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猪流行性腹泻的诊治

甘肃畜牧兽医 2015年第12期45卷 50-51,55页

作者：李叙涟包世俊甘肃农业大学甘肃兰州730070 甘肃省靖远县畜牧兽医局甘肃靖远730600

近几年来,随着畜牧业的不断发展,在生猪养殖过程中,疫病种类不断增多,对生猪的养殖效益产生了严重影响,尤其是仔猪流行性腹泻十分猖獗,给我国养猪业造成了巨大经济损失。作者在分析仔猪流行性腹泻病发病原因和发病机制的基础上,总结了... 详细信息

近几年来,随着畜牧业的不断发展,在生猪养殖过程中,疫病种类不断增多,对生猪的养殖效益产生了严重影响,尤其是仔猪流行性腹泻十分猖獗,给我国养猪业造成了巨大经济损失。作者在分析仔猪流行性腹泻病发病原因和发病机制的基础上,总结了其症状和诊断方法,并提出了有效的预防治疗措施,以供同行参考。

关键词：猪流行性腹泻诊断防治

南非2型口蹄疫病毒VP1蛋白单抗的制备与特性研究

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病毒学报 2024年

作者：朱昱茜石正旺罗俊聪陈婕林永玉席韬张帆石鑫泰郑海学包世俊田宏中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃农业大学动物医学院

为制备南非2型口蹄疫病毒型特异性单克隆抗体，本研究通过原核系统表达南非2型口蹄疫病毒VP1蛋白，亲和层析的方法纯化目的蛋白。将纯化的VP1蛋白使用弗氏佐剂乳化后，免疫Balb/c小鼠，待加强免后取血清效价最稳定的小鼠脾细胞与小鼠骨... 详细信息

为制备南非2型口蹄疫病毒型特异性单克隆抗体，本研究通过原核系统表达南非2型口蹄疫病毒VP1蛋白，亲和层析的方法纯化目的蛋白。将纯化的VP1蛋白使用弗氏佐剂乳化后，免疫Balb/c小鼠，待加强免后取血清效价最稳定的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞进行融合，应用间接ELISA筛选针对南非2型VP1蛋白的单克隆抗体。采用特异性试验、叠加试验和抗体亚型鉴定等方法对筛选的单克隆抗体特性进行分析。结果发现，本研究成功表达南非2型VP1蛋白，筛选出2株能稳定分泌特异性针对南非2型VP1蛋白的杂交瘤细胞株（3B2和6F2），其亚型分别为IgG2a和IgG1，叠加试验结果表明两株单抗的叠加系数大于40%，说明两株单抗针对不同的抗原位点；单抗的效价可达1:256 000，特异性试验证明两株单抗均不与O型、A型口蹄疫病毒及其他常见猪病病毒产生交叉反应。由此可见，本研究制备的单克隆抗体具有良好的特异性和反应性，为南非2型口蹄疫病毒定型诊断和未来疫苗的研制奠定了基础。

关键词：南非2型口蹄疫病毒 VP1蛋白特异性单克隆抗体

临泽县牛羊布氏杆菌病的流行病学调查与血清学检测

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畜牧兽医杂志 2019年第1期38卷 58-60页

作者：王耀东包世俊甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省临泽县畜牧兽医局

为预防临泽县牛羊布氏杆菌病的发生,采用问卷调查和血清学检测的方法对临泽县7个乡镇的奶牛和肉羊养殖情况以及布氏杆菌病的流行情况进行调查。结果发现,本县养殖方式主要是圈养或圈养及放养,养殖户对布病危害和相关法规政策认识不足,... 详细信息

为预防临泽县牛羊布氏杆菌病的发生,采用问卷调查和血清学检测的方法对临泽县7个乡镇的奶牛和肉羊养殖情况以及布氏杆菌病的流行情况进行调查。结果发现,本县养殖方式主要是圈养或圈养及放养,养殖户对布病危害和相关法规政策认识不足,防护消毒措施不重视。在采集的1280份奶牛血样和23115份羊血样中,牛阳性率达0.23%,羊阳性率达0.52%。根据调查结果,提出布病防控的建议和措施。

关键词：临泽县牛羊布氏杆菌病流行病学调查

牛源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及遗传进化分析

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中国兽医科学 2016年第11期46卷 1358-1364页

作者：冯娜高翔肖敏宁建刚邢小勇包世俊甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

为了对兰州市榆中县某奶牛场犊牛疑似肺炎克雷伯氏菌感染病例进行确诊,本研究采集病死犊牛的脏器组织并从中分离到1株革兰阴性短杆菌,进而对分离菌进行了生化鉴定、16S r RN A鉴定及khe基因鉴定,在此基础上,完成了分离菌的致病性试验、... 详细信息

为了对兰州市榆中县某奶牛场犊牛疑似肺炎克雷伯氏菌感染病例进行确诊,本研究采集病死犊牛的脏器组织并从中分离到1株革兰阴性短杆菌,进而对分离菌进行了生化鉴定、16S r RN A鉴定及khe基因鉴定,在此基础上,完成了分离菌的致病性试验、耐药性分析及主要毒力基因的遗传进化分析。结果显示,除H2S试验外,分离菌生化特性均符合肺炎克雷伯氏菌的生化反应特性,其16S r RNA及khe基因序列与G enB ank中肺炎克雷伯氏菌株之间的同源性均高达99%,因此,可将分离菌确定为肺炎克雷伯氏菌,并将其命名为YZ2015。动物试验及耐药性试验结果表明,分离菌具有较强的致病性和多重耐药性。遗传进化分析表明,分离菌的fim H、mrk D及wab G基因与肺炎克雷伯氏菌其他菌株具有很高的同源性,其核酸序列相似性高达95%以上。

关键词：肺炎克雷伯氏菌分离鉴定药敏试验

马麝病毒性出血症RT-PCR诊断方法的建立及初步应用

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农业生物技术学报 2020年第5期28卷 945-950页

作者：王倩陈文哲党清清孙继文包世俊甘肃农业大学动物医学院

马麝病毒性出血症(Moschus chrysogaster (sifanicus) viral hemorrhagic disease, McVHD)为马麝的一种病毒性传染病,发病急、病死率高,严重威胁我国马麝种群的健康和安全。该病病原马麝出血症病毒(Moschus chrysogaster (sifanicus) hemorrhagic disease virus, McHDV)与杯状病毒科(Caliciviridae)兔病毒属(Lagovirus)的兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV)高度同源。为建立该病快速简便的诊断方法,本研究对病原基因组序列及兔出血症病毒基因组序列进行比对分析,设计并合成引物McVHDF/R,在反应条件优化及特异性和敏感性分析的基础上,建立马麝病毒性出血症的反转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)诊断方法。结果表明,所建立的RT-PCR方法可在目标病毒基因组上扩增出1条448 bp的目的片段,而与沙门氏菌(Salmonella)、巴氏杆菌(Pasteurella multocida)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)等10种病原微生物均无交叉反应,且病毒RNA最低检测量为10ng/μL (2.38×10~3拷贝/μL)。临床病料检测结果表明,该方法可快速、有效检出临床病料中的病毒核酸,且检测结果与病原分离结果一致。本研究建立的方法为马麝出血症的诊断和分子流行病学调查提供了技术支持。

关键词：马麝病毒性出血症(McVHD) RT-PCR 诊断

牛支原体武威分离株丙酮酸激酶基因的原核表达及其表达产物的功能检测

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中国预防兽医学报 2020年第4期42卷 341-346页

作者：包世俊冯娜邢小勇温峰琴武小椿甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

为研究牛支原体(Mb)威武分离株丙酮酸激酶(PK)的生物学功能,本研究采用PCR扩增Mb武威分离株PK基因(pyk),在测序的基础上利用over-lap PCR将Mb pyk基因中色氨酸密码子(TGA)突变为可在大肠杆菌中表达的同义密码子TGG,进而构建原核表达质粒... 详细信息

为研究牛支原体(Mb)威武分离株丙酮酸激酶(PK)的生物学功能,本研究采用PCR扩增Mb武威分离株PK基因(pyk),在测序的基础上利用over-lap PCR将Mb pyk基因中色氨酸密码子(TGA)突变为可在大肠杆菌中表达的同义密码子TGG,进而构建原核表达质粒pET-pyk并转化大肠杆菌Rosseta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE检测,结果显示重组蛋白His-PK以可溶性形式表达,且其相对分子质量约为57 ku。纯化该重组蛋白免疫新西兰白兔制备抗血清,采用western blot分析了PK在Mb细胞内的分布,并采用补体依赖的细胞毒试验和粘附及粘附抑制试验分别检测His-PK抗血清介导的补体杀Mb作用及His-PK抗血清对Mb粘附胎牛肺细胞(EBL)的抑制作用,结果表明Mb PK在细胞膜及细胞质中均有分布,且His-PK抗血清具有明显的介导补体杀灭Mb作用和抑制Mb对EBL的粘附作用。本研究为进一步探究Mb的生物学功能奠定了基础。

