,硫酸-蒽酮法测定多糖浓度,ELISA、Western-blot和IFA法分别检测免疫小鼠抗血清抗体效价和特异性以及确定抗原在虫体组织中的位置。【结果】SDS-PAGE图谱显示无蛋白条带出现,表明成虫膜蛋白被蛋白酶K完全降解;制备的糖抗原浓度为***-1,初步确定为糖抗原。ELISA结果显示,随着免疫次数增加,抗血清中特异性抗体(IgG、IgM和IgA)效价也随之升高。与阴性血清相比,IgG、IgM和IgA的P/N值分别为4.9、3.2和6.4。未检测到特异性IgE。Wenstern-blot检测结果显示,抗血清与原头蚴粗提虫体蛋白、细粒棘球绦虫成虫表膜蛋白、表膜糖抗原有效识别。IFA显色结果显示糖抗原在细粒棘球绦虫虫体表膜中有表达。【结论】经蛋白酶K消化后提取的细粒棘球绦虫表膜糖抗原具有良好的的免疫原性和免疫反应性,有望用于包虫病的诊断和免疫。

关键词：细粒棘球绦虫表膜糖抗原抗血清

细粒棘球绦虫表膜糖抗原HSP70基因的克隆、表达及免疫特性分析

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新疆农业科学 2013年第5期50卷 949-958页

作者：古努尔.吐尔逊米晓云赵莉张旭张壮志石保新吐尔洪.依米提艾力麦麦提.麦麦提力马合木提.塔力普新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐830000 乌鲁木齐米东区动物卫生监督所乌鲁木齐831400 乌鲁木齐市绒山羊研究所乌鲁木齐830000

【目的】克隆细粒棘球绦虫(Eg)表膜糖抗原的热休克蛋白70(HSP70)基因,构建原核表达载体,鉴定EgHSP70蛋白的免疫学特性。【方法】以Eg表膜糖抗原高免鼠血清为探针,从Eg成虫cDNA文库中筛选得到阳性克隆EgHSP70。构建EgHSP70基因的原核表... 详细信息

【目的】克隆细粒棘球绦虫(Eg)表膜糖抗原的热休克蛋白70(HSP70)基因,构建原核表达载体,鉴定EgHSP70蛋白的免疫学特性。【方法】以Eg表膜糖抗原高免鼠血清为探针,从Eg成虫cDNA文库中筛选得到阳性克隆EgHSP70。构建EgHSP70基因的原核表达载体pET28a-EgHSP70,诱导表达重组蛋白,纯化,免疫鼠,ELISA、Western-blot和IFA法分别检测血清抗体效价、特异性及抗原在虫体组织中的位置。【结果】从Eg成虫cDNA文库中筛选获得特异性EgHSP70基因,酶切和测序结果均表明该基因已克隆到pET28a。EgHSP70融合蛋白在A600=0.6,0.4 mmol IPTG,37℃表达5 h为最佳表达。经His亲和层析法纯化获得了HSP70融合蛋白相对分子质量约为33 kDa。免疫小鼠可产生高滴度(最高1:640 000)特异性抗体。Westernblot分析结果表明,制备的抗血清与EgHSP70融合蛋白、原头蚴粗提抗原、Eg虫体蛋白和Eg虫体表面蛋白均能特异性结合,其他带科绦虫有此蛋白表达IFA检测结果证实EgHSP70在细粒棘球绦虫成虫体表膜及体表内有表达。【结论】实验得到的EgHSP7O融合蛋白具有较好的免疫原性和抗原性,可用于研制包虫病疫苗及相关诊断试剂为包虫病的防控提供技术支持。

关键词：细粒棘球绦虫成虫cDNA文库细粒棘球绦虫表膜糖抗原热休克蛋白HSP70 EgHSP70融合蛋白免疫学特性

EgM9蛋白免疫犬肠系膜淋巴结中抗体的免疫荧光组织化学定位

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中国兽医科学 2010年第4期40卷 406-409页

作者：石保新巫剑张壮志张文宝米晓云古努尔.吐尔逊岳城吐尔洪.依米提张旭赵莉郝呈普新疆畜牧科学院兽医研究所新疆乌鲁木齐830000 新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052

以EgM蛋白免疫犬、EgM蛋白免疫后感染原头蚴犬及感染原头蚴犬3个组的肠系膜淋巴结为材料,用FITC标记羊抗犬IgG和羊抗兔IgG,分别采用一步法和三步法免疫荧光技术检测EgM蛋白免疫犬肠系膜淋巴结上的IgG和特异性IgG。结果显示,EgM蛋白免疫... 详细信息

以EgM蛋白免疫犬、EgM蛋白免疫后感染原头蚴犬及感染原头蚴犬3个组的肠系膜淋巴结为材料,用FITC标记羊抗犬IgG和羊抗兔IgG,分别采用一步法和三步法免疫荧光技术检测EgM蛋白免疫犬肠系膜淋巴结上的IgG和特异性IgG。结果显示,EgM蛋白免疫犬、EgM蛋白免疫后感染原头蚴犬的肠系膜淋巴结组织有清楚可见的荧光点,而感染原头蚴犬的肠系膜淋巴结荧光较弱。两种方法均证明,EgM蛋白免疫犬后在其肠系膜淋巴结中可以产生特异性抗体。

关键词：细粒棘球绦虫原头蚴犬抗体反应免疫荧光组织化学

多头绦虫膜蛋白(45M)对羊脑多头蚴病的免疫保护效果

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第4期27卷 336-339页

作者：张壮志石保新由弘赵莉吐尔洪.依米提王进成张文宝崔德胜艾尔肯郭金梁新疆畜牧科学院兽医研究所新疆巴州种畜场新疆华兴种畜繁育有限公司

目的观察多头绦虫膜蛋白(45M)对羊脑多头蚴病的免疫保护效果。方法12只新疆哈萨克羊随机均分为免疫组和对照组,免疫组用重组多头绦虫膜蛋白(45M)与佐剂乳化后颈部皮下2点免疫,抗原免疫剂量为50μg/只,注射体积为1ml,共免疫4次,每次间隔... 详细信息

目的观察多头绦虫膜蛋白(45M)对羊脑多头蚴病的免疫保护效果。方法12只新疆哈萨克羊随机均分为免疫组和对照组,免疫组用重组多头绦虫膜蛋白(45M)与佐剂乳化后颈部皮下2点免疫,抗原免疫剂量为50μg/只,注射体积为1ml,共免疫4次,每次间隔3周。对照组以谷胱甘肽硫转移酶(GST)表达物代替免疫抗原同法免疫。定时采集羊血,分离血清。ELISA法检测血清中IgG和IgM的抗体水平。于末次免疫后105d,免疫组和对照组每羊经口攻击感染5000个多头绦虫虫卵,感染2周后剖检羊脑多头蚴囊数,计算减囊率。将经孵化激活的六钩蚴分别置于含10%两组免疫攻击感染羊血清的RPMI1640培养液中培养,观察两组羊血清对多头绦虫六钩蚴的杀伤情况。结果免疫组有3只羊感染多头蚴包囊,平均囊荷数为1.5个,囊平均直径为2.2mm,免疫组减囊率为68.9%。六钩蚴与免疫组羊血清共培养72h后,90%死亡,被杀伤的六钩蚴出现萎缩,或膨胀致使内部结构模糊。ELISA检测结果显示,在第4次免疫后(第9周),免疫组IgG抗体水平达到最高(2.32±0.76),与对照组(0.70±0.42)间的差异有统计学意义(t=4.47,P<0.01)。经口感染六钩蚴后(第24周),免疫组IgG和IgM抗体水平(1.53±0.81,0.90±0.26)仍显著高于对照组(0.64±0.43,0.43±0.15)(P<0.01)。结论重组蛋白45M可引起机体较强的体液免疫反应。

关键词：多头绦虫 ELISA 免疫保护重组膜蛋白

成熟清除疗法联合花椒散外洗剂治疗涩味黏液质型DSPN的SNCV及MNCV影响观察研究

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成熟清除疗法联合花椒散外洗剂治疗涩味黏液质型DSPN的SNCV及MNCV...

作者：买买提依明·买买提吐尔洪新疆医科大学

学位级别：硕士

Woven EndoBridge装置治疗颅内复杂动脉瘤的预后研究进展

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中华神经外科杂志 2024年第7期40卷 740-744页

作者：张福峻晖米热扎提·吐尔洪杨新健首都医科大学北京市神经外科研究所北京100070 首都医科大学附属北京天坛医院神经外科学中心北京100070

目前,血管内治疗已成为颅内动脉瘤的主要治疗方法。但是,对于颅内分叉部宽颈和破裂等复杂动脉瘤,传统的血管内治疗方式难以获得良好的预后。Woven EndoBridge(WEB)装置是专为治疗复杂颅内动脉瘤而设计,是目前最常用的瘤内扰流装置。相... 详细信息

目前,血管内治疗已成为颅内动脉瘤的主要治疗方法。但是,对于颅内分叉部宽颈和破裂等复杂动脉瘤,传统的血管内治疗方式难以获得良好的预后。Woven EndoBridge(WEB)装置是专为治疗复杂颅内动脉瘤而设计,是目前最常用的瘤内扰流装置。相较于传统的血管内治疗,WEB装置不仅操作简便,而且具有较高的金属覆盖率和较低的并发症发生率等优势。本文主要针对WEB装置治疗颅内复杂动脉瘤的临床预后进行综述,以期为该类疾病的临床治疗提供循证依据。

关键词： WEB 颅内动脉瘤预后研究扰流装置分叉部

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多头蚴病保护性基因的分离与表达

中国人兽共患病学报 2008年第9期24卷 846-850,854页

作者：由弘张壮志赵莉石保新吐尔洪.依米提王进成张文宝崔德胜艾尔肯郭金梁新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐830000 巴州种畜场新疆华兴种畜繁育有限公司

目的分离与表达多头绦虫（Taenia multiceps）基因45m，确定其免疫原性及在虫体不同发育阶段的表达。方法通过对绦虫同源基因序列分析设计引物，运用RT—PCR的方法，首次从绵羊多头绦虫的幼虫阶段分离到新的基因45m，将其克隆到pET41b... 详细信息

目的分离与表达多头绦虫（Taenia multiceps）基因45m，确定其免疫原性及在虫体不同发育阶段的表达。方法通过对绦虫同源基因序列分析设计引物，运用RT—PCR的方法，首次从绵羊多头绦虫的幼虫阶段分离到新的基因45m，将其克隆到pET41b表达载体中，获得了含正确读码框的重组质粒，将表达蛋白初步运用于动物免疫试验。结果45m基因长度为698bp，编码232个氨基酸。表达的重组蛋白分子量约为63kD，表达产量可达100～120mg／L。其蛋白序列与已知抗羊带绦虫（45W）和牛带绦虫保护性抗原的同源性分别为89％和85％。本动物绵羊的免疫接种试验表明该蛋白可有效激起机体的抗原抗体反应，其抗血清可以与多头绦虫的成虫和幼虫抗原总蛋白在63kD处发生特异性反应。结论45m蛋白可能具有较强抗原性，该蛋白在虫体的成虫和幼虫阶段均有表达，推测认为45m可能成为多头蚴病的候选疫苗。

关键词：绵羊多头蚴病保护性基因疫苗

用抗虫体表膜抗原抗体测定犬细粒棘球绦虫粪抗原

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畜牧兽医学报 2011年第6期42卷 845-850页

作者：古努尔·吐尔逊米晓云张壮志石保新吐尔洪.依米提张旭巫剑赵莉阿曼古丽·马木提金映红张文宝新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐830000 自治区动物卫生监督所乌鲁木齐830063

利用Echinococcus granulosus(Eg)成虫表膜抗原抗体夹心ELISA方法检测犬细粒棘球绦虫感染的粪抗原。首先提取E g成虫表膜抗原,制备抗E g成虫表膜抗原的血清,然后用间接ELISA和Western blotting方法检测其抗原抗体反应及免疫原性,用间接... 详细信息

利用Echinococcus granulosus(Eg)成虫表膜抗原抗体夹心ELISA方法检测犬细粒棘球绦虫感染的粪抗原。首先提取E g成虫表膜抗原,制备抗E g成虫表膜抗原的血清,然后用间接ELISA和Western blotting方法检测其抗原抗体反应及免疫原性,用间接免疫组化方法对E g成虫表膜蛋白进行组织定位。利用双抗体夹心ELISA方法检测感染E g的犬粪抗原。ELISA结果表明E g成虫表膜抗原具有良好的抗原性并能产生高效价抗体,抗体不与多头绦虫和泡状带绦虫抗原反应;Western blotting结果表明E g成虫表膜抗原与原头蚴、不成熟E g有共同蛋白成分。免疫组化结果证实虫体表膜蛋白分布在虫体表皮。该抗原抗体系统能检测到感染后13d的犬细粒棘球绦虫。结果表明该E g成虫表膜抗原抗体系统可用于诊断犬细粒棘球绦虫感染。

关键词：细粒棘球绦虫成虫表膜抗原抗体双抗体夹心ELISA 粪抗原