细粒棘球绦虫表膜糖抗原HSP70基因的克隆、表达及免疫特性分析

作     者：古努尔.吐尔逊 米晓云 赵莉 张旭 张壮志 石保新 吐尔洪.依米提 艾力麦麦提.麦麦提力 马合木提.塔力普 

作者机构：新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐830000 乌鲁木齐米东区动物卫生监督所乌鲁木齐831400 乌鲁木齐市绒山羊研究所乌鲁木齐830000 

出 版 物：《新疆农业科学》 (Xinjiang Agricultural Sciences)

年 卷 期：2013年第50卷第5期

页      面：949-958页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：新疆少数民族科技人才特殊培养计划科研项目(201023108) 

主　　题：细粒棘球绦虫成虫cDNA文库 细粒棘球绦虫表膜糖抗原 热休克蛋白HSP70 EgHSP70融合蛋白 免疫学特性 

摘      要：【目的】克隆细粒棘球绦虫(Eg)表膜糖抗原的热休克蛋白70(HSP70)基因,构建原核表达载体,鉴定EgHSP70蛋白的免疫学特性。【方法】以Eg表膜糖抗原高免鼠血清为探针,从Eg成虫cDNA文库中筛选得到阳性克隆EgHSP70。构建EgHSP70基因的原核表达载体pET28a-EgHSP70,诱导表达重组蛋白,纯化,免疫鼠,ELISA、Western-blot和IFA法分别检测血清抗体效价、特异性及抗原在虫体组织中的位置。【结果】从Eg成虫cDNA文库中筛选获得特异性EgHSP70基因,酶切和测序结果均表明该基因已克隆到pET28a。EgHSP70融合蛋白在A600=0.6,0.4 mmol IPTG,37℃表达5 h为最佳表达。经His亲和层析法纯化获得了HSP70融合蛋白相对分子质量约为33 kDa。免疫小鼠可产生高滴度(最高1:640 000)特异性抗体。Westernblot分析结果表明,制备的抗血清与EgHSP70融合蛋白、原头蚴粗提抗原、Eg虫体蛋白和Eg虫体表面蛋白均能特异性结合,其他带科绦虫有此蛋白表达IFA检测结果证实EgHSP70在细粒棘球绦虫成虫体表膜及体表内有表达。【结论】实验得到的EgHSP7O融合蛋白具有较好的免疫原性和抗原性,可用于研制包虫病疫苗及相关诊断试剂为包虫病的防控提供技术支持。