关键词：牛支原体丙酮酸激酶基因原核表达功能检测

犬IL-18 cDNA的克隆及其免疫学特性

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第5期20卷 526-529页

作者：袁慧君扈荣良包世俊张守峰解放军军需大学军事兽医研究所病毒室甘肃农业大学动物医学系甘肃兰州730070

目的 :获得犬白介素 18(cIL 18)基因并探讨其作为基因疫苗佐剂的免疫效果。方法 :从犬的外周血中分离白细胞 ,经ConA刺激培养 5～ 12h。提取犬白细胞总RNA作为模板 ,通过RT PCR技术扩增cIL 18cDNA。将其克隆到载体pMD18 T中测序 ,并与... 详细信息

目的 :获得犬白介素 18(cIL 18)基因并探讨其作为基因疫苗佐剂的免疫效果。方法 :从犬的外周血中分离白细胞 ,经ConA刺激培养 5～ 12h。提取犬白细胞总RNA作为模板 ,通过RT PCR技术扩增cIL 18cDNA。将其克隆到载体pMD18 T中测序 ,并与已发表的序列进行比较。将cIL 18cDNA克隆入pIRES1neo中 ,构建cIL 18真核表达载体。以 2 0 0 μg∶2 0 0 μg的比例 ,与狂犬病病毒糖蛋白表达载体pIGneo混合免疫犬 ,并与糖蛋白单独免疫犬的免疫应答进行比较。结果 :扩增获得单一长约 0 .6kb核酸带 ,测序证明长度为 5 82bp ,编码 193个氨基酸 ,与从犬肺巨噬细胞中扩增的cIL 18基因的序列完全一致。以构建的表达载体pIIL18与pIGneo混合免疫与用pIG neo单独免疫相比较 ,前者抗狂犬病病毒特异性抗体的水平显著低于后者 ;但混合免疫组犬外周血淋巴细胞对特异性和非特异性抗原刺激的反应性显著高于糖蛋白单独免疫组。结论 :cIL 18全长为 5 82bp,其真核表达载体具有增强细胞免疫应答的能力 ,同时可显著抑制体液免疫应答。本研究为cIL

关键词： IL-18 犬克隆测序免疫学特性

兔出血症病毒GS/YZ分离株VP60截段基因的原核表达及免疫效力评价

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农业生物技术学报 2018年第5期26卷 861-870页

作者：安凯孔惠萍邢小勇温峰琴包世俊甘肃农业大学动物医学院

兔（Lepus）出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）属杯状病毒科（Caliciviridae）兔病毒属（Lagovirus）。VP60为RHDV的衣壳蛋白与免疫原性蛋白,且其抗原表位区主要集中在N端。本研究应用反转录（reverse transcription-PCR,RT-PCR）扩增获得VP60截段基因并将其亚克隆至p MD20-T,构建原核表达质粒pET-RHDV-VP60。转化大肠杆菌（Escherichia coli）Rosetta（DE3）后经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷（isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG）诱导表达,表达产物纯化后免疫Balb/C小鼠（Mus musculus）制备多抗,进而应用间接酶联免疫吸附试验（indirect enzyme linked immunosorbent assay,iELISA）和Western-blot对重组蛋白免疫原性进行分析。用混有弗氏佐剂的重组蛋白、商品苗、RHDV GS/YZ灭活苗、磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline,PBS）分别注射易感兔,14 d后重组蛋白组加强免疫1次,21 d后用HA（hemagglutination）效价为210的RHDV GS/YZ肝脏悬液全部攻毒,观察14 d,并记录结果。结果表明:RHDV GS/YZ株VP60截段基因与RHDV HB株（登录号:KU207100.1）和RHDV WX株（登录号:AF402614.1）同源性最高,达98.6%;RHDV GS/YZ株VP60截段氨基酸序列与与RHDV WX株（登录号:AF402614.1）和RHDV Mexico 89株（登录号:AF295785.1）同源性最高,达99.1%;RHDV GS/YZ株VP60截段片段在Rosetta（DE3）中成功获得表达,且以包涵体形式存在;i ELISA测定制备的多克隆抗体效价为1∶32 000;Western-blot结果显示,重组蛋白具有良好的免疫原性;免疫保护实验表明,免疫组在攻毒后全部存活,保护率为100%,商品苗血凝抑制效价为2;,自制灭活苗为2;,重组蛋白加佐剂为2;,而只注射了PBS的对照组在攻毒后的96 h全部死亡,表明大肠杆菌表达的VP60截段蛋白在混有弗氏佐剂后能够完全抵抗RHDV强毒的攻击。研究结果为RHD亚单位疫苗的研发及其快速诊断方法的建立提供了资料基础。

关键词：兔出血症病毒(RHDV) VP60截段基因原核表达免疫原性免疫效力

牛病毒性腹泻C24V E2截短基因的克隆与鉴定

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牛病毒性腹泻C24V E2截短基因的克隆与鉴